Oleanolzuur als therapeutisch adjuvans voor diabetes mellitus type 2 (OLTRAD-ONDERZOEK) (OLTRAD)

PROEFONTWERP De OLTRAD-studie is een prospectieve, gerandomiseerde, dubbelblinde, gecontroleerde studie met parallelle groepen, ontworpen om aan te tonen dat de regelmatige inname van een OA-verrijkte functionele olijfolie effectief is als aanvulling op de behandeling met metformine (als monotherapie of in combinatie met andere antidiabetica) bij de metabolische controle van T2DM-patiënten. Het effect van de OA-verrijkte olijfolie zal worden vergeleken met dat van de controleolie, die bestaat uit dezelfde commerciële olijfolie die niet is verrijkt met triterpeen.

In totaal zullen 100 vrijwilligers van beide geslachten worden geselecteerd uit de T2DM-patiënten die worden behandeld bij de dienst Endocrinologie en Voeding van het Universitair Ziekenhuis 'Virgen del Rocío' (Sevilla, SPANJE).

BEREKENING VAN DE STEEKPROEFGROOTTE Serumgeglycosyleerde hemoglobine (HbA1c) wordt aangenomen als de belangrijkste kwantitatieve variabele voor de analyse van de glykemische controle. De nulhypothese in de onderzoeksopzet is dat de op OA gebaseerde dieetinterventie de baseline-serum-HbA1c-waarden van patiënten met minstens 7% zal verlagen, vergeleken met de controlegroep. Om deze eenzijdige hypothesetest te testen met een betrouwbaarheidsniveau van 95% (α-risico = 0,05) en een power van 95% (β-risico = 0,05), is een steekproefgrootte van 44 vrijwilligers per groep vereist. Vanwege de kenmerken van het onderzoek (een levensstijlinterventie op lange termijn) kan er echter worden uitgegaan van een deelnemersverlies tot 15%, wat resulteert in een aangepaste steekproefomvang van 50 individuen per groep.

RANDOMISATIE Eenmaal gerecruteerd zullen de 100 T2DM-patiënten willekeurig worden toegewezen aan een van de twee studiegroepen. Vijftig personen zullen worden toegewezen aan de interventiegroep, die de OA-verrijkte functionele olijfolie zal innemen, terwijl de andere 50 vrijwilligers zullen worden toegewezen aan de controlegroep, die dezelfde niet-verrijkte olijfolie zal krijgen. Op het moment van opname zal het onderzoeksverpleegkundig personeel telefonisch de klinische coördinator van het onderzoek (hoofdonderzoeker 2 van het project) verzoeken om de deelnemers aan de onderzoeksgroepen toe te wijzen (gecentraliseerde randomisatie). Toewijzing aan deze groepen zal plaatsvinden met behulp van computergegenereerde tabellen met willekeurige getallen. Er zullen vier randomisatiestrata worden samengesteld op basis van geslacht en leeftijd (tot 50 jaar).

INTERVENTIE Deelnemers krijgen de instructie om 55 ml/dag van de toegewezen olie in te nemen, bij voorkeur rauw en vrijelijk verdeeld over de drie hoofdmaaltijden. Zowel de OA-verrijkte olijfolie als de controleolie zullen worden geleverd met alfanumerieke codes waarvan de correspondentie alleen bekend zal zijn bij hoofdonderzoeker 1 van het project. Dit zorgt ervoor dat de klinische onderzoekers en deelnemers verblind worden met betrekking tot het toegewezen type olijfolie.

FOLLOW-UP Deelnemers aan de klinische proef worden gedurende 12 maanden vanaf inschrijving gevolgd, volgens een plan van driemaandelijkse bezoeken.

Op het moment van rekrutering en daarna elke drie maanden worden de antropometrische, bloeddruk- en hartslagmetingen van de deelnemers gemeten. Ook worden ze gevraagd naar maag-darmklachten of andere soorten klachten, en vullen ze een vragenlijst in over leefstijl (voeding, lichamelijke activiteit, alcohol- en tabaksgebruik), medische aandoeningen en medicijngebruik.

Ook aan het begin van deelname aan het onderzoek en daarna elke drie maanden zullen nuchtere bloedmonsters worden afgenomen uit de cubitale ader, die zullen worden verzameld in steriele plastic buizen met een vacuümsysteem. Op dezelfde manier verstrekken de deelnemers aliquots van hun eerste ochtendurine in steriele plastic buizen. De analytische bepalingen in bloed en urine zullen worden uitgevoerd in het Klinische Biochemie en Analyse Laboratorium van het Universitair Ziekenhuis 'Virgen del Rocío' in Sevilla (HUVR).

Bovendien zullen aliquots plasma naar het 'Instituto de la Grasa' (IG-CSIC) worden gestuurd voor aanvullende biochemische bepalingen. Laboratoriumtechnici van beide instellingen zullen de monsters ontvangen die zijn geïdentificeerd met alfanumerieke ID-codes en zullen daarom blind zijn voor de interventiegroepen.

Tijdens deze driemaandelijkse bezoeken nemen vrijwilligers deel aan sessies van het voedingsvoorlichtingsprogramma en ontvangen zij gratis 6 liter van de toegewezen olie. De naleving van de dieetinterventie zal elk kwartaal worden beoordeeld aan de hand van de zelfgerapporteerde nalevingstest van Haynes-Sackett en de teruggave van lege flessen die vermoedelijk zijn geconsumeerd.

Het primaire resultaat van het onderzoek is de verbetering van de glykemische controle, beoordeeld aan de hand van de evolutie van HbA1c. Als secundaire resultaten zullen we gegevens verkrijgen over antropometrische en klinische variabelen, evenals over biochemische parameters van bloed en urine.

ANAMNESE EN KLINISCH ONDERZOEK VAN DEELNEMERS De medische onderzoekers van het project hebben toegang tot de elektronische medische dossiers van de deelnemers in het platform DIRAYA van de Andalusische Gezondheidsdienst, en zullen de anamnese en het lichamelijk onderzoek van de deelnemers uitvoeren, waaronder vitale gegevens. en algemene medische en chirurgische geschiedenis, evenals de gevolgde farmacologische behandelingen. Ook zal informatie worden verkregen over levensstijl, perceptie van het eigen lichaamsbeeld, voeding en het type en de intensiteit van fysieke activiteit. Daarnaast zal een algemeen klinisch onderzoek worden uitgevoerd, inclusief algemeen uiterlijk en inspectie van handen en armen, voeten en benen, huid, gezicht, ogen, mond, nek, buik, oedeem, lymfeklieren en vitale functies (temperatuur, pols, ademhalingsfrequentie en bloeddruk).

ANTROPOMETRISCHE STUDIE EN LICHAAMSAMENSTELLING Het antropometrische onderzoek omvat de bepaling van het totale lichaamsgewicht, de lengte, de body mass index (BMI), evenals de taille- en heupomtrek. De studie en evaluatie van deze variabelen zal worden uitgevoerd volgens de richtlijnen van de International Society for the Advancement of Kinanthropometry (ISAK). De studie van de lichaamssamenstelling zal worden uitgevoerd door middel van elektrische bio-impedantie. Vetmassa, vetvrije massa, spiermassa, totale watermassa, botmassa, basaal metabolisme en visceraal vet zullen met deze techniek worden gekwantificeerd, met behulp van gevalideerde voorspellingsvergelijkingen aangepast voor leeftijd en geslacht.

BEOORDELING VAN DE VOEDSELINNAME EN VOEDINGSTRAINING Er zal een voedingseducatieprogramma worden geïmplementeerd om de voedselinname van de deelnemers te beoordelen en de naleving van de gegeven voedingsaanbevelingen te versterken. Om de voedselinname te meten, zullen we het registratieformulier voor voedselinname gebruiken, ontworpen door de Universiteit van Navarra (Spanje) en met succes gebruikt in andere onderzoeken, zoals de PREvención con DIEta MEDiterránea (PREDIMED) studie. Dit formulier is een gevalideerd hulpmiddel dat de voedselinname kwantificeert in termen van voedselporties of voedselgroepen voor volwassenen die in Spanje wonen. Aan de andere kant zullen alle deelnemers deelnemen aan workshops waar ze specifieke voedingsaanbevelingen zullen ontvangen voor patiënten met T2DM, en ze zullen geïnstrueerd worden over een gezond dieet, de beste voedselopties en adequate porties, waarbij sterk bewerkte voedingsmiddelen, cakes, suiker, enz. beperkt worden. vette voedingsmiddelen, maar ook suikerhoudende en alcoholische dranken. Daarnaast krijgen patiënten informatie over recepten, seizoensgebonden boodschappenlijstjes en het gebruik van olijfolie bij het koken en aankleden. Ieder kwartaal worden de eetgewoonten van de deelnemers geanalyseerd door middel van een 24-uurs recall-vragenlijst. De 'NUTRIUM'-software (https://nutrium.com/; Braga; Portugal) voor de voedingsevaluatie van de diëten zal worden gebruikt.

BLOEDBIOCHEMIE BIJ HUVR In ulnaire bloedmonsters waren bepalingen gerelateerd aan circulerende lipiden [totale triglyceriden, totaal cholesterol, LDL, HDL, totaal apolipoproteïne B en lipoproteïne A]; glucosehomeostase [glycemie, insulinemie, C-peptide, HOMA-IR-index, HbA1c]; oxidatieve stress en ontstekingen [urinezuur, bilirubine, malondialdehyde, ultragevoelig C-reactief proteïne, schildklierstimulerend hormoon (TSH)], evenals die geassocieerd met lever- en nierbeschadiging [lactaatdehydrogenase (LDH), levertransaminasen (ALT, AST , GGT) en creatinine] zullen worden uitgevoerd.

Het plasmaniveau van vitamine B12 zal ook worden beoordeeld. Bovendien zal het mogelijke optreden van leverfibrose worden geëvalueerd via de Hepamet Fibrosis Score, een niet-invasieve methode die een score berekent waarbij rekening wordt gehouden met factoren zoals leeftijd, geslacht, aanwezigheid van diabetes, glucosewaarden, insuline, albumine, bloedplaatjes, en AST. Dit hulpmiddel, ontworpen door het Sevilla Instituut voor Biogeneeskunde (IBiS), is geïndiceerd voor het beoordelen van vermoedelijke fibrose bij patiënten met obesitas, diabetes, metabool syndroom, hepatische steatose en/of abnormale leverfunctiemarkers. De methode biedt diagnostische betrouwbaarheid en een kosten-batenverhouding die superieur is aan andere methoden, zoals de FIB-4 en de NAFLD Fibrosis Score.

CONTINU BLOEDGLUCOSEMONITORING Plasmaglucose zal continu worden gecontroleerd met behulp van het 'FreeStyle Libre' subcutane systeem (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; VS). De sensoren worden tijdens de proef op twee tijdstippen aan de deelnemers bevestigd: bij aanvang en na 12 maanden follow-up, en zullen gedurende 48 uur gegevens verzamelen. Met dit systeem zullen verschillende glycemische parameters worden bepaald, zoals het gebied onder de curve (AUC), de gemiddelde amplitude van de glycemische excursie (MAGE), de gemiddelde glycemie, evenals de standaarddeviatie (SD) en de coëfficiënt van variatie (CV).

PLASMABIOCHEMIE BIJ IG-CSIC De onderzoekers van de IG-CSIC zullen een aantal complementaire bepalingen uitvoeren in plasmamonsters, zoals de plasmaconcentraties van OA, de glutathion (GSH en GSSG) niveaus, de vetzuursamenstelling, serumadipokines (ceruloplasmine adiponectine, leptine, resistine en ghreline). Serum Antioxidant-enzymen (superoxide-dismutase, catalase) en pro-inflammatoire cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6) zullen ook worden bepaald.

Aan de andere kant zal de VLDL-fractie van plasmalipoproteïnen worden geïsoleerd door ultracentrifugatie (230.000 x g gedurende 18 uur bij 4 °C). In deze deeltjes wordt het totale gehalte aan vetzuren, triglyceriden, diglyceriden, fosfolipiden en totaal apolipoproteïne B gemeten.

URINEANALYSE De eerste ochtendurinemonsters worden geanalyseerd op de gebruikelijke fysische, chemische en microscopische bepalingen (pH, dichtheid, glycosurie, ketonen, nitrieten, urobilinogeen, bilirubine, sediment, leukocyten, microalbuminurie/g creatinine). De bepaling van deze parameters zal ook worden uitgevoerd in de faciliteiten van het laboratorium voor klinische biochemie en analyse van de universitaire ziekenhuizen 'Virgen del Rocío' in Sevilla.

STATISTISCHE ANALYSE De proef zal worden uitgevoerd volgens het ‘intention-to-treat’-principe (ITT). Kwalitatieve variabelen zullen worden uitgedrukt door hun absolute en relatieve frequenties, terwijl de kwantitatieve variabelen met een normale verdeling zullen worden uitgedrukt door het gemiddelde en de standaarddeviatie en die met een niet-normale verdeling door de mediaan en het interkwartielbereik (IQR). Vergelijkingen tussen studiegroepen voor kwalitatieve variabelen zullen worden uitgevoerd met de Chi-kwadraat- en McNemar-tests, terwijl vergelijkingen voor kwantitatieve variabelen zullen worden uitgevoerd met de Student's t-test en ANOVA. De homogeniteit van de populaties in de toewijzingsgroepen zal worden geëvalueerd met behulp van de Mann-Whitney-Wilcoxon U-test. Alle P-waarden zijn tweezijdig bij α = 0,05. Statistische analyse zal worden uitgevoerd met SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, VS) software