Oleanolsyre som terapeutisk adjuvans for type 2 diabetes mellitus (OLTRAD STUDY) (OLTRAD)

PRØVEDESIGN OLTRAD-studien er en prospektiv, parallellgruppe, randomisert, dobbeltblind, kontrollert studie designet for å vise at regelmessig inntak av en OA-anriket funksjonell olivenolje er effektivt som et tillegg til metforminbehandling (som monoterapi eller i kombinasjon med andre antidiabetika) i metabolsk kontroll av T2DM-pasienter. Effekten av den OA-anrikede olivenoljen vil bli sammenlignet med effekten av kontrolloljen, som består av den samme kommersielle olivenoljen som ikke er tilsatt triterpen.

Totalt 100 frivillige av begge kjønn vil bli valgt ut blant T2DM-pasientene som behandles ved Endocrinology and Nutrition Service ved 'Virgen del Rocío' universitetssykehus (Sevilla, SPANIA).

BEREGNING AV PRØVESTØRRELSE Serumglykosylert hemoglobin (HbA1c) brukes som den viktigste kvantitative variabelen for analyse av glykemisk kontroll. Nullhypotesen angitt i studiedesignet er at den OA-baserte diettintervensjonen vil redusere baseline serum HbA1c-nivåer til pasienter med minst 7 %, sammenlignet med kontrollgruppen. For å teste denne ensidige hypotesetesten med et 95 % konfidensnivå (α risiko = 0,05) og 95 % power (β risiko = 0,05), kreves det en prøvestørrelse på 44 frivillige per gruppe. På grunn av egenskapene til studien (en langsiktig livsstilsintervensjon) kan det imidlertid antas deltakertap på opptil 15 %, noe som resulterer i en justert utvalgsstørrelse på 50 individer per gruppe.

RANDOMISERING Når de er rekruttert, vil de 100 T2DM-pasientene bli tilfeldig tildelt en av de to studiegruppene. Femti individer vil bli tildelt intervensjonsgruppen, som vil innta den OA-anrikede funksjonelle olivenoljen, mens de andre 50 frivillige vil bli tildelt kontrollgruppen, som vil motta den samme ikke-anrikede olivenoljen. Ved opptak vil studiesykepleiepersonellet per telefon be om tildeling av deltakere til studiegruppene (sentralisert randomisering). Tildeling til disse gruppene vil skje ved hjelp av datamaskingenererte tabeller med tilfeldige tall. Fire randomiseringslag vil bli konstruert etter kjønn og alder (av 50 år).

INTERVENSJON Deltakerne vil bli bedt om å innta 55 ml/dag av den tildelte oljen, fortrinnsvis rå og fritt fordelt mellom de tre hovedmåltidene. Både den OA-anrikede olivenoljen og kontrolloljen vil bli levert merket med alfanumeriske koder, hvor korrespondansen kun vil være kjent av hovedetterforsker 1 i prosjektet. Dette sikrer blinding av de kliniske forskerne og deltakerne med hensyn til typen olivenolje som er tildelt.

OPPFØLGING Deltakere i den kliniske studien vil bli fulgt opp i 12 måneder fra påmelding, i henhold til en plan med kvartalsbesøk.

Ved rekruttering og hver tredje måned deretter, vil deltakerne bli målt for antropometriske målinger, blodtrykks- og hjertefrekvensmålinger. De vil også bli spurt om gastrointestinale lidelser eller andre typer plager, og vil fylle ut et spørreskjema om livsstil (kosthold, fysisk aktivitet, alkohol- og tobakksbruk), medisinske tilstander og medisinbruk.

Også ved starten av deltakelsen i studien og hver tredje måned deretter vil det bli tatt fastende blodprøver fra cubitalvenen, som samles i sterile plastrør med vakuumsystem. På samme måte vil deltakerne gi alikvoter av sin første morgenurin i sterile plastrør. De analytiske bestemmelsene i blod og urin vil bli utført i det kliniske biokjemi- og analyselaboratoriet ved 'Virgen del Rocío' universitetssykehus i Sevilla (HUVR).

I tillegg vil alikvoter av plasma bli sendt til 'Instituto de la Grasa' (IG-CSIC) for komplementære biokjemiske bestemmelser. Laboratorieteknikere fra begge institusjonene vil motta prøvene identifisert med alfanumeriske ID-koder og vil derfor bli blindet for intervensjonsgruppene.

I disse kvartalsbesøkene vil frivillige delta i økter av ernæringsopplæringsprogrammet og vil motta 6 L av den tildelte oljen gratis. Overholdelse av kosttilskuddet vil bli vurdert kvartalsvis gjennom Haynes-Sacketts selvrapporterte samsvarstest og retur av tomme flasker som antagelig er konsumert.

Det primære resultatet av studien er forbedringen i glykemisk kontroll, vurdert av utviklingen av HbA1c. Som sekundære resultater vil vi innhente data om antropometriske og kliniske variabler, samt om biokjemiske parametere for blod og urin.

ANAMNESE OG KLINISK UNDERSØKELSE AV DELTAKERE De medisinske forskerne i prosjektet har tilgang til de elektroniske journalene til deltakerne i plattformen DIRAYA til Andalusian Health Service, og vil utføre anamnese og fysisk undersøkelse av deltakerne, som vil inkludere viktige data og generell medisinsk og kirurgisk historie, samt de farmakologiske behandlingene som fulgte. Det vil også bli innhentet informasjon om livsstil, oppfatning av eget kroppsbilde, kosthold og type og intensitet av fysisk aktivitet. I tillegg vil det bli gjennomført en generell klinisk undersøkelse inkludert generelt utseende og inspeksjon av hender og armer, føtter og ben, hud, ansikt, øyne, munn, nakke, mage, ødem, lymfeknuter og vitale tegn (temperatur, puls, respirasjonsfrekvens og blodtrykk).

ANTROPOMETRISK STUDIE OG KROPPSSAMMENSETNING Den antropometriske studien vil omfatte bestemmelse av total kroppsvekt, høyde, kroppsmasseindeks (BMI), samt midje- og hofteomkretser. Studien og evalueringen av disse variablene vil bli utført i henhold til retningslinjene til International Society for the Advancement of Kinanthropometry (ISAK). Studiet av kroppssammensetning vil bli utført ved hjelp av elektrisk bioimpedans. Fettmasse, mager masse, muskelmasse, total vann, beinmasse, basal metabolisme og visceralt fett vil kvantifiseres med denne teknikken ved å bruke validerte prediksjonsligninger justert for alder og kjønn.

VURDERING AV MATINNTAK OG ERNÆRINGSTRENING Et ernæringsopplæringsprogram vil bli implementert for å vurdere matinntaket til deltakerne og forsterke etterlevelsen av kostholdsanbefalingene som er gitt. For å måle matinntak vil vi bruke registreringsskjemaet for matinntak designet av University of Navarra (Spania) og brukt med suksess i andre forsøk, for eksempel PREvención con DIEta MEDiterránea (PREDIMED) studien. Dette skjemaet er et validert verktøy som kvantifiserer matinntak i form av matporsjoner eller matgrupper for voksne som bor i Spania. På den annen side vil alle deltakerne bli med på workshops der de vil motta spesifikke kostholdsanbefalinger for pasienter med T2DM, og de vil bli instruert om et sunt kosthold, de beste matalternativene og tilstrekkelige porsjoner, noe som begrenser høyt bearbeidet mat, kaker, sukker, fet mat samt sukkerholdige og alkoholholdige drikker. I tillegg vil pasienter få informasjon om oppskrifter, sesongbaserte handlelister og bruk av olivenolje til matlaging og dressing. Matvanene til deltakerne vil bli analysert kvartalsvis ved hjelp av et 24-timers tilbakekallingsskjema. 'NUTRIUM'-programvaren (https://nutrium.com/; Braga; Portugal) for ernæringsmessig evaluering av diettene vil bli brukt.

BLODBIOKJEMI I HUVR I ulnar blodprøver, bestemmelser relatert til sirkulerende lipider [totalt triglyserider, totalkolesterol, LDL, HDL, totalt apolipoprotein B og lipoprotein A]; glukosehomeostase [glykemi, insulinemi, C-peptid, HOMA-IR-indeks, HbA1c]; oksidativt stress og betennelse [urinsyre, bilirubin, malondialdehyd, ultrasensitivt C-reaktivt protein, thyreoideastimulerende hormon (TSH)], samt de som er forbundet med lever- og nyreskade [laktatdehydrogenase (LDH), levertransaminaser (ALT, AST) , GGT ) og kreatinin] vil bli utført.

Plasmanivået av vitamin B12 vil også bli vurdert. I tillegg vil mulig forekomst av leverfibrose bli evaluert gjennom Hepamet Fibrosis Score, en ikke-invasiv metode som beregner en skåre som tar hensyn til faktorer som alder, kjønn, tilstedeværelse av diabetes, glukosenivåer, insulin, albumin, blodplater, og AST. Dette verktøyet, designet av Sevilla Institute of Biomedicine (IBiS), er indisert for å vurdere mistenkt fibrose hos pasienter med fedme, diabetes, metabolsk syndrom, leversteatose og/eller unormale leverfunksjonsmarkører. Metoden tilbyr diagnostisk pålitelighet og et kostnads-/nytteforhold som er overlegent andre metoder, slik som FIB-4 og NAFLD Fibrosis Score.

KONTINUERLIG BLODSUKKEROVERVÅKING Plasmaglukose vil bli kontinuerlig overvåket ved bruk av 'FreeStyle Libre' subkutane system (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; USA). Sensorene vil festes til deltakerne to ganger gjennom hele forsøket: ved baseline og etter 12 måneders oppfølging, og vil samle inn data i 48 timer. Med dette systemet vil forskjellige glykemiske parametere bli bestemt, slik som arealet under kurven (AUC), gjennomsnittlig amplitude av den glykemiske ekskursjonen (MAGE), gjennomsnittlig glykemi, samt standardavviket (SD) og koeffisienten på variasjon (CV).

PLASMABIOKJEMI I IG-CSIC Etterforskerne av IG-CSIC vil utføre en rekke komplementære bestemmelser i plasmaprøver, slik som plasmakonsentrasjoner av OA, glutationnivåene (GSH og GSSG), fettsyresammensetningen, serumadipokiner (ceruloplasmin) , adiponektin, leptin, resistin og ghrelin). Serumantioksidantenzymer (superoksiddismutase, katalase) og proinflammatoriske cytokiner (TNF-α, IL-1β, IL-6) vil også bli bestemt.

På den annen side vil VLDL-fraksjonen av plasmalipoproteiner bli isolert ved ultrasentrifugering (230 000 × g i 18 timer ved 4 °C). I disse partiklene vil det totale innholdet av fettsyrer, triglyserider, diglyserider, fosfolipider og totalt Apolipoprotein B måles.

URINANALYSE De første morgenurinprøvene vil bli analysert for de vanlige fysiske, kjemiske og mikroskopiske bestemmelsene (pH, tetthet, glykosuri, ketoner, nitritter, urobilinogen, bilirubin, sediment, leukocytter, mikroalbuminuri/g kreatinin). Bestemmelsen av disse parameterne vil også bli utført i fasilitetene til laboratoriet for klinisk biokjemi og analyse ved 'Virgen del Rocío' universitetssykehus i Sevilla.

STATISTISK ANALYSE Forsøket vil bli utført i henhold til ITT-prinsippet (intensjon-å-behandle). Kvalitative variabler vil bli uttrykt ved deres absolutte og relative frekvenser, mens de kvantitative med normalfordeling vil uttrykkes ved gjennomsnitt og standardavvik og de med ikke-normal fordeling ved median og interkvartilområde (IQR). Sammenligninger mellom studiegrupper for kvalitative variabler vil bli utført med Chi-square og McNemars tester, mens sammenligninger for kvantitative variabler vil bli utført med Studentens t-test og ANOVA. Homogeniteten til populasjonene som er inkludert i tildelingsgruppene vil bli evaluert ved hjelp av Mann-Whitney-Wilcoxon U-test. Alle P-verdier vil være to-halede ved α = 0,05. Statistisk analyse vil bli utført med SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA) programvare