Oleanolsyre som terapeutisk adjuvans til type 2-diabetes mellitus (OLTRAD STUDY) (OLTRAD)

FORSØGSDESIGN OLTRAD-studiet er et prospektivt, parallelgruppe, randomiseret, dobbeltblindt, kontrolleret forsøg designet til at vise, at det regelmæssige indtag af en OA-beriget funktionel olivenolie er effektiv som supplement til metforminbehandling (som monoterapi eller i kombination med andre antidiabetiske lægemidler) i den metaboliske kontrol af T2DM-patienter. Effekten af ​​den OA-berigede olivenolie vil blive sammenlignet med virkningen af ​​kontrololien, som består af den samme kommercielle olivenolie, der ikke er beriget med triterpen.

I alt 100 frivillige af begge køn vil blive udvalgt blandt de T2DM-patienter, der behandles på Endocrinology and Nutrition Service på 'Virgen del Rocío' Universitetshospitalet (Sevilla, SPANIEN).

BEREGNING AF PRØVESTØRRELSE Serumglykosyleret hæmoglobin (HbA1c) anvendes som den vigtigste kvantitative variabel til analyse af glykæmisk kontrol. Nulhypotesen angivet i forsøgsdesignet er, at den OA-baserede diætintervention vil reducere baseline serum HbA1c niveauer hos patienter med mindst 7 % sammenlignet med kontrolgruppen. For at teste denne ensidige hypotesetest med et 95 % konfidensniveau (α risiko = 0,05) og 95 % power (β risiko = 0,05), kræves en stikprøvestørrelse på 44 frivillige pr. gruppe. På grund af undersøgelsens karakteristika (en langsigtet livsstilsintervention) kan der dog antages deltagertab på op til 15 %, hvilket resulterer i en justeret stikprøvestørrelse på 50 individer pr. gruppe.

RANDOMISERING Når de er rekrutteret, vil de 100 T2DM-patienter blive tilfældigt tildelt en af ​​de to undersøgelsesgrupper. 50 personer vil blive tildelt interventionsgruppen, som vil indtage den OA-berigede funktionelle olivenolie, mens de øvrige 50 frivillige vil blive tildelt kontrolgruppen, som vil modtage den samme ikke-berigede olivenolie. På tidspunktet for optagelsen vil undersøgelsens plejepersonale telefonisk anmode den kliniske koordinator af forsøget (Principal Investigator 2 i projektet) om tildeling af deltagere til undersøgelsesgrupperne (centraliseret randomisering). Tildeling til disse grupper vil blive foretaget ved hjælp af computergenererede tabeller med tilfældige tal. Fire randomiseringslag vil blive konstrueret efter køn og alder (afsnit 50 år).

INTERVENTION Deltagerne vil blive instrueret i at indtage 55 ml/dag af den tildelte olie, helst rå og frit fordelt mellem de tre hovedmåltider. Både den OA-berigede olivenolie og kontrololien vil blive leveret mærket med alfanumeriske koder, hvis korrespondance kun vil være kendt af projektets hovedefterforsker 1. Dette sikrer blinding af de kliniske forskere og deltagere med hensyn til den tildelte type olivenolie.

OPFØLGNING Deltagerne i det kliniske forsøg vil blive fulgt op i 12 måneder fra tilmeldingen i henhold til en plan med kvartalsvise besøg.

På rekrutteringstidspunktet og hver tredje måned derefter vil deltagerne blive målt for antropometriske målinger, blodtryks- og pulsmålinger. De vil også blive spurgt om mave-tarm-lidelser eller andre typer af klager og vil udfylde et spørgeskema om livsstil (kost, fysisk aktivitet, alkohol- og tobaksforbrug), medicinske tilstande og medicinbrug.

Ligeledes i begyndelsen af ​​deltagelse i undersøgelsen og hver tredje måned derefter vil der blive udtaget fastende blodprøver fra cubitalvenen, som opsamles i sterile plastikrør med vakuumsystem. På samme måde vil deltagerne give alikvoter af deres første morgenurin i sterile plastikrør. De analytiske bestemmelser i blod og urin vil blive udført i det kliniske biokemi- og analyselaboratorium på 'Virgen del Rocío' Universitetshospitalet i Sevilla (HUVR).

Derudover vil alikvoter af plasma blive sendt til 'Instituto de la Grasa' (IG-CSIC) med henblik på komplementære biokemiske bestemmelser. Laboratorieteknikere fra begge institutioner vil modtage prøverne identificeret med alfanumeriske ID-koder og vil derfor blive blindet over for interventionsgrupperne.

I disse kvartalsbesøg vil frivillige deltage i sessioner af ernæringsuddannelsesprogrammet og vil modtage 6 L af den tildelte olie gratis. Overholdelse af diætinterventionen vil blive vurderet kvartalsvis gennem Haynes-Sacketts selvrapporterede overensstemmelsestest og returnering af tomme flasker, der formentlig er forbrugt.

Det primære resultat af forsøget er forbedringen af ​​den glykæmiske kontrol, vurderet ud fra udviklingen af ​​HbA1c. Som sekundære resultater vil vi indhente data om antropometriske og kliniske variabler samt om biokemiske parametre for blod og urin.

ANAMNESE OG KLINISK UNDERSØGELSE AF DELTAGERE De medicinske forskere i projektet har adgang til deltagernes elektroniske journaler på platformen DIRAYA for det andalusiske sundhedsvæsen og vil udføre anamnese og fysisk undersøgelse af deltagerne, som vil omfatte vitale data og generel medicinsk og kirurgisk historie, samt de efterfølgende farmakologiske behandlinger. Der vil også blive indhentet information om livsstil, opfattelse af eget kropsbillede, kost og type og intensitet af fysisk aktivitet. Derudover vil der blive gennemført en generel klinisk undersøgelse, herunder generel udseende og inspektion af hænder og arme, fødder og ben, hud, ansigt, øjne, mund, nakke, mave, ødem, lymfeknuder og vitale tegn (temperatur, puls, åndedrætsfrekvens og blodtryk).

ANTROPOMETRISK UNDERSØGELSE OG KROPSSAMMENSÆTNING Den antropometriske undersøgelse vil omfatte bestemmelse af total kropsvægt, højde, kropsmasseindeks (BMI) samt talje- og hofteomkredse. Undersøgelsen og evalueringen af ​​disse variabler vil blive udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra International Society for the Advancement of Kinanthropometry (ISAK). Studiet af kropssammensætning vil blive udført ved hjælp af elektrisk bioimpedans. Fedtmasse, mager masse, muskelmasse, total vand, knoglemasse, basal metabolisme og visceralt fedt vil blive kvantificeret med denne teknik ved hjælp af validerede forudsigelsesligninger justeret for alder og køn.

VURDERING AF MADINDTAG OG ERNÆRINGSTRÆNING Der vil blive implementeret et ernæringsuddannelsesprogram for at vurdere deltagernes fødeindtag og styrke overholdelse af de givne kostanbefalinger. For at måle fødeindtagelsen vil vi bruge registreringsformularen for fødeindtagelse, der er designet af University of Navarra (Spanien) og brugt med succes i andre forsøg, såsom PREvención con DIEta MEDiterránea (PREDIMED) undersøgelsen. Denne formular er et valideret værktøj, der kvantificerer madindtagelse i form af madportioner eller fødevaregrupper for voksne, der bor i Spanien. På den anden side vil alle deltagere deltage i workshops, hvor de vil modtage specifikke kostanbefalinger til patienter med T2DM, og de vil blive instrueret i en sund kost, de bedste madmuligheder og passende portioner, hvilket begrænser stærkt forarbejdede fødevarer, kager, sukker, fed mad samt sukkerholdige og alkoholiske drikke. Derudover vil patienter få information om opskrifter, sæsonbestemte indkøbslister og brugen af ​​olivenolie til madlavning og dressing. Deltagernes spisevaner vil blive analyseret kvartalsvis ved hjælp af et 24-timers tilbagekaldelsesspørgeskema. 'NUTRIUM'-softwaren (https://nutrium.com/; Braga; Portugal) til den ernæringsmæssige evaluering af diæterne vil blive brugt.

BLODBIOKEMI I HUVR I ulnar blodprøver, bestemmelser relateret til cirkulerende lipider [totalt triglycerider, totalt kolesterol, LDL, HDL, totalt apolipoprotein B og lipoprotein A]; glucosehomeostase [glykæmi, insulinæmi, C-peptid, HOMA-IR-indeks, HbA1c]; oxidativt stress og inflammation [urinsyre, bilirubin, malondialdehyd, ultrafølsomt C-reaktivt protein, thyreoidea-stimulerende hormon (TSH)], såvel som dem, der er forbundet med lever- og nyreskade [lactatdehydrogenase (LDH), levertransaminaser (ALT, AST) , GGT ) og kreatinin] vil blive udført.

Plasmaniveauet af vitamin B12 vil også blive vurderet. Derudover vil den mulige forekomst af leverfibrose blive evalueret gennem Hepamet Fibrosis Score, en ikke-invasiv metode, der beregner en score under hensyntagen til faktorer som alder, køn, tilstedeværelse af diabetes, glucoseniveauer, insulin, albumin, blodplader, og AST. Dette værktøj, designet af Seville Institute of Biomedicine (IBiS), er indiceret til at vurdere formodet fibrose hos patienter med fedme, diabetes, metabolisk syndrom, hepatisk steatose og/eller unormale leverfunktionsmarkører. Metoden tilbyder diagnostisk pålidelighed og et cost/benefit-forhold, der er overlegent i forhold til andre metoder, såsom FIB-4 og NAFLD Fibrosis Score.

KONTINUERLIG BLODGLUKOSEOVERVÅGNING Plasmaglukose vil blive monitoreret kontinuerligt ved hjælp af 'FreeStyle Libre' subkutane system (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; USA). Sensorerne vil blive knyttet til deltagerne på to tidspunkter i hele forsøget: ved baseline og efter 12 måneders opfølgning, og vil indsamle data i 48 timer. Med dette system vil forskellige glykæmiske parametre blive bestemt, såsom arealet under kurven (AUC), den gennemsnitlige amplitude af den glykæmiske ekskursion (MAGE), den gennemsnitlige glykæmi, samt standardafvigelsen (SD) og koefficienten for variation (CV).

PLASMABIOKEMI I IG-CSIC Efterforskerne af IG-CSIC vil udføre en række komplementære bestemmelser i plasmaprøver, såsom de plasmatiske koncentrationer af OA, glutathionniveauerne (GSH og GSSG), fedtsyresammensætningen, serumadipokiner (ceruloplasmin) adiponectin, leptin, resistin og ghrelin). Serumantioxidantenzymer (superoxiddismutase, katalase) og proinflammatoriske cytokiner (TNF-α, IL-1β, IL-6) vil også blive bestemt.

På den anden side vil VLDL-fraktionen af ​​plasmalipoproteiner blive isoleret ved ultracentrifugering (230.000 x g i 18 timer ved 4 °C). I disse partikler vil det totale indhold af fedtsyrer, triglycerider, diglycerider, fosfolipider og total Apolipoprotein B blive målt.

URINANALYSE De første morgenurinprøver vil blive analyseret for de sædvanlige fysiske, kemiske og mikroskopiske bestemmelser (pH, tæthed, glykosuri, ketoner, nitritter, urobilinogen, bilirubin, sediment, leukocytter, mikroalbuminuri/g kreatinin). Bestemmelsen af ​​disse parametre vil også blive udført i faciliteterne i laboratoriet for klinisk biokemi og analyse på 'Virgen del Rocío' universitetshospitalerne i Sevilla.

STATISTISK ANALYSE Forsøget vil blive udført i henhold til intention-to-treat (ITT) princippet. Kvalitative variabler vil blive udtrykt ved deres absolutte og relative frekvenser, hvorimod de kvantitative med normalfordeling vil blive udtrykt ved middelværdi og standardafvigelse og dem med ikke-normal fordeling med median- og interkvartilområdet (IQR). Sammenligninger mellem undersøgelsesgrupper for kvalitative variable vil blive udført med Chi-square og McNemars test, hvorimod sammenligninger for kvantitative variable vil blive udført med Elevens t-test og ANOVA. Homogeniteten af ​​populationerne inkluderet i tildelingsgrupperne vil blive evalueret ved hjælp af Mann-Whitney-Wilcoxon U-testen. Alle P-værdier vil være to-halede ved α = 0,05. Statistisk analyse vil blive udført med SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA) software