Ácido oleanólico como adyuvante terapéutico para la diabetes mellitus tipo 2 (ESTUDIO OLTRAD) (OLTRAD)

DISEÑO DEL ENSAYO El estudio OLTRAD es un ensayo prospectivo, de grupos paralelos, aleatorizado, doble ciego y controlado diseñado para demostrar que la ingesta regular de un aceite de oliva funcional enriquecido con OA es eficaz como complemento del tratamiento con metformina (como monoterapia o en combinación con otros fármacos antidiabéticos) en el control metabólico de los pacientes con DM2. El efecto del aceite de oliva enriquecido con OA se comparará con el del aceite de control, que consiste en el mismo aceite de oliva comercial no fortificado con triterpenos.

Se seleccionarán un total de 100 voluntarios de ambos sexos entre los pacientes con DM2 atendidos en el Servicio de Endocrinología y Nutrición del Hospital Universitario 'Virgen del Rocío' (Sevilla, ESPAÑA).

CÁLCULO DEL TAMAÑO DE LA MUESTRA La hemoglobina glicosilada sérica (HbA1c) se adopta como la principal variable cuantitativa para el análisis del control glucémico. La hipótesis nula establecida en el diseño del ensayo es que la intervención dietética basada en OA reducirá los niveles séricos iniciales de HbA1c de los pacientes en al menos un 7%, en comparación con el grupo de control. Para probar esta prueba de hipótesis unilateral con un nivel de confianza del 95% (riesgo α = 0,05) y un poder del 95% (riesgo β = 0,05), se requiere un tamaño de muestra de 44 voluntarios por grupo. Sin embargo, debido a las características del estudio (una intervención de estilo de vida a largo plazo), se pueden asumir pérdidas de participantes de hasta el 15%, lo que da como resultado un tamaño de muestra ajustado de 50 individuos por grupo.

ALEATORIZACIÓN Una vez reclutados, los 100 pacientes con DM2 serán asignados aleatoriamente a uno de los dos grupos de estudio. Se asignarán cincuenta personas al grupo de intervención, que ingerirá aceite de oliva funcional enriquecido con OA, mientras que los otros 50 voluntarios serán asignados al grupo de control, que recibirá el mismo aceite de oliva no enriquecido. En el momento del ingreso, el personal de enfermería del estudio solicitará telefónicamente al coordinador clínico del ensayo (Investigador Principal 2 del Proyecto) la asignación de los participantes a los grupos de estudio (aleatorización centralizada). La asignación a estos grupos se realizará mediante tablas de números aleatorios generadas por computadora. Se construirán cuatro estratos de aleatorización por sexo y edad (límite de 50 años).

INTERVENCIÓN Se indicará a los participantes que ingieran 55 ml/día del aceite asignado, preferiblemente crudo y distribuido libremente entre las tres comidas principales. Tanto el aceite de oliva enriquecido con OA como el aceite control se entregarán etiquetados con códigos alfanuméricos cuya correspondencia sólo será conocida por el Investigador Principal 1 del proyecto. Esto garantiza el cegamiento de los investigadores clínicos y participantes con respecto al tipo de aceite de oliva asignado.

SEGUIMIENTO Los participantes del ensayo clínico serán seguidos durante 12 meses desde la inscripción, según un plan de visitas trimestrales.

En el momento del reclutamiento y cada tres meses a partir de entonces, se medirá a los participantes con medidas antropométricas, de presión arterial y frecuencia cardíaca. También se les preguntará sobre trastornos gastrointestinales u otro tipo de molestias, y completarán un cuestionario sobre estilo de vida (dieta, actividad física, consumo de alcohol y tabaco), condiciones médicas y uso de medicamentos.

También al inicio de la participación en el estudio y posteriormente cada tres meses, se extraerán muestras de sangre en ayunas de la vena cubital, que se recogerán en tubos de plástico esterilizados con sistema de vacío. De manera similar, los participantes proporcionarán alícuotas de su primera orina de la mañana en tubos de plástico esterilizados. Las determinaciones analíticas en sangre y orina se realizarán en el Laboratorio de Análisis y Bioquímica Clínica del Hospital Universitario 'Virgen del Rocío' de Sevilla (HUVR).

Además, se enviarán alícuotas de plasma al Instituto de la Grasa (IG-CSIC) para determinaciones bioquímicas complementarias. Los técnicos de laboratorio de ambas instituciones recibirán las muestras identificadas con códigos de identificación alfanuméricos y, por lo tanto, estarán cegados a los grupos de intervención.

En estas visitas trimestrales, los voluntarios participarán en sesiones del programa de educación nutricional y recibirán gratuitamente 6 L del aceite asignado. La adherencia a la intervención dietética se evaluará trimestralmente mediante la prueba de cumplimiento autoinformada de Haynes-Sackett y la devolución de botellas vacías presumiblemente consumidas.

El resultado principal del ensayo es la mejora en el control glucémico, evaluado por la evolución de la HbA1c. Como resultados secundarios obtendremos datos de variables antropométricas y clínicas, así como de parámetros bioquímicos de sangre y orina.

ANAMNESIS Y EXAMEN CLÍNICO DE LOS PARTICIPANTES Los investigadores médicos del proyecto tienen acceso a la historia clínica electrónica de los participantes en la plataforma DIRAYA del Servicio Andaluz de Salud, y realizarán la anamnesis y examen físico de los participantes, que incluirá datos vitales. e historia médica y quirúrgica general, así como los tratamientos farmacológicos seguidos. También se obtendrá información sobre el estilo de vida, la percepción de la propia imagen corporal, la alimentación y el tipo e intensidad de actividad física. Además, se realizará un examen clínico general incluyendo aspecto general e inspección de manos y brazos, pies y piernas, piel, cara, ojos, boca, cuello, abdomen, edema, ganglios linfáticos y signos vitales (temperatura, pulso, frecuencia respiratoria y presión arterial).

ESTUDIO ANTROPOMÉTRICO Y COMPOSICIÓN CORPORAL El estudio antropométrico incluirá la determinación del peso corporal total, la talla, el índice de masa corporal (IMC), así como las circunferencias de cintura y cadera. El estudio y evaluación de estas variables se realizará según las directrices de la Sociedad Internacional para el Avance de la Cineantropometría (ISAK). El estudio de la composición corporal se realizará mediante bioimpedancia eléctrica. La masa grasa, la masa magra, la masa muscular, el agua total, la masa ósea, el metabolismo basal y la grasa visceral se cuantificarán con esta técnica, utilizando ecuaciones de predicción validadas ajustadas por edad y sexo.

EVALUACIÓN DE LA INGESTA ALIMENTARIA Y ENTRENAMIENTO NUTRICIONAL Se implementará un programa de educación nutricional para evaluar la ingesta alimentaria de los participantes y reforzar el cumplimiento de las recomendaciones dietéticas impartidas. Para medir la ingesta de alimentos utilizaremos el formulario de registro de ingesta de alimentos diseñado por la Universidad de Navarra (España) y utilizado con éxito en otros ensayos, como el estudio PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED). Este formulario es una herramienta validada que cuantifica la ingesta de alimentos en términos de porciones de alimentos o grupos de alimentos para adultos residentes en España. Por otro lado, todos los participantes se sumarán a talleres donde recibirán recomendaciones dietéticas específicas para pacientes con DM2, y se les instruirá sobre una dieta saludable, las mejores opciones de alimentos y porciones adecuadas, limitando los alimentos altamente procesados, pasteles, azúcar, alimentos grasos, así como bebidas azucaradas y alcohólicas. Además, los pacientes obtendrán información sobre recetas, listas de compras de temporada y el uso de aceite de oliva para cocinar y aderezar. Los hábitos alimentarios de los participantes se analizarán trimestralmente mediante un cuestionario de recordatorio de 24 horas. El software 'NUTRIUM' (https://nutrium.com/; Braga; Portugal) para la evaluación nutricional de las dietas.

BIOQUÍMICA DE LA SANGRE EN HUVR En muestras de sangre cubital, determinaciones relacionadas con los lípidos circulantes [triglicéridos totales, colesterol total, LDL, HDL, apolipoproteína B total y lipoproteína A]; homeostasis de la glucosa [glucemia, insulinemia, péptido C, índice HOMA-IR, HbA1c]; estrés oxidativo e inflamación [ácido úrico, bilirrubina, malondialdehído, proteína C reactiva ultrasensible, hormona estimulante del tiroides (TSH)], así como los asociados con daño hepático y renal [lactato deshidrogenasa (LDH), transaminasas hepáticas (ALT, AST , GGT ) y creatinina].

También se evaluará el nivel plasmático de vitamina B12. Además, se evaluará la posible aparición de fibrosis hepática a través del Hepamet Fibrosis Score, un método no invasivo que calcula una puntuación teniendo en cuenta factores como edad, sexo, presencia de diabetes, niveles de glucosa, insulina, albúmina, plaquetas, y AST. Esta herramienta, diseñada por el Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS), está indicada para evaluar la sospecha de fibrosis en pacientes con obesidad, diabetes, síndrome metabólico, esteatosis hepática y/o marcadores de función hepática alterados. El método ofrece confiabilidad diagnóstica y una relación costo/beneficio superior a otros métodos, como el FIB-4 y el NAFLD Fibrosis Score.

MONITOREO CONTINUO DE LA GLUCOSA EN SANGRE La glucosa en plasma se controlará continuamente utilizando el sistema subcutáneo 'FreeStyle Libre' (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; EE. UU.). Los sensores se conectarán a los participantes en dos momentos a lo largo del ensayo: al inicio y después de 12 meses de seguimiento, y recopilarán datos durante 48 horas. Con este sistema se determinarán diferentes parámetros glucémicos como el área bajo la curva (AUC), la amplitud media de la excursión glucémica (MAGE), la glucemia media, así como la desviación estándar (SD) y el coeficiente de variación (CV).

BIOQUÍMICA DEL PLASMA EN EL IG-CSIC Los investigadores del IG-CSIC realizarán una serie de determinaciones complementarias en muestras de plasma, como las concentraciones plasmáticas de OA, los niveles de glutatión (GSH y GSSG), la composición de ácidos grasos, adipoquinas séricas (ceruloplasmina , adiponectina, leptina, resistina y grelina). También se determinarán enzimas antioxidantes séricas (superóxido dismutasa, catalasa) y citocinas proinflamatorias (TNF-α, IL-1β, IL-6).

Por otro lado, la fracción VLDL de las lipoproteínas plasmáticas se aislará mediante ultracentrifugación (230.000 × g durante 18 h a 4 °C). En estas partículas se medirá el contenido total de ácidos grasos, triglicéridos, diglicéridos, fosfolípidos y Apolipoproteína B total.

ANÁLISIS DE ORINA Se analizarán las primeras muestras de orina de la mañana para las determinaciones físicas, químicas y microscópicas habituales (pH, densidad, glucosuria, cetonas, nitritos, urobilinógeno, bilirrubina, sedimento, leucocitos, microalbuminuria/g creatinina). La determinación de estos parámetros también se realizará en las instalaciones del Laboratorio de Análisis y Bioquímica Clínica de los Hospitales Universitarios 'Virgen del Rocío' de Sevilla.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO El ensayo se llevará a cabo según el principio de intención de tratar (ITT). Las variables cualitativas se expresarán por sus frecuencias absolutas y relativas, mientras que las cuantitativas con distribución normal se expresarán por la media y la desviación estándar y las de distribución no normal por la mediana y rango intercuartil (RIC). Las comparaciones entre grupos de estudio para variables cualitativas se realizarán con las pruebas de Chi-cuadrado y McNemar, mientras que las comparaciones para variables cuantitativas se ejecutarán con la prueba t de Student y ANOVA. La homogeneidad de las poblaciones incluidas en los grupos de asignación se evaluará mediante la prueba U de Mann-Whitney-Wilcoxon. Todos los valores P serán de dos colas en α = 0,05. El análisis estadístico se realizará con el software SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, EE. UU.)