Oleanolihappo terapeuttisena apuaineena tyypin 2 diabeteksessa (OLTRAD-TUTKIMUS) (OLTRAD)

KOKEIDEN SUUNNITTELU OLTRAD-tutkimus on prospektiivinen, rinnakkaisryhmä, satunnaistettu, kaksoissokkoutettu, kontrolloitu tutkimus, jonka tarkoituksena on osoittaa, että OA:lla rikastetun funktionaalisen oliiviöljyn säännöllinen nauttiminen on tehokasta metformiinihoidon lisänä (monoterapiana tai yhdessä muut diabeteslääkkeet) T2DM-potilaiden aineenvaihdunnan säätelyssä. OA:lla rikastetun oliiviöljyn vaikutusta verrataan vertailuöljyyn, joka koostuu samasta kaupallisesta oliiviöljystä, jota ei ole vahvistettu triterpeenillä.

Yhteensä 100 vapaaehtoista molemmista sukupuolista valitaan T2DM-potilaiden joukosta, joita hoidetaan Virgen del Rocíon yliopistollisen sairaalan (Sevilla, ESPANJA) endokrinologia- ja ravitsemuspalvelussa.

NÄYTTEKOON LASKEMINEN Seerumin glykosyloitu hemoglobiini (HbA1c) on pääasiallinen kvantitatiivinen muuttuja glykeemisen kontrollin analysoinnissa. Koesuunnitelmassa esitetty nollahypoteesi on, että OA-pohjainen ruokavalio alentaa potilaiden seerumin HbA1c-lähtötasoja vähintään 7 % verrattuna kontrolliryhmään. Tämän yksipuolisen hypoteesitestin testaamiseksi 95 %:n luottamustasolla (α-riski = 0,05) ja 95 %:n teholla (β-riski = 0,05), vaaditaan 44 vapaaehtoisen otoskoko ryhmää kohden. Tutkimuksen ominaisuuksista johtuen (pitkäaikainen elämäntapainterventio) voidaan kuitenkin olettaa, että osallistujien menetykset ovat jopa 15 %, jolloin otoskoko on 50 henkilöä ryhmää kohden.

SATUNNAISUUS Kun 100 T2DM-potilasta on värvätty, ne jaetaan satunnaisesti toiseen kahdesta tutkimusryhmästä. Viisikymmentä henkilöä määrätään interventioryhmään, joka syö OA:lla rikastettua toiminnallista oliiviöljyä, kun taas muut 50 vapaaehtoista määrätään kontrolliryhmään, joka saa samaa rikastamatonta oliiviöljyä. Vastaanottohetkellä tutkimushoitaja pyytää puhelimitse tutkimuksen kliiniseltä koordinaattorilta (hankkeen päätutkija 2) osallistujien osoittamista tutkimusryhmiin (keskitetty satunnaistaminen). Näille ryhmille jako tehdään tietokoneella luotujen satunnaislukutaulukoiden avulla. Neljä satunnaistamiskerrosta muodostetaan sukupuolen ja iän mukaan (raja 50 vuotta).

TOIMENPITEET Osallistujia neuvotaan nauttimaan 55 ml/päivä määrättyä öljyä, mieluiten raakana ja jaettuna vapaasti kolmen pääaterian kesken. Sekä OA:lla rikastettu oliiviöljy että kontrolliöljy toimitetaan merkittyinä aakkosnumeerisilla koodeilla, joiden vastaavuuden tietää vain hankkeen päätutkija 1. Tämä varmistaa kliinisten tutkijoiden ja osallistujien sokaistumisen määrätyn oliiviöljyn tyypin suhteen.

SEURANTA Kliinisen tutkimuksen osallistujia seurataan 12 kuukauden ajan ilmoittautumisesta neljännesvuosittaisten käyntien suunnitelman mukaisesti.

Rekrytoinnin yhteydessä ja sen jälkeen kolmen kuukauden välein osallistujilta mitataan antropometriset, verenpaine- ja sykemittaukset. Heiltä kysytään myös ruoansulatuskanavan sairauksia tai muita valituksia, ja he täyttävät kyselylomakkeen elämäntavoista (ruokavalio, fyysinen aktiivisuus, alkoholin ja tupakan käyttö), sairauksista ja lääkkeiden käytöstä.

Myös tutkimukseen osallistumisen alussa ja sen jälkeen kolmen kuukauden välein otetaan kyynärlaskimosta paastoverinäytteet, jotka kerätään steriileihin muoviputkiin, joissa on tyhjiöjärjestelmä. Vastaavasti osallistujat antavat alikvootit ensimmäisestä aamuvirtsastaan ​​steriileissä muoviputkissa. Veren ja virtsan analyyttiset määritykset suoritetaan Sevillan Virgen del Rocíon yliopistollisen sairaalan (HUVR) kliinisen biokemian ja analyysin laboratoriossa.

Lisäksi plasmaeriä lähetetään "Instituto de la Grasaan" (IG-CSIC) täydentäviä biokemiallisia määrityksiä varten. Molempien laitosten laboratorioteknikot saavat aakkosnumeerisilla tunnuskoodeilla merkityt näytteet, ja siksi heidät sokennetaan interventioryhmille.

Näillä neljännesvuosittaisilla vierailuilla vapaaehtoiset osallistuvat ravitsemuskasvatusohjelman istuntoihin ja saavat 6 litraa määrättyä öljyä ilmaiseksi. Ruokavalion noudattamista arvioidaan neljännesvuosittain Haynes-Sackettin itse ilmoittaman noudattamistestin ja oletettavasti kulutettujen tyhjien pullojen palauttamisen kautta.

Kokeen ensisijainen tulos on verensokerin hallinnan paraneminen, joka on arvioitu HbA1c:n kehityksen perusteella. Toissijaisina tuloksina saamme tietoa antropometrisista ja kliinisistä muuttujista sekä veren ja virtsan biokemiallisista parametreista.

OSALLISTUJIEN ANAMNEESI JA KLIININEN TUTKIMUS Hankkeen lääketieteen tutkijoilla on pääsy osallistujien sähköisiin potilastietoihin Andalusian Health Servicen DIRAYA-alustalla, ja he suorittavat osallistujien anamneesin ja fyysisen tutkimuksen, joka sisältää tärkeitä tietoja. ja yleinen lääketieteellinen ja kirurginen historia sekä seuratut lääkehoidot. Tietoa saadaan myös elämäntavoista, oman kehonkuvan käsityksestä, ruokavaliosta sekä liikunnan tyypistä ja intensiteetistä. Lisäksi tehdään yleinen kliininen tutkimus, joka sisältää käsien ja käsivarsien, jalkojen ja jalkojen, ihon, kasvojen, silmien, suun, kaulan, vatsan, turvotuksen, imusolmukkeiden ja elintoimintojen (lämpötila, pulssi, hengitystiheys ja verenpaine).

ANTROPOMETRINEN TUTKIMUS JA VARTALON KOOSTUMUS Antropometrinen tutkimus sisältää kokonaispainon, pituuden, painoindeksin (BMI) sekä vyötärön ja lantion ympärysmittojen määrityksen. Näiden muuttujien tutkimus ja arviointi suoritetaan Kansainvälisen Kinantropometrian Advancement Societyn (ISAK) ohjeiden mukaisesti. Kehon koostumuksen tutkimus tehdään sähköisellä bioimpedanssilla. Rasvamassa, vähärasvainen massa, lihasmassa, kokonaisvesi, luumassa, perusaineenvaihdunta ja sisäelinten rasva määritetään tällä tekniikalla käyttämällä validoituja ennusteyhtälöitä, jotka on mukautettu iän ja sukupuolen mukaan.

RUOANSAANNON ARVIOINTI JA RAVINTOKOULUTUS Toteutetaan ravitsemuskasvatusohjelma osallistujien ravinnonsaannin arvioimiseksi ja annettujen ravitsemussuositusten noudattamisen vahvistamiseksi. Ruoan saannin mittaamiseen käytämme Navarran yliopiston (Espanja) suunnittelemaa ruuan saannin rekisteröintilomaketta, jota on käytetty menestyksekkäästi muissa kokeissa, kuten PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED) -tutkimuksessa. Tämä lomake on validoitu työkalu, joka määrittää ruoan saannin ruoka-annoksina tai ruokaryhminä Espanjassa asuville aikuisille. Toisaalta kaikki osallistujat liittyvät työpajoihin, joissa he saavat erityisiä ruokavaliosuosituksia T2DM-potilaille, ja heille opastetaan terveellinen ruokavalio, parhaat ruokavaihtoehdot ja riittävät annokset, rajoittamalla pitkälle prosessoituja ruokia, kakkuja, sokeria, rasvaisia ​​ruokia sekä sokeripitoisia ja alkoholipitoisia juomia. Lisäksi potilaat saavat tietoa resepteistä, kausiluonteisista ostoslistoista sekä oliiviöljyn käytöstä ruoanlaitossa ja pukeutumiseen. Osallistujien ruokailutottumuksia analysoidaan neljännesvuosittain 24 tunnin palautuskyselyn avulla. NUTRIUM-ohjelmisto (https://nutrium.com/; Braga; Portugali) käytetään ruokavalioiden ravitsemukselliseen arviointiin.

VEREN BIOKEMIA HUVR:ssa Kyynärluun verinäytteissä verenkierrossa oleviin lipideihin liittyvät määritykset [kokonaistriglyseridit, kokonaiskolesteroli, LDL, HDL, kokonaisapolipoproteiini B ja lipoproteiini A]; glukoosin homeostaasi [glykemia, insulinemia, C-peptidi, HOMA-IR-indeksi, HbA1c]; oksidatiivinen stressi ja tulehdus [virtsahappo, bilirubiini, malondialdehydi, ultraherkkä C-reaktiivinen proteiini, kilpirauhasta stimuloiva hormoni (TSH)] sekä ne, jotka liittyvät maksa- ja munuaisvaurioihin [laktaattidehydrogenaasi (LDH), maksan transaminaasit (ALT, AST) , GGT ) ja kreatiniini] suoritetaan.

Myös plasman B12-vitamiinitaso arvioidaan. Lisäksi maksafibroosin mahdollinen ilmaantuminen arvioidaan Hepamet Fibrosis Score -menetelmällä, joka on ei-invasiivinen menetelmä, joka laskee pistemäärän ottaen huomioon tekijät, kuten ikä, sukupuoli, diabeteksen esiintyminen, glukoositasot, insuliini, albumiini, verihiutaleet, ja AST. Tämä Sevillan biolääketieteen instituutin (IBiS) suunnittelema työkalu on tarkoitettu arvioimaan epäiltyä fibroosia potilailla, joilla on liikalihavuus, diabetes, metabolinen oireyhtymä, maksan rasvakudos ja/tai epänormaalit maksan toimintamerkit. Menetelmä tarjoaa diagnostisen luotettavuuden ja kustannus/hyötysuhteen, joka on parempi kuin muut menetelmät, kuten FIB-4 ja NAFLD Fibrosis Score.

JATKUVA VERENGLUKOOSI SEURANTA Plasman glukoosia seurataan jatkuvasti käyttämällä 'FreeStyle Libre' -subkutaanista järjestelmää (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL; USA). Anturit kiinnitetään osallistujiin kahdesti koko kokeen ajan: lähtötilanteessa ja 12 kuukauden seurannan jälkeen, ja ne keräävät tietoja 48 tunnin ajan. Tällä järjestelmällä määritetään erilaiset glykeemiset parametrit, kuten käyrän alla oleva pinta-ala (AUC), glykeemisen poikkeaman keskiamplitudi (MAGE), keskimääräinen glykemia sekä standardipoikkeama (SD) ja kerroin variaatio (CV).

PLASMABIOKEMIA IG-CSIC:ssä IG-CSIC:n tutkijat suorittavat plasmanäytteistä useita toisiaan täydentäviä määrityksiä, kuten OA:n plasmapitoisuudet, glutationipitoisuudet (GSH ja GSSG), rasvahappokoostumus, seerumin adipokiinit (seruloplasmiini). , adiponektiini, leptiini, resistiini ja greliini). Seerumin antioksidanttientsyymit (superoksididismutaasi, katalaasi) ja tulehdusta edistävät sytokiinit (TNF-α, IL-1β, IL-6) määritetään myös.

Toisaalta plasman lipoproteiinien VLDL-fraktio eristetään ultrasentrifugoimalla (230 000 x g 18 tuntia 4 °C:ssa). Näistä hiukkasista mitataan rasvahappojen, triglyseridien, diglyseridien, fosfolipidien ja kokonaisapolipoproteiini B:n kokonaispitoisuus.

VIRTSAN ANALYYSI Ensimmäiset aamuvirtsanäytteet analysoidaan tavanomaisten fysikaalisten, kemiallisten ja mikroskooppisten määritysten (pH, tiheys, glykosuria, ketonit, nitriitit, urobilinogeeni, bilirubiini, sedimentti, leukosyytit, mikroalbuminuria/g kreatiniini) varalta. Nämä parametrit määritetään myös Sevillan Virgen del Rocío -yliopistosairaaloiden kliinisen biokemian ja analyysilaboratorion tiloissa.

TILASTOANALYYSI Koe suoritetaan ITT (intent-to-treat) -periaatteen mukaisesti. Laadulliset muuttujat ilmaistaan ​​niiden absoluuttisella ja suhteellisella frekvenssillä, kun taas kvantitatiiviset, joilla on normaalijakauma, ilmaistaan ​​keskiarvolla ja keskihajonnalla ja muuttujat, joiden jakautuminen ei ole normaalia, mediaani- ja kvartiilivälillä (IQR). Kvalitatiivisten muuttujien tutkimusryhmien väliset vertailut suoritetaan khi-neliö- ja McNemar-testeillä, kun taas kvantitatiivisten muuttujien vertailut suoritetaan Studentin t-testillä ja ANOVA:lla. Allokaatioryhmiin kuuluvien populaatioiden homogeenisuus arvioidaan Mann-Whitney-Wilcoxonin U-testillä. Kaikki P-arvot ovat kaksisuuntaisia, kun α = 0,05. Tilastollinen analyysi suoritetaan SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA) ohjelmistolla