Asociace hladin sérového eotaxinu a markerů myokardiálního poškození u hemodialyzovaných pacientů

Návrh studie a populace pacientů Tato průřezová studie bude provedena v souladu s Helsinskou deklarací a platnými předpisy. Protokol bude zaslán etické komisi instituce a bude získán písemný informovaný souhlas pacientů. Aby byli pacienti zařazeni do studie, bude jim alespoň 20 let a budou ambulantně na HD po dobu alespoň 3 měsíců. Všichni pacienti byli dialyzováni třikrát týdně vysokoprůtokovou membránou a roztoky bikarbonátového dialyzátu. Pacienti budou vyloučeni, pokud měli akutní infekci nebo malignitu. Do studie je náhodně pozváno a zařazeno celkem 400 dlouhodobých HD pacientů. Lékařské záznamy budou u každého subjektu důkladně přezkoumány spolupracujícím lékařem ve studii. Informace, jako je základní onemocnění ledvin, historie kardiovaskulárních onemocnění a další komorbidní onemocnění, jsou abstrahovány. Preexistující anamnéza KVO byla definována jako ICHS v anamnéze (včetně anamnézy infarktu myokardu, angioplastiky koronární arterie/stentingu/bypassu, karotické endarterektomie/stentingu), cerebrovaskulárního onemocnění (CVD, např. mrtvice), netraumatického amputace dolní končetiny a operace bypassu dolní končetiny/angioplastika/stenting

Měření Vzorky krve před dialýzou se odebírají v polovině týdne. Do 30 minut po odběru se zbývající krev centrifuguje při 3000 g po dobu 10 minut, okamžitě se rozdělí na alikvoty a zmrazí se při -80 °C do další analýzy. Celkový cholesterol v séru se měří reakcí cholesterolesterázy/cholesteroloxidázy/peroxidázy za použití Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, USA). HDL cholesterol se kvantifikuje po vysrážení polyethylenglykolem při teplotě místnosti. Koncentrace glukózy v séru se měří metodou glukózooxidázy. Nízkohustotní lipoproteinový cholesterol byl vypočten pomocí Friedewaldova vzorce. Celkové sérové ​​triglyceridy byly měřeny reakcí glycerolu/fosfátu/oxidázy a peroxidázy. Sérové ​​hladiny vysoce citlivého C-reaktivního proteinu (hsCRP) se měří pomocí Behringova nephelometru II (Dade Behring, Tokio, Japonsko). Sérové ​​hladiny IL-6 a MCP-1 jsou měřeny komerčně dostupným enzymem-linked immunosorbent assay (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, USA). Koncentrace 8-isoprostanu v séru byly měřeny pomocí testu ELISA (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA) s detekčním limitem 3 pg/ml, podle pokynů výrobce.

Hladiny eotaxinu v séru budou stanoveny pomocí komerční soupravy ELISA (R&D systems, Minneapolis, MN, USA) podle protokolu výrobce. Stručně řečeno, myší antilidská protilátka proti eotaxinu se používá k zachycení eotaxinu z plazmy. Zachycený eotaxin je detekován biotynilovanou kozí protilátkou proti lidskému eotaxinu. Po promytí se destičky inkubují se streptavidinem-HRP, vyvíjejí se s vhodným substrátem a stanoví se OD450 pomocí čtečky destiček ELISA. Měření se provádějí dvojmo v testu schopném detekovat 10 pg eotaxinu/ml. Hodnoty variačních koeficientů uvnitř a mezi testy jsou < 4 % a < 6 %, v daném pořadí.

Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I assay (Siemens Healthineers) je třímístný sendvičový imunotest s limitem detekce 1,6 ng/l a limitem kvantifikace 2,5 ng/l. Horní referenční limit 99. centil byl stanoven ve vzorcích z roku 2007 od zdravých jedinců jako 34 ng/l u žen a 53 ng/l u mužů, s jedinou hranicí 45 ng/l. V populaci referenčního rozmezí mělo 75 % pacientů hodnoty vyšší než je mez detekce. Všechna měření byla prováděna v centrální laboratoři, která byla slepá ke všem klinickým informacím s výsledky poskytnutými výzkumnému týmu a propojena s databází studií pro analýzu.

Redoxní stav sérového albuminu byl stanoven jeho frakcionací na lidský merkaptalbumin (HMA), lidský nemerkaptalbumin-1 (HNA-1) a lidský nemerkaptalbumin-2 (HNA-2) pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC).