Associatie van serum-eotaxineniveaus en markers van myocardletsel bij hemodialysepatiënten

Studieopzet en patiëntenpopulatie Deze cross-sectionele studie zal worden uitgevoerd in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki en de toepasselijke regelgeving. Het protocol wordt naar de institutionele ethische commissie gestuurd en de schriftelijke geïnformeerde toestemming van de patiënt wordt verkregen. Om in het onderzoek te worden opgenomen, moeten de patiënten minstens 20 jaar oud zijn en gedurende minstens 3 maanden poliklinische HD ondergaan. Alle patiënten werden driemaal per week gedialyseerd met een high-flux membraan en bicarbonaatdialysaatoplossingen. Patiënten worden uitgesloten als ze een acute infectie of maligniteit hadden. In totaal worden 400 langdurige ZvH-patiënten willekeurig uitgenodigd en ingeschreven voor het onderzoek. De medische dossiers worden voor elk onderwerp grondig beoordeeld door een arts die aan het onderzoek meewerkt. Informatie zoals onderliggende nierziekten, voorgeschiedenis van hart- en vaatziekten en andere comorbide ziekten worden geabstraheerd. Een reeds bestaande voorgeschiedenis van CVD werd gedefinieerd als een voorgeschiedenis van CAD (waaronder een voorgeschiedenis van myocardinfarct, angioplastiek/stenting/bypass-operatie van de kransslagader, carotis-endarteriëctomie/stenting), cerebrovasculaire ziekte (CVD, bijv. beroerte), niet-traumatische amputatie van de onderste ledematen en bypass-chirurgie/angioplastie/stentplaatsing van de slagader van de onderste ledematen

Metingen Predialyse-bloedmonsters worden halverwege de week genomen. Binnen 30 minuten na de monstername wordt het resterende bloed gedurende 10 minuten bij 3.000 g gecentrifugeerd, onmiddellijk in hoeveelheden verdeeld en bij -80 °C ingevroren tot verdere analyse. Het totale serumcholesterol wordt gemeten door de reactie van cholesterolesterase/cholesteroloxidase/peroxidase, met behulp van Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, VS). HDL-cholesterol wordt gekwantificeerd na precipitatie met polyethyleenglycol bij kamertemperatuur. Serumglucoseconcentraties worden gemeten met de glucoseoxidasemethode. Lipoproteïne-cholesterol met lage dichtheid werd berekend met behulp van de Friedewald-formule. De totale serumtriglyceriden werden gemeten door de reactie van glycerol/fosfaat/oxidase en peroxidase. De serumniveaus van hooggevoelig C-reactief proteïne (hsCRP) worden gemeten met behulp van een Behring Nephelometer II (Dade Behring, Tokyo, Japan). Serumniveaus van IL-6 en MCP-1 worden gemeten met een in de handel verkrijgbare enzymgekoppelde immunosorbenttest (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, VS). Serum-8-isoprostaanconcentraties werden gemeten met behulp van de ELISA-test (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, VS) met een detectielimiet van 3 pg/ml, volgens de instructies van de fabrikant.

Serum-eotaxineniveaus zullen worden bepaald met behulp van een commerciële ELISA-kit (R&D-systemen, Minneapolis, MN, VS) volgens het protocol van de fabrikant. Kortom, anti-humaan antilichaam van muizen tegen eotaxine wordt gebruikt om eotaxine uit plasma te vangen. Gevangen eotaxine wordt gedetecteerd met gebiotynileerd anti-humaan eotaxine-antilichaam van geiten. Na het wassen worden de platen geïncubeerd met streptavidine-HRP, ontwikkeld met een geschikt substraat, en wordt de OD450 bepaald met behulp van een ELISA-plaatlezer. Metingen worden in tweevoud uitgevoerd in een test die 10 pg eotaxine/ml kan detecteren. De intra- en inter-assaycoëfficiënten van variatiewaarden zijn respectievelijk <4% en <6%.

De Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I-test (Siemens Healthineers) is een sandwich-immunoassay op drie locaties met een detectielimiet van 1,6 ng/l en een kwantificeringslimiet van 2,5 ng/l. De bovenste referentielimiet van het 99e percentiel werd in 2007 in monsters van gezonde individuen bepaald op 34 ng/l bij vrouwen en 53 ng/l bij mannen, met een enkele drempel van 45 ng/l. In de referentiebereikpopulatie had 75% van de patiënten waarden die groter waren dan de detectielimiet. Alle metingen werden uitgevoerd in een centraal laboratorium, dat blind was voor alle klinische informatie, waarbij de resultaten aan het onderzoeksteam werden doorgegeven en voor analyse aan de proefdatabase werden gekoppeld.

De redoxtoestand van serumalbumine werd bepaald door het te fractioneren in menselijk mercaptalbumine (HMA), menselijk nonmercaptalbumine-1 (HNA-1) en menselijk niet-mercaptalbumine-2 (HNA-2) met behulp van krachtige vloeistofchromatografie (HPLC).