Associazione tra i livelli sierici di eotassina e i marcatori di danno miocardico nei pazienti in emodialisi

Disegno dello studio e popolazione di pazienti Questo studio trasversale sarà condotto in conformità con la Dichiarazione di Helsinki e le normative applicabili. Il protocollo verrà inviato al comitato etico istituzionale e verrà ottenuto il consenso informato scritto dei pazienti. Per essere inclusi nello studio, i pazienti avranno almeno 20 anni e saranno in HD ambulatoriale per almeno 3 mesi. Tutti i pazienti venivano dializzati tre volte alla settimana con una membrana ad alto flusso e soluzioni di dialisato di bicarbonato. I pazienti verranno esclusi se presentavano un'infezione acuta o un tumore maligno. Un totale di 400 pazienti affetti da MH a lungo termine sono invitati in modo casuale e arruolati nello studio. Le cartelle cliniche verranno esaminate attentamente per ciascun soggetto da un medico collaboratore allo studio. Vengono estratte informazioni quali malattie renali sottostanti, storia di malattie cardiovascolari e altre malattie in comorbilità. Una storia preesistente di CVD è stata definita come una storia di CAD (inclusa una storia di infarto miocardico, angioplastica coronarica/stenting/intervento di bypass, endoarterectomia/stenting carotideo), malattia cerebrovascolare (CVD, ad es. ictus), malattia non traumatica amputazione degli arti inferiori e intervento chirurgico/angioplastica/stenting dell'arteria inferiore

Misurazioni I campioni di sangue predializzati vengono ottenuti in un giorno infrasettimanale. Entro 30 minuti dal campionamento, il sangue rimanente viene centrifugato a 3.000 g per 10 minuti, immediatamente suddiviso in aliquote e congelato a -80 °C fino a ulteriori analisi. Il colesterolo sierico totale viene misurato attraverso la reazione della colesterolo esterasi/colesterolo ossidasi/perossidasi, utilizzando Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, USA). Il colesterolo HDL viene quantificato dopo precipitazione con polietilenglicole a temperatura ambiente. Le concentrazioni di glucosio nel siero vengono misurate con il metodo della glucosio ossidasi. Il colesterolo lipoproteico a bassa densità è stato calcolato utilizzando la formula di Friedewald. I trigliceridi sierici totali sono stati misurati attraverso la reazione di glicerolo/fosfato/ossidasi e perossidasi. I livelli sierici della proteina C-reattiva ad alta sensibilità (hsCRP) vengono misurati utilizzando un nefelometro Behring II (Dade Behring, Tokyo, Giappone). I livelli sierici di IL-6 e MCP-1 sono misurati mediante un test immunoassorbente legato a un enzima disponibile in commercio (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, USA). Le concentrazioni sieriche di 8-isoprostano sono state misurate utilizzando il test ELISA (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA) con un limite di rilevamento di 3 pg/mL, secondo le istruzioni del produttore.

I livelli sierici di eotassina saranno determinati utilizzando un kit ELISA commerciale (sistemi R&D, Minneapolis, MN, USA) secondo il protocollo del produttore. In breve, l'anticorpo antiumano di topo contro l'eotassina viene utilizzato per catturare l'eotassina dal plasma. L'eotassina catturata viene rilevata con l'anticorpo anti-eotassina umana di capra biotinilato. Dopo il lavaggio, le piastre vengono incubate con streptavidina-HRP, sviluppate con un substrato appropriato e la OD450 viene determinata utilizzando un lettore di piastre ELISA. Le misurazioni vengono effettuate in duplicato in un test in grado di rilevare 10 pg di eotassina/ml. I coefficienti dei valori di variazione intra e inter-test sono rispettivamente <4% e <6%.

Il test Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I (Siemens Healthineers) è un test immunologico sandwich a tre siti con un limite di rilevamento di 1,6 ng/L e un limite di quantificazione di 2,5 ng/L. Il limite di riferimento superiore del 99° centile è stato determinato nei campioni del 2007 di individui sani pari a 34 ng/L nelle donne e 53 ng/L negli uomini, con un'unica soglia di 45 ng/L. Nella popolazione dell'intervallo di riferimento, il 75% dei pazienti presentava valori superiori al limite di rilevamento. Tutte le misurazioni sono state effettuate presso un laboratorio centrale, che era all'oscuro di tutte le informazioni cliniche con i risultati forniti al gruppo di ricerca e collegati al database dello studio per l'analisi.

Lo stato redox dell'albumina sierica è stato determinato frazionandolo in mercaptalbumina umana (HMA), non mercaptalbumina-1 umana (HNA-1) e non mercaptalbumina-2 umana (HNA-2) con cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC).