Seerumin eotaksiinitasojen ja sydänvaurion merkkiaineiden yhdistäminen hemodialyysipotilailla

Tutkimussuunnitelma ja potilaspopulaatio Tämä poikkileikkaustutkimus, ja se suoritetaan Helsingin julistuksen ja sovellettavien määräysten mukaisesti. Protokolla lähetetään laitoksen eettiselle toimikunnalle ja potilailta hankitaan kirjallinen tietoinen suostumus. Tutkimukseen osallistuvien potilaiden tulee olla vähintään 20-vuotiaita ja avohoidossa vähintään 3 kuukautta. Kaikki potilaat dialysoitiin kolme kertaa viikossa korkeavirtauskalvolla ja bikarbonaattidialysaattiliuoksilla. Potilaat suljetaan pois, jos heillä oli akuutti infektio tai pahanlaatuinen kasvain. Yhteensä 400 pitkäaikaista HD-potilasta kutsutaan satunnaisesti tutkimukseen ja otetaan mukaan tutkimukseen. Tutkimuksessa yhteistyössä toimiva lääkäri tarkistaa kunkin kohteen sairaustiedot perusteellisesti. Tiedoista, kuten taustalla olevasta munuaissairaudesta, sydän- ja verisuonitautien historiasta ja muista samanaikaisista sairauksista, vedetään pois. Aiempi CVD-sairaus määriteltiin anamneesissa CAD (mukaan lukien sydäninfarkti, sepelvaltimon angioplastia/stentointi/ohitusleikkaus, kaulavaltimon endarterektomia/stentointi), aivoverisuonitauti (CVD, esim. aivohalvaus), ei-traumaattinen alaraajojen amputaatio ja alaraajojen valtimoiden ohitusleikkaus/angioplastia/stentointi

Mittaukset Dialyysiä edeltävät verinäytteet otetaan keskellä viikkoa. 30 minuutin kuluessa näytteenoton jälkeen jäljellä oleva veri sentrifugoidaan 3 000 g:ssä 10 minuutin ajan, jaetaan välittömästi eriin ja pakastetaan -80 °C:seen jatkoanalyysiin asti. Seerumin kokonaiskolesteroli mitataan kolesteroliesteraasi/kolesterolioksidaasin/peroksidaasin reaktiolla käyttäen Hitachi 747:ää (Hitachi, Bohemia, NY, USA). HDL-kolesteroli kvantifioidaan sen jälkeen, kun se on saostettu polyetyleeniglykolilla huoneenlämpötilassa. Seerumin glukoosipitoisuudet mitataan glukoosioksidaasimenetelmällä. Matalatiheyksinen lipoproteiinikolesteroli laskettiin Friedewaldin kaavalla. Seerumin kokonaistriglyseridit mitattiin glyseroli/fosfaatti/oksidaasin ja peroksidaasin reaktiolla. Korkean herkkyyden C-reaktiivisen proteiinin (hsCRP) seerumitasot mitataan käyttämällä Behring Nephelometer II -laitetta (Dade Behring, Tokio, Japani). IL-6:n ja MCP-1:n seerumitasot mitataan kaupallisesti saatavilla olevalla entsyymikytketyllä immunosorbenttimäärityksellä (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, USA). Seerumin 8-isoprostaanin pitoisuudet mitattiin käyttämällä ELISA-määritystä (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA) havaitsemisrajalla 3 pg/ml valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Seerumin eotaksiinitasot määritetään käyttämällä kaupallista ELISA-sarjaa (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) valmistajan protokollan mukaisesti. Lyhyesti sanottuna hiiren anti-ihmisvasta-ainetta eotaksiinia vastaan ​​käytetään eotaksiinin sieppaamiseen plasmasta. Siepattu eotaksiini havaitaan biotyniloidulla vuohen antiihmis-eotaksiinivasta-aineella. Pesun jälkeen levyjä inkuboidaan streptavidiini-HRP:n kanssa, kehitetään sopivalla substraatilla, ja OD450 määritetään käyttämällä ELISA-levylukijaa. Mittaukset tehdään kahtena rinnakkaisena määrityksessä, joka pystyy havaitsemaan 10 pg eotaksiinia/ml. Testien sisäiset ja määritysten väliset variaatiokertoimet ovat <4 % ja <6 %.

Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I -määritys (Siemens Healthineers) on kolmen kohdan kerros-immunomääritys, jonka havaitsemisraja on 1,6 ng/l ja kvantifiointiraja 2,5 ng/l. Ylävertailuraja 99. senttiili määritettiin terveistä henkilöistä otetuissa näytteissä vuonna 2007 naisilla 34 ng/l ja miehillä 53 ng/l, ja yksi kynnys oli 45 ng/l. Vertailualueen populaatiossa 75 %:lla potilaista arvot ylittivät havaitsemisrajan. Kaikki mittaukset suoritettiin keskuslaboratoriossa, joka oli sokaissut kaikelle kliiniselle tiedolle, ja tulokset toimitettiin tutkimusryhmälle ja linkitettiin tutkimustietokantaan analysoitavaksi.

Seerumin albumiinin redox-tila määritettiin fraktioimalla se ihmisen merkaptalbumiiniksi (HMA), ihmisen ei-merkaptalbumiini-1:ksi (HNA-1) ja ihmisen ei-merkaptalbumiini-2:ksi (HNA-2) korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (HPLC).