Zusammenhang zwischen Serum-Eotaxinspiegeln und Markern für Myokardverletzungen bei Hämodialysepatienten

Studiendesign und Patientenpopulation Diese Querschnittsstudie wird in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki und den geltenden Vorschriften durchgeführt. Das Protokoll wird an die institutionelle Ethikkommission gesendet und die schriftliche Einverständniserklärung der Patienten wird eingeholt. Um in die Studie aufgenommen zu werden, müssen die Patienten mindestens 20 Jahre alt sein und sich seit mindestens 3 Monaten in ambulanter HD-Behandlung befinden. Alle Patienten wurden dreimal pro Woche mit einer High-Flux-Membran und Bikarbonat-Dialysatlösungen dialysiert. Patienten werden ausgeschlossen, wenn sie eine akute Infektion oder einen bösartigen Tumor hatten. Insgesamt 400 Langzeit-HK-Patienten werden nach dem Zufallsprinzip eingeladen und in die Studie aufgenommen. Die Krankenakten werden für jeden Probanden von einem an der Studie beteiligten Arzt gründlich überprüft. Informationen wie zugrunde liegende Nierenerkrankungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen in der Vorgeschichte und andere komorbide Erkrankungen werden abstrahiert. Eine Vorgeschichte von Herz-Kreislauf-Erkrankungen wurde definiert als eine Vorgeschichte von koronarer Herzkrankheit (einschließlich einer Vorgeschichte von Myokardinfarkt, koronarer Angioplastie/Stenting/Bypass-Operation, Karotisendarteriektomie/Stenting), zerebrovaskulärer Erkrankung (CVD, z. B. Schlaganfall) und nichttraumatischer Erkrankung Amputation der unteren Extremitäten und Bypass-Operation/Angioplastie/Stenting der unteren Extremitätenarterie

Messungen: Blutproben vor der Dialyse werden an einem Wochentag entnommen. Innerhalb von 30 Minuten nach der Probenahme wird das verbleibende Blut 10 Minuten lang bei 3.000 g zentrifugiert, sofort aliquotiert und bis zur weiteren Analyse bei –80 °C eingefroren. Das Gesamtserumcholesterin wird durch die Reaktion von Cholesterinesterase/Cholesterinoxidase/Peroxidase unter Verwendung von Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, USA) gemessen. HDL-Cholesterin wird nach Fällung mit Polyethylenglykol bei Raumtemperatur quantifiziert. Die Serumglukosekonzentrationen werden mit der Glukoseoxidase-Methode gemessen. Das Low-Density-Lipoprotein-Cholesterin wurde nach der Friedewald-Formel berechnet. Die gesamten Serumtriglyceride wurden durch die Reaktion von Glycerin/Phosphat/Oxidase und Peroxidase gemessen. Die Serumspiegel des hochempfindlichen C-reaktiven Proteins (hsCRP) werden mit einem Behring Nephelometer II (Dade Behring, Tokio, Japan) gemessen. Die Serumspiegel von IL-6 und MCP-1 werden mit einem kommerziell erhältlichen enzymgebundenen Immunoassay (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, USA) gemessen. Die 8-Isoprostan-Konzentrationen im Serum wurden mithilfe des ELISA-Assays (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA) mit einer Nachweisgrenze von 3 pg/ml gemäß den Anweisungen des Herstellers gemessen.

Der Eotaxinspiegel im Serum wird mit einem kommerziellen ELISA-Kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) gemäß dem Protokoll des Herstellers bestimmt. Kurz gesagt, ein antihumaner Maus-Antikörper gegen Eotaxin wird verwendet, um Eotaxin aus Plasma einzufangen. Eingefangenes Eotaxin wird mit biotinyliertem Ziegen-Antihuman-Eotaxin-Antikörper nachgewiesen. Nach dem Waschen werden die Platten mit Streptavidin-HRP inkubiert, mit einem geeigneten Substrat entwickelt und die OD450 wird mit einem ELISA-Plattenlesegerät bestimmt. Die Messungen werden in zweifacher Ausfertigung in einem Assay durchgeführt, der 10 pg Eotaxin/ml nachweisen kann. Die Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizientenwerte betragen <4 % bzw. <6 %.

Der Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I-Assay (Siemens Healthineers) ist ein Sandwich-Immunoassay mit drei Standorten und einer Nachweisgrenze von 1,6 ng/L und einer Quantifizierungsgrenze von 2,5 ng/L. Der obere Referenzgrenzwert im 99. Perzentil wurde 2007 in Proben von gesunden Personen mit 34 ng/L bei Frauen und 53 ng/L bei Männern bestimmt, mit einem einzigen Schwellenwert von 45 ng/L. In der Referenzbereichspopulation wiesen 75 % der Patienten Werte auf, die über der Nachweisgrenze lagen. Alle Messungen wurden in einem Zentrallabor durchgeführt, das keinen Einblick in alle klinischen Informationen hatte. Die Ergebnisse wurden dem Forschungsteam zur Verfügung gestellt und zur Analyse mit der Studiendatenbank verknüpft.

Der Redoxzustand von Serumalbumin wurde durch Fraktionierung in menschliches Mercaptalbumin (HMA), menschliches Nicht-Mercaptalbumin-1 (HNA-1) und menschliches Nicht-Mercaptalbumin-2 (HNA-2) mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) bestimmt.