Associação de níveis séricos de eotaxina e marcadores de lesão miocárdica em pacientes em hemodiálise

Desenho do estudo e população de pacientes Este ensaio transversal será realizado de acordo com a Declaração de Helsinque e regulamentos aplicáveis. O protocolo será enviado ao comitê de ética institucional e o consentimento informado por escrito dos pacientes será obtido. Para serem incluídos no estudo, os pacientes terão pelo menos 20 anos de idade e estarão em HD ambulatorial há pelo menos 3 meses. Todos os pacientes foram dialisados ​​três vezes por semana com membrana de alto fluxo e soluções de dialisante de bicarbonato. Os pacientes serão excluídos se tiverem uma infecção aguda ou malignidade. Um total de 400 pacientes em HD de longo prazo são convidados aleatoriamente e inscritos no estudo. Os registros médicos serão revisados ​​minuciosamente para cada sujeito por um médico colaborador no estudo. Informações como doença renal subjacente, histórico de doença cardiovascular e outras doenças comórbidas são resumidas. Uma história pré-existente de DCV foi definida como história de DAC (incluindo história de infarto do miocárdio, angioplastia arterial coronariana/colocação de stent/cirurgia de bypass, endarterectomia carotídea/colocação de stent), doença cerebrovascular (DCV, por exemplo, acidente vascular cerebral), doença não traumática amputação de membros inferiores e cirurgia de revascularização do miocárdio/angioplastia/ colocação de stent

Medições As amostras de sangue pré-diálise são obtidas no meio da semana. 30 minutos após a amostragem, o sangue restante é centrifugado a 3.000 g por 10 minutos, imediatamente dividido em alíquotas e congelado a -80 °C até análise posterior. O colesterol sérico total é medido através da reação colesterol esterase/colesterol oxidase/peroxidase, utilizando Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, EUA). O colesterol HDL é quantificado após precipitação com polietilenoglicol à temperatura ambiente. As concentrações séricas de glicose são medidas pelo método da glicose oxidase. O colesterol da lipoproteína de baixa densidade foi calculado pela fórmula de Friedewald. Os triglicerídeos séricos totais foram dosados ​​através da reação glicerol/fosfato/oxidase e peroxidase. Os níveis séricos de proteína C reativa de alta sensibilidade (hsCRP) são medidos usando um Nefelômetro Behring II (Dade Behring, Tóquio, Japão). Os níveis séricos de IL-6 e MCP-1 são medidos por um ensaio imunoenzimático disponível comercialmente (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, EUA). As concentrações séricas de 8-isoprostano foram medidas usando o ensaio ELISA (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, EUA) com limite de detecção de 3 pg/mL, de acordo com as instruções do fabricante.

Os níveis séricos de eotaxina serão determinados usando um kit comercial ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante. Em resumo, o anticorpo anti-humano de ratinho contra a eotaxina é utilizado para capturar a eotaxina do plasma. A eotaxina capturada é detectada com anticorpo de cabra anti-humano eotaxina biotinilado. Após a lavagem, as placas são incubadas com estreptavidina-HRP, reveladas com substrato apropriado, e a DO450 é determinada utilizando um leitor de placas ELISA. As medições são feitas em duplicata em um ensaio capaz de detectar 10 pg de eotaxina/ml. Os valores dos coeficientes de variação intra e interensaio são <4% e <6%, respectivamente.

O ensaio de troponina I de alta sensibilidade Siemens Atellica IM (Siemens Healthineers) é um imunoensaio sanduíche de três locais com limite de detecção de 1,6 ng/L e limite de quantificação de 2,5 ng/L. O limite superior de referência do percentil 99 foi determinado em amostras de 2007 de indivíduos saudáveis ​​como 34 ng/L em mulheres e 53 ng/L em homens, com um limiar único de 45 ng/L. Na população do intervalo de referência, 75% dos pacientes apresentaram valores superiores ao limite de detecção. Todas as medições foram realizadas num laboratório central, que desconhecia todas as informações clínicas com resultados fornecidos à equipa de investigação e ligados à base de dados do ensaio para análise.

O estado redox da albumina sérica foi determinado fracionando-a em mercaptalbumina humana (HMA), não-mercaptalbumina-1 humana (HNA-1) e não-mercaptalbumina-2 humana (HNA-2) com cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).