Asociación de niveles séricos de eotaxina y marcadores de lesión miocárdica en pacientes en hemodiálisis

Diseño del estudio y población de pacientes Este ensayo transversal se llevará a cabo de acuerdo con la Declaración de Helsinki y la normativa aplicable. El protocolo se enviará al comité de ética institucional y se obtendrá el consentimiento informado por escrito de los pacientes. Para ser incluidos en el estudio, los pacientes tendrán al menos 20 años y estarán en HD ambulatoria durante al menos 3 meses. Todos los pacientes fueron dializados tres veces por semana con una membrana de alto flujo y soluciones de dializado de bicarbonato. Los pacientes serán excluidos si tuvieron una infección aguda o una enfermedad maligna. Un total de 400 pacientes con HD a largo plazo son invitados e inscritos aleatoriamente en el estudio. Los registros médicos serán revisados ​​minuciosamente para cada sujeto por un médico colaborador en el estudio. Se resume información como enfermedad renal subyacente, antecedentes de enfermedades cardiovasculares y otras enfermedades comórbidas. Una historia preexistente de ECV se definió como una historia de CAD (incluyendo antecedentes de infarto de miocardio, angioplastia de arteria coronaria/stent/cirugía de bypass, endarterectomía carotídea/stent), enfermedad cerebrovascular (ECV, por ejemplo, accidente cerebrovascular), enfermedad no traumática. amputación de extremidades inferiores y cirugía de derivación arterial de extremidades inferiores/angioplastia/colocación de stent

Mediciones Las muestras de sangre previas a la diálisis se obtienen a mitad de semana. Dentro de los 30 minutos posteriores al muestreo, la sangre restante se centrifuga a 3000 g durante 10 minutos, se divide inmediatamente en alícuotas y se congela a -80 °C hasta su posterior análisis. El colesterol sérico total se mide mediante la reacción de colesterol esterasa/colesterol oxidasa/peroxidasa, utilizando Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, EE. UU.). El colesterol HDL se cuantifica tras precipitación con polietilenglicol a temperatura ambiente. Las concentraciones de glucosa sérica se miden mediante el método de la glucosa oxidasa. El colesterol unido a lipoproteínas de baja densidad se calculó mediante la fórmula de Friedewald. Los triglicéridos séricos totales se midieron mediante la reacción de glicerol/fosfato/oxidasa y peroxidasa. Los niveles séricos de proteína C reactiva de alta sensibilidad (hsCRP) se miden utilizando un nefelómetro Behring II (Dade Behring, Tokio, Japón). Los niveles séricos de IL-6 y MCP-1 se miden mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas disponible comercialmente (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, EE. UU.). Las concentraciones séricas de 8-isoprostano se midieron mediante el ensayo ELISA (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, EE. UU.) con un límite de detección de 3 pg/ml, según las instrucciones del fabricante.

Los niveles séricos de eotaxina se determinarán utilizando un kit ELISA comercial (R&D Systems, Minneapolis, MN, EE. UU.) según el protocolo del fabricante. En resumen, se utiliza un anticuerpo antihumano de ratón contra la eotaxina para capturar la eotaxina del plasma. La eotaxina capturada se detecta con anticuerpo antieotaxina humana de cabra biotinilado. Después del lavado, las placas se incuban con estreptavidina-HRP, se revelan con el sustrato apropiado y se determina la DO450 usando un lector de placas ELISA. Las mediciones se realizan por duplicado en un ensayo capaz de detectar 10 pg de eotaxina/ml. Los coeficientes de variación intra e interensayo son <4% y <6%, respectivamente.

El ensayo Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I (Siemens Healthineers) es un inmunoensayo tipo sándwich de tres sitios con un límite de detección de 1,6 ng/L y un límite de cuantificación de 2,5 ng/L. El límite superior de referencia del percentil 99 se determinó en muestras de 2007 de individuos sanos como 34 ng/L en mujeres y 53 ng/L en hombres, con un umbral único de 45 ng/L. En la población del rango de referencia, el 75% de los pacientes tuvieron valores superiores al límite de detección. Todas las mediciones se realizaron en un laboratorio central, que estaba cegado a toda la información clínica y los resultados se proporcionaron al equipo de investigación y se vincularon a la base de datos del ensayo para su análisis.

El estado redox de la albúmina sérica se determinó fraccionándola en mercaptalbúmina humana (HMA), no mercaptalbúmina humana-1 (HNA-1) y no mercaptalbúmina humana-2 (HNA-2) con cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).