Ассоциация уровней эотаксина в сыворотке крови и маркеров повреждения миокарда у пациентов, находящихся на гемодиализе

Дизайн исследования и популяция пациентов Это перекрестное исследование будет проводиться в соответствии с Хельсинкской декларацией и применимыми правилами. Протокол будет отправлен в институциональный комитет по этике, и будет получено письменное информированное согласие пациентов. В исследование могут быть включены пациенты в возрасте не менее 20 лет, находящиеся на амбулаторном ГД в течение не менее 3 месяцев. Все пациенты подвергались диализу три раза в неделю с использованием высокопоточной мембраны и растворов бикарбонатного диализата. Пациенты будут исключены, если у них была острая инфекция или злокачественное новообразование. В общей сложности 400 пациентов с длительной ГБ были случайным образом приглашены и включены в исследование. Медицинские записи будут тщательно проверены по каждому субъекту врачом, участвующим в исследовании. Такая информация, как основное заболевание почек, история сердечно-сосудистых заболеваний и другие сопутствующие заболевания, абстрагируется. Ранее существовавшие сердечно-сосудистые заболевания определялись как ИБС в анамнезе (включая инфаркт миокарда в анамнезе, ангиопластику коронарных артерий/стентирование/шунтирование, каротидную эндартерэктомию/стентирование), цереброваскулярные заболевания (ССЗ, например, инсульт), нетравматические ампутация нижних конечностей и шунтирование артерий нижних конечностей/ангиопластика/стентирование

Измерения Образцы крови перед диализом получают в середине недели. В течение 30 минут после взятия оставшуюся кровь центрифугируют при 3000 g в течение 10 минут, сразу же отбирают аликвоты и замораживают при -80°С до дальнейшего анализа. Общий холестерин в сыворотке измеряют посредством реакции холестерин-эстераза/холестериноксидаза/пероксидаза с использованием Hitachi 747 (Hitachi, Богемия, Нью-Йорк, США). Холестерин ЛПВП определяют количественно после осаждения полиэтиленгликолем при комнатной температуре. Концентрацию глюкозы в сыворотке измеряют глюкозооксидазным методом. Холестерин липопротеинов низкой плотности рассчитывали по формуле Фридевальда. Общие триглицериды сыворотки измеряли посредством реакции глицерин/фосфат/оксидаза и пероксидаза. Уровни высокочувствительного С-реактивного белка (вчСРБ) в сыворотке крови измеряют с помощью нефелометра Беринга II (Dade Behring, Токио, Япония). Уровни IL-6 и MCP-1 в сыворотке измеряют с помощью коммерчески доступного иммуноферментного анализа (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Миннеаполис, Миннесота, США). Концентрации 8-изопростана в сыворотке измеряли с помощью анализа ELISA (Cayman Chemical, Анн-Арбор, Мичиган, США) с пределом обнаружения 3 пг/мл в соответствии с инструкциями производителя.

Уровни эотаксина в сыворотке будут определяться с использованием коммерческого набора ELISA (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, мышиные античеловеческие антитела против эотаксина используются для захвата эотаксина из плазмы. Захваченный эотаксин выявляют с помощью биотинилированных козьих антител к эотаксину человека. После промывки планшеты инкубируют со стрептавидином-HRP, проявленным с соответствующим субстратом, и определяют OD450 с использованием планшет-ридера ELISA. Измерения проводят в двух экземплярах с помощью анализа, способного обнаружить 10 пг эотаксина/мл. Коэффициенты вариации внутри и между анализами составляют <4% и <6% соответственно.

Анализ высокой чувствительности на тропонин I Siemens Atellica IM (Siemens Healthineers) представляет собой трехцентровый сэндвич-иммуноанализ с пределом обнаружения 1,6 нг/л и пределом количественного определения 2,5 нг/л. Верхний референтный предел 99-й центиль был определен в образцах 2007 года от здоровых людей как 34 нг/л у женщин и 53 нг/л у мужчин, с единым порогом 45 нг/л. В популяции референтного диапазона у 75% пациентов значения превышали предел обнаружения. Все измерения проводились в центральной лаборатории, которая не имела доступа ко всей клинической информации, а результаты предоставлялись исследовательской группе и связывались с базой данных испытаний для анализа.

Окислительно-восстановительное состояние сывороточного альбумина определяли путем его фракционирования на человеческий меркаптальбумин (HMA), человеческий немеркаптальбумин-1 (HNA-1) и человеческий немеркаптальбумин-2 (HNA-2) с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).