A szérum eotaxinszintek és a szívizomsérülés markereinek társulása hemodializált betegeknél

A vizsgálat megtervezése és a betegpopuláció Ezt a keresztmetszeti vizsgálatot a Helsinki Nyilatkozatnak és a vonatkozó előírásoknak megfelelően hajtják végre. A jegyzőkönyvet megküldik az intézményi etikai bizottságnak, és be kell szerezni a betegek írásos beleegyezését. A vizsgálatba bevont betegeknek legalább 20 éveseknek kell lenniük, és legalább 3 hónapig járóbeteg HD-ben szenvednek. Minden beteget hetente háromszor dializáltak nagy átfolyású membránnal és bikarbonát dializátum oldattal. A betegek kizárásra kerülnek, ha akut fertőzésük vagy rosszindulatú daganatuk volt. Összesen 400 hosszú távú HD-beteget hívnak meg véletlenszerűen és vonnak be a vizsgálatba. Az orvosi feljegyzéseket minden egyes alany esetében alaposan átnézi a vizsgálatban közreműködő orvos. Az olyan információk, mint például a mögöttes vesebetegség, a szív- és érrendszeri betegségek anamnézisében és más társbetegségekben előforduló információk kivonatolásra kerülnek. A kórelőzményben szereplő szív- és érrendszeri betegségek a kórelőzményben szereplő CAD (beleértve a szívizominfarktus, koszorúér angioplasztika/stenting/bypass műtét, carotis endarterectomia/stent), cerebrovascularis betegség (CVD, pl. stroke), nem traumás alsó végtag amputáció és alsó végtagi artéria bypass műtét/angioplasztika/stentelés

Mérések A dialízis előtti vérmintákat a hét közepén veszik. A mintavétel után 30 percen belül a megmaradt vért 3000 g-vel 10 percig centrifugáljuk, azonnal aliquot részekre osztjuk és -80 °C-on lefagyasztjuk a további elemzésig. A teljes szérumkoleszterint a koleszterin-észteráz/koleszterin-oxidáz/peroxidáz reakciójával mérjük, Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, USA) segítségével. A HDL-koleszterin mennyiségét polietilénglikollal szobahőmérsékleten végzett kicsapás után határozzuk meg. A szérum glükózkoncentrációját glükóz-oxidáz módszerrel mérjük. Az alacsony sűrűségű lipoprotein koleszterint a Friedewald-képlet alapján számítottuk ki. A teljes szérum triglicerideket glicerin/foszfát/oxidáz és peroxidáz reakciójával mértük. A nagy érzékenységű C-reaktív protein (hsCRP) szérumszintjét Behring Nephelometer II (Dade Behring, Tokió, Japán) segítségével mérjük. Az IL-6 és MCP-1 szérumszintjét a kereskedelemben kapható enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, USA) mérik. A szérum 8-izoprosztán koncentrációját ELISA vizsgálattal (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA) mértük 3 pg/ml kimutatási határ mellett, a gyártó utasítása szerint.

A szérum eotaxin szintjét kereskedelmi ELISA készlettel határozzák meg (R&D rendszerek, Minneapolis, MN, USA) a gyártó protokollja szerint. Röviden, eotaxin elleni egér antihumán antitestet használnak az eotaxin plazmából történő befogására. A befogott eotaxint biotinilált kecske antihumán eotaxin antitesttel mutatják ki. Mosás után a lemezeket streptavidin-HRP-vel inkubáljuk, megfelelő szubsztráttal előhívjuk, és az OD450-et ELISA lemezleolvasóval határozzuk meg. A méréseket két párhuzamosban végezzük egy olyan vizsgálatban, amely képes 10 pg eotaxint/ml kimutatni. A variációs értékek intra- és inter-assay koefficiense <4%, illetve <6%.

A Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I assay (Siemens Healthineers) egy hárompontos szendvics immunoassay 1,6 ng/l kimutatási határral és 2,5 ng/l mennyiségi meghatározási határral. A 99. centilis felső referenciahatárt 2007-ben egészséges egyénektől vett mintákban 34 ng/l-ben határozták meg nőknél és 53 ng/L-ben férfiaknál, egyetlen 45 ng/l küszöbértékkel. A referencia-populációban a betegek 75%-ánál nagyobbak az értékek, mint a kimutatási határ. Valamennyi mérést egy központi laboratóriumban végeztek, akik nem láttak minden klinikai információt, és az eredményeket a kutatócsoport rendelkezésére bocsátották, és elemzés céljából összekapcsolták a vizsgálati adatbázissal.

A szérumalbumin redox állapotát humán merkaptalbumin (HMA), humán nem merkaptalbumin-1 (HNA-1) és humán nem merkaptalbumin-2 (HNA-2) frakcionálásával határoztuk meg nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC).