Virus chřipky A a destabilizace aterosklerotických karotidových plaků (VIRAL)

Ze zdravotní dokumentace budou anonymně shromažďovány následující údaje:

• osobní údaje (věk, pohlaví);
• komorbidita (přítomnost kardiovaskulárních rizikových faktorů: arteriální hypertenze, kouření, dyslipidémie, ischemická choroba srdeční, CHOPN, diabetes mellitus; chronické selhání ledvin, cerebrovaskulární ischemické příhody v anamnéze);
• anamnéza očkování proti chřipce;
• klinické (váha, výška); Podle klinické praxe budou pacienti podstupovat operaci karotidové endarterektomie. Při vstupu na operační sál bude pacientům odebráno 4 ml krve do 4 zkumavek se specifickým antikoagulantem (EDTA) z periferního žilního vstupu již umístěného pro operační výkon bez ohledu na studii. Tyto krevní vzorky budou uchovávány a vhodně zpracovány pro jednotlivé analýzy.

Vzorky aterosklerotického plátu odstraněné během operace budou také vhodně uloženy pro následná vyšetření.

Shromážděné údaje budou vloženy do vyhrazeného e-CRF a náležitě analyzovány.

Použití vzorků krve Mononukleární buňky periferní krve (PBMC) budou separovány a izolovány ze vzorku žilní krve pomocí gradientu Percoll. Tyto buňky budou vhodně stimulovány antigeny viru chřipky A za použití specifických komerčních souprav. Tento proces umožní hodnocení imunitní reaktivity vůči viru, a to jak ve skupině pacientů s vulnerabilním karotickým plakem (skupina A), tak iu pacientů s nezranitelným plakem (skupina B). Na séru stejných vzorků bude pomocí ELISA hodnocena kvantitativní exprese některých cytokinů/chemokinů účastnících se zánětu a aterosklerotického procesu (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1). metoda).

Bude také provedeno příslušné hodnocení protilátek za účelem testování jakýchkoli akutních infekcí IV A.

Použití vaskulárních vzorků Histologická vyšetření budou prováděna na vzorcích aterosklerotického plátu, což umožní určit vulnerabilitu plaku nebo jinou zranitelnost takovým způsobem, aby byly definovány dvě skupiny pacientů (A, zranitelný plak; B, nezranitelný plak ), které mají být analyzovány. a porovnat.

Na stejných vzorcích budou také provedeny testy Western-Blot a imunohistochemické analýzy, aby se vyhodnotila kvantitativní a kvalitativní exprese některých molekul (V-CAM, I-CAM, E-Selektiny) a receptorů, které identifikují buňky scavengerových makrofágů (CD36 a lektiny - Jako Ox-LDL-receptor 1.

Nakonec budou stejné vzorky podrobeny analýze ELISA pro kvantitativní výzkum stejných cytokinů/chemokinů hodnocených ve vzorku krve pomocí RT-PCR. Na aterosklerotických plátech bude vyhodnocena možná přítomnost virové RNA pomocí jednokrokové RT-PCR, stejně jako reaktivita T-specifických buněk na virus IV A po přípravě vhodných buněčných kultur, které budou stimulovány stejnou komerční soupravou použito ke stimulaci PMBC periferní krve, podle metody popsané Kellerem et al. Vedle toho bude kontrolována možná přítomnost virové nebo bakteriální DNA v plakech. Prostřednictvím Real Time PCR bude analyzována zejména přítomnost DNA z lidských polyomavirů a lidských herpesvirů (viry herpes simplex 7 a 2, virus varicella zoster, virus Epstein-Barrové, lidský cytomegalovirus, lidský herpesvirus 6) a chlamydií.

Hodnocení specifické reaktivity T-buněk k viru IV A S ohledem na metodu popsanou Kellerem a kol. bude vyhodnocen stimulační index (SI) jak na vzorku krve, tak na aterosklerotickém plátu jako průměrný počet za minutu ( cpm) kultur s virem, děleno střední hodnotou cpm paralelních kultur bez virů.

Následně bude vypočítána reaktivita na základě poměru mezi SI plakových T lymfocytů a SI T lymfocytů periferní krve pro každého pacienta, definující pacienty reagující, pokud je poměr > 2 (pacienti se SI T lymfocytů T plaku významně vyšší než u periferní krve) a nereagují, pokud je poměr < 2 (v druhém případě pacienti s SI T buněk periferní krve větší než u plaku, nebo se SI T buňky Plaket T není významně vyšší než v periferní krvi).