Influenza-A-Virus und Destabilisierung atherosklerotischer Karotisplaques (VIRAL)

Aus den Krankenakten werden folgende Daten anonymisiert erhoben:

• persönliche Daten (Alter, Geschlecht);
• Komorbidität (Vorliegen kardiovaskulärer Risikofaktoren: arterielle Hypertonie, Rauchen, Dyslipidämie, ischämische Herzkrankheit, COPD, Diabetes mellitus; chronisches Nierenversagen, zerebrovaskuläre ischämische Ereignisse in der Vorgeschichte);
• Geschichte der Grippeimpfung;
• klinisch (Gewicht, Größe); Gemäß der klinischen Praxis werden sich die Patienten einer Karotisendarteriektomie unterziehen. Beim Betreten des Operationssaals werden den Patienten unabhängig von der Studie 4 ml Blut in 4 Röhrchen mit einem spezifischen Antikoagulans (EDTA) aus einem peripheren venösen Zugang entnommen, der bereits für den chirurgischen Eingriff positioniert ist. Diese Blutproben werden für individuelle Analysen aufbewahrt und entsprechend aufbereitet.

Proben von atherosklerotischem Plaque, die während der Operation entfernt wurden, werden ebenfalls für spätere Untersuchungen ordnungsgemäß aufbewahrt.

Die gesammelten Daten werden in das spezielle e-CRF eingegeben und entsprechend analysiert.

Verwendung von Blutproben Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) werden mithilfe eines Percoll-Gradienten aus der venösen Blutprobe abgetrennt und isoliert. Diese Zellen werden mithilfe spezieller kommerzieller Kits entsprechend mit Influenza-A-Virus-Antigenen stimuliert. Dieser Prozess ermöglicht die Bewertung der Immunreaktivität gegenüber dem Virus, sowohl bei der Gruppe der Patienten mit anfälliger Karotisplaque (Gruppe A) als auch bei Patienten mit nicht anfälliger Plaque (Gruppe B). Im Serum derselben Proben wird die quantitative Expression einiger Zytokine/Chemokine, die an Entzündungen und dem atherosklerotischen Prozess beteiligt sind (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1), mithilfe des ELISA bewertet Methode).

Es wird auch eine entsprechende Antikörperbewertung durchgeführt, um auf akute IV A-Infektionen zu testen.

Verwendung von Gefäßproben An atherosklerotischen Plaqueproben werden histologische Untersuchungen durchgeführt, die es ermöglichen, die Anfälligkeit oder Nichtanfälligkeit der Plaque zu bestimmen und so die beiden Patientengruppen (A, anfällige Plaque; B, nicht anfällige Plaque) zu definieren ) analysiert werden. und vergleichen.

An denselben Proben werden auch Western-Blot-Assays und immunhistochemische Analysen durchgeführt, um die quantitative und qualitative Expression einiger Moleküle (V-CAM, I-CAM, E-Selectine) und Rezeptoren zu bewerten, die Fress-Makrophagenzellen identifizieren (CD36 und Lektine – Wie Ox-LDL-Rezeptor 1.

Schließlich werden dieselben Proben einer ELISA-Analyse zur quantitativen Untersuchung derselben Zytokine/Chemokine unterzogen, die anhand der Blutprobe mittels RT-PCR bewertet werden. Das mögliche Vorhandensein viraler RNA auf den atherosklerotischen Plaques wird durch einstufige RT-PCR sowie die T-spezifische Zellreaktivität gegenüber dem IV A-Virus nach der Herstellung geeigneter Zellkulturen, die mit demselben kommerziellen Kit stimuliert werden, bewertet Wird zur Stimulierung des PMBC des peripheren Blutes gemäß der von Keller et al. beschriebenen Methode verwendet. Begleitend wird das mögliche Vorhandensein viraler oder bakterieller DNA in den Plaques überprüft. Insbesondere wird das Vorhandensein von DNA von menschlichen Polyomaviren und menschlichen Herpesviren (Herpes-simplex-Virus 7 und 2, Varicella-Zoster-Virus, Epstein-Barr-Virus, menschliches Zytomegalievirus, menschliches Herpesvirus 6) und Chlamydien mittels Echtzeit-PCR analysiert.

Bewertung der spezifischen T-Zell-Reaktivität gegenüber Virus IV A. Unter Bezugnahme auf die von Keller et al. beschriebene Methode wird der Stimulationsindex (SI) sowohl an der Blutprobe als auch an der atherosklerotischen Plaque als durchschnittliche Anzahl pro Minute ausgewertet ( cpm) von Kulturen mit dem Virus, geteilt durch den mittleren cpm von Parallelkulturen ohne Viren.

Anschließend wird die Reaktivität basierend auf dem Verhältnis zwischen dem SI der Plaque-T-Zellen und dem SI der peripheren Blut-T-Zellen für jeden Patienten berechnet. Ansprechende Patienten werden definiert, wenn das Verhältnis > 2 ist (Patienten mit SI der T-Zellen T der Plaque deutlich höher als die des peripheren Bluts) und nicht ansprechbar, wenn das Verhältnis < 2 ist (im letzteren Fall sind Patienten mit einem SI der T-Zellen des peripheren Bluts größer als der der Plaque oder mit einem SI von die T-Zellen (Plaque T) sind nicht signifikant höher als die des peripheren Blutes).