Influenza A VÍRUS és az ateroszklerotikus carotis plakkok destabilizációja (VIRAL)

Az alábbi adatokat anonim módon gyűjtjük az egészségügyi nyilvántartásból:

• személyes adatok (kor, nem);
• komorbiditás (cardiovascularis rizikófaktorok jelenléte: artériás magas vérnyomás, dohányzás, dyslipidaemia, ischaemiás szívbetegség, COPD, diabetes mellitus; krónikus veseelégtelenség, cerebrovascularis ischaemiás események anamnézisében);
• influenza elleni védőoltás története;
• klinikai (súly, magasság); A klinikai gyakorlat szerint a betegek carotis endarterectomiás műtéten esnek át. A műtőbe való belépéskor a betegek 4 ml vért vesznek 4 csőbe specifikus antikoagulánssal (EDTA) a műtéti beavatkozáshoz már elhelyezett perifériás vénás hozzáférésből, függetlenül a vizsgálattól. Ezeket a vérmintákat az egyéni elemzésekhez megfelelően tárolják és dolgozzák fel.

A műtét során eltávolított ateroszklerotikus plakk mintáit is megfelelően tárolják a későbbi vizsgálatokhoz.

Az összegyűjtött adatok bekerülnek a dedikált e-CRF-be, és megfelelően elemzik.

Vérminták használata A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) Percoll gradiens segítségével választják el és izolálják a vénás vérmintából. Ezeket a sejteket megfelelően stimulálják az influenza A vírus antigénjeivel, speciális kereskedelmi készletek felhasználásával. Ez az eljárás lehetővé teszi a vírussal szembeni immunreaktivitás értékelését, mind a sérülékeny carotis plakkos betegek csoportjában (A csoport), mind a nem sérülékeny plakkokkal (B csoport) szenvedő betegek csoportjában. Ugyanezen minták szérumán a gyulladásban és az ateroszklerotikus folyamatban szerepet játszó egyes citokinek/kemokinek (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1) mennyiségi expresszióját ELISA segítségével értékelik. módszer).

A megfelelő antitest értékelést is elvégzik az akut IV A fertőzések tesztelésére.

Érminták felhasználása Szövettani vizsgálatokat végeznek ateroszklerotikus plakk mintákon, amelyek lehetővé teszik a plakk sérülékenységének meghatározását oly módon, hogy meghatározzák a két betegcsoportot (A, sebezhető plakk; B, nem sérülékeny plakk ) elemezni kell. és hasonlítsa össze.

Ugyanezen mintákon Western-Blot vizsgálatokat és immunhisztokémiai elemzéseket is végeznek egyes molekulák (V-CAM, I-CAM, E-szelektinek) és receptorok mennyiségi és minőségi expressziójának értékelésére, amelyek azonosítják a scavenger makrofág sejteket (CD36 és lektinek - Mint az Ox-LDL-Receptor 1.

Végül ugyanazokat a mintákat ELISA analízisnek vetik alá ugyanazon citokinek/kemokinek kvantitatív kutatása céljából, amelyeket a vérmintán RT-PCR-rel értékeltek ki. A vírus RNS lehetséges jelenlétét az ateroszklerotikus plakkokon egylépéses RT-PCR-rel, valamint a T-specifikus sejt IV A vírussal szembeni reaktivitását a megfelelő sejttenyészetek elkészítése után, amelyeket ugyanazzal a kereskedelmi kittel stimulálnak. a perifériás vér PMBC-jének stimulálására alkalmazzák, Keller és munkatársai által leírt módszer szerint. Ezzel párhuzamosan ellenőrizni kell a vírus vagy bakteriális DNS lehetséges jelenlétét a plakkokban. Valós idejű PCR-rel elemzik különösen a humán poliomavírusokból és humán herpeszvírusokból (herpes simplex vírus 7 és 2, varicella zoster vírus, Epstein-Barr vírus, humán citomegalovírus, humán herpeszvírus 6) és Chlamydia DNS jelenlétét.

A IV A vírussal szembeni specifikus T-sejt-reaktivitás értékelése A Keller és munkatársai által leírt módszert alapul véve a stimulációs indexet (SI) mind a vérmintán, mind az atheroscleroticus plakkon értékeljük, mint az átlagos percenkénti számot ( cpm) vírust tartalmazó tenyészetek, osztva a vírus nélküli párhuzamos tenyészetek átlagos cpm értékével.

Ezt követően a reaktivitást a plakkos T-sejtek SI-je és a perifériás vér T-sejtek SI-értéke közötti arány alapján számítják ki minden egyes beteg esetében, meghatározva a reagáló betegeket, ha az arány > 2 (a T-sejtek SI-jével rendelkező betegek T. a plakk értéke szignifikánsan magasabb, mint a perifériás véré), és nem reagál, ha az arány < 2 (utóbbi esetben olyan betegeknél, akiknél a perifériás vér T-sejtjeinek SI-je nagyobb, mint a plakké, vagy a T-sejtek A plakk T nem szignifikánsan magasabb, mint a perifériás vér).