Influenza A VIRus og destabilisering af aterosklerotiske carotis plaques (VIRAL)

Følgende data vil blive indsamlet anonymt fra lægejournalerne:

• personlige oplysninger (alder, køn);
• komorbiditet (tilstedeværelse af kardiovaskulære risikofaktorer: arteriel hypertension, rygning, dyslipidæmi, iskæmisk hjertesygdom, KOL, diabetes mellitus; kronisk nyresvigt, anamnese med cerebrovaskulære iskæmiske hændelser);
• historie med influenzavaccination;
• klinisk (vægt, højde); I henhold til klinisk praksis vil patienter gennemgå carotis-endarterektomioperationer. Ved indtræden på operationsstuen vil patienter blive taget 4 ml blod i 4 rør med et specifikt antikoagulant (EDTA), fra en perifer venøs adgang, der allerede er placeret til den kirurgiske procedure, uanset undersøgelsen. Disse blodprøver vil blive opbevaret og behandlet passende til individuelle analyser.

Prøver af aterosklerotisk plak fjernet under operationen vil også blive opbevaret passende til efterfølgende undersøgelser.

De indsamlede data vil blive indtastet i den dedikerede e-CRF og analyseret korrekt.

Brug af blodprøver Perifere blodmononukleære celler (PBMC) vil blive adskilt og isoleret fra den venøse blodprøve ved hjælp af en Percoll-gradient. Disse celler vil blive passende stimuleret med influenza A-virus-antigener ved brug af specifikke kommercielle kits. Denne proces vil muliggøre evaluering af immunreaktivitet over for virussen, både i gruppen af ​​patienter med sårbar carotis plaque (gruppe A) og i dem med ikke-sårbar plak (gruppe B). På serum fra de samme prøver vil den kvantitative ekspression af nogle cytokiner/kemokiner involveret i inflammation og den aterosklerotiske proces (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1) blive evalueret ved hjælp af ELISA metode).

Den passende antistofevaluering vil også blive udført for at teste for eventuelle akutte IV A-infektioner.

Anvendelse af vaskulære prøver Histologiske undersøgelser vil blive udført på aterosklerotiske plaqueprøver, som gør det muligt at bestemme plaques sårbarhed eller ej, på en sådan måde, at de to grupper af patienter (A, sårbar plak; B, ikke-sårbar plak) defineres ) skal analyseres. og sammenligne.

Western-Blot-assays og immunhistokemiske analyser vil også blive udført på de samme prøver for at evaluere den kvantitative og kvalitative ekspression af nogle molekyler (V-CAM, I-CAM, E-Selectiner) og receptorer, der identificerer scavenger-makrofagceller (CD36 og Lectiner - Ligesom Ox-LDL-receptor 1.

Endelig vil de samme prøver blive underkastet ELISA-analyse til den kvantitative forskning af de samme cytokiner/kemokiner vurderet på blodprøven via RT-PCR. Den mulige tilstedeværelse af viralt RNA vil blive evalueret på de aterosklerotiske plaques ved et-trins RT-PCR, såvel som den T-specifikke cellereaktivitet over for IV A-virussen efter fremstilling af passende cellekulturer, som vil blive stimuleret med det samme kommercielle kit anvendes til at stimulere PMBC af perifert blod ifølge metoden beskrevet af Keller et al. Sideløbende vil den mulige tilstedeværelse af viralt eller bakterielt DNA i plaques blive kontrolleret. Især vil tilstedeværelsen af ​​DNA fra humane polyomavira og humane herpesvirus (herpes simplex virus 7 og 2, varicella zoster virus, Epstein-Barr virus, human cytomegalovirus, human herpesvirus 6) og Chlamydia blive analyseret gennem realtids PCR.

Evaluering af specifik T-celle-reaktivitet over for virus IV A Med udgangspunkt i metoden beskrevet af Keller et al. vil stimulationsindekset (SI) blive evalueret, både på blodprøven og på den aterosklerotiske plaque, som det gennemsnitlige antal pr. minut ( cpm) af kulturer med virus, divideret med middel-cpm af parallelle kulturer uden vira.

Efterfølgende vil reaktiviteten blive beregnet ud fra forholdet mellem SI af plaque T-cellerne og SI af de perifere blod-T-celler for hver patient, hvilket definerer responsive patienter, hvis forholdet er > 2 (patienter med SI af T-cellerne T af plaque signifikant højere end dem i det perifere blod), og reagerer ikke, hvis forholdet er < 2 (i sidstnævnte tilfælde er patienter med SI af T-cellerne i det perifere blod større end plaques, eller med SI på T-cellerne Plaque T ikke signifikant højere end dem i perifert blod).