Influenza A-VIRus en destabilisatie van atherosclerotische halsslagaderplaques (VIRAL)

De volgende gegevens worden anoniem uit de medische dossiers verzameld:

• persoonlijke gegevens (leeftijd, geslacht);
• comorbiditeit (aanwezigheid van cardiovasculaire risicofactoren: arteriële hypertensie, roken, dyslipidemie, ischemische hartziekte, COPD, diabetes mellitus; chronisch nierfalen, geschiedenis van cerebrovasculaire ischemische voorvallen);
• geschiedenis van griepvaccinatie;
• klinisch (gewicht, lengte); Volgens de klinische praktijk zullen patiënten een halsslagader-endarteriëctomie ondergaan. Bij binnenkomst in de operatiekamer wordt bij de patiënt 4 ml bloed afgenomen in 4 buisjes met een specifiek anticoagulans (EDTA), via een perifere veneuze toegang die al is gepositioneerd voor de chirurgische ingreep, ongeacht het onderzoek. Deze bloedmonsters worden op passende wijze opgeslagen en verwerkt voor individuele analyses.

Monsters van atherosclerotische plaque die tijdens de operatie zijn verwijderd, zullen ook op de juiste manier worden bewaard voor daaropvolgende onderzoeken.

De verzamelde gegevens worden ingevoerd in het speciale e-CRF en op passende wijze geanalyseerd.

Gebruik van bloedmonsters Mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC) worden gescheiden en geïsoleerd uit het veneuze bloedmonster met behulp van een Percoll-gradiënt. Deze cellen zullen op passende wijze worden gestimuleerd met influenza A-virusantigenen met behulp van specifieke commerciële kits. Dit proces zal de evaluatie van de immuunreactiviteit tegen het virus mogelijk maken, zowel bij de groep patiënten met kwetsbare plaque in de halsslagader (groep A) als bij patiënten met niet-kwetsbare plaque (groep B). Op het serum van dezelfde monsters zal de kwantitatieve expressie van bepaalde cytokines/chemokines die betrokken zijn bij ontstekingen en het atherosclerotische proces (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1) worden geëvalueerd met behulp van de ELISA methode).

De juiste antilichaamevaluatie zal ook worden uitgevoerd om te testen op eventuele acute IV A-infecties.

Gebruik van vasculaire monsters Er zal histologisch onderzoek worden uitgevoerd op monsters van atherosclerotische plaques, waardoor de kwetsbaarheid of anderszins van de plaque kan worden bepaald, op een zodanige manier dat de twee groepen patiënten kunnen worden gedefinieerd (A, kwetsbare plaque; B, niet-kwetsbare plaque ) te analyseren. en vergelijk.

Western-Blot-tests en immunohistochemische analyses zullen ook worden uitgevoerd op dezelfde monsters om de kwantitatieve en kwalitatieve expressie van sommige moleculen (V-CAM, I-CAM, E-selectines) en receptoren die wegvangende macrofaagcellen identificeren (CD36 en lectines - te evalueren). Zoals Ox-LDL-Receptor 1.

Tenslotte zullen dezelfde monsters worden onderworpen aan ELISA-analyse voor het kwantitatieve onderzoek van dezelfde cytokines/chemokines die via RT-PCR op het bloedmonster worden geëvalueerd. De mogelijke aanwezigheid van viraal RNA zal worden geëvalueerd op de atherosclerotische plaques door middel van éénstaps RT-PCR, evenals de T-specifieke celreactiviteit tegen het IVA-virus na de bereiding van geschikte celculturen die zullen worden gestimuleerd met dezelfde commerciële kit. gebruikt om de PMBC van perifeer bloed te stimuleren, volgens de methode beschreven door Keller et al. Daarnaast zal de mogelijke aanwezigheid van viraal of bacterieel DNA in de plaques worden gecontroleerd. In het bijzonder zal de aanwezigheid van DNA van menselijke polyomavirussen en menselijke herpesvirussen (herpes simplex virus 7 en 2, varicella zoster virus, Epstein-Barr virus, menselijk cytomegalovirus, menselijk herpesvirus 6) en Chlamydia worden geanalyseerd via Real Time PCR.

Evaluatie van de specifieke T-celreactiviteit tegen virus IV A Met als referentie de methode beschreven door Keller et al. zal de stimulatie-index (SI) worden geëvalueerd, zowel op het bloedmonster als op de atherosclerotische plaque, als het gemiddelde aantal per minuut ( cpm) van culturen met het virus, gedeeld door het gemiddelde cpm van parallelle culturen zonder virussen.

Vervolgens wordt de reactiviteit berekend op basis van de verhouding tussen de SI van de plaque-T-cellen en de SI van de perifere bloed-T-cellen voor elke patiënt, waarbij responsieve patiënten worden gedefinieerd als de verhouding > 2 is (patiënten met SI van de T-cellen T-cellen). van de plaque aanzienlijk hoger dan die van het perifere bloed), en reageren niet als de verhouding < 2 is (in het laatste geval zijn patiënten met een SI van de T-cellen van het perifere bloed groter dan die van de plaque, of met een SI van de T-cellen Plaque T niet significant hoger dan die van perifeer bloed).