VIRus dell'influenza A e destabilizzazione delle placche carotidee aterosclerotiche (VIRAL)

Dalla cartella clinica verranno raccolti in forma anonima i seguenti dati:

• dati anagrafici (età, sesso);
• comorbilità (presenza di fattori di rischio cardiovascolare: ipertensione arteriosa, fumo, dislipidemia, cardiopatia ischemica, BPCO, diabete mellito; insufficienza renale cronica, storia di eventi ischemici cerebrovascolari);
• storia della vaccinazione antinfluenzale;
• clinico (peso, altezza); Come da pratica clinica, i pazienti verranno sottoposti a intervento di endoarteriectomia carotidea. All'ingresso in sala operatoria, ai pazienti verranno prelevati 4 ml di sangue in 4 provette con un anticoagulante specifico (EDTA), da un accesso venoso periferico già posizionato per l'intervento chirurgico indipendentemente dallo studio. Questi campioni di sangue verranno conservati ed elaborati in modo appropriato per le analisi individuali.

Anche i campioni di placca aterosclerotica asportati durante l'intervento verranno opportunamente conservati per le indagini successive.

I dati raccolti verranno inseriti nella e-CRF dedicata ed opportunamente analizzati.

Utilizzo dei campioni di sangue Le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) saranno separate e isolate dal campione di sangue venoso utilizzando un gradiente di Percoll. Queste cellule verranno opportunamente stimolate con antigeni del virus dell'influenza A utilizzando specifici kit commerciali. Questo processo consentirà la valutazione della reattività immunitaria al virus, sia nel gruppo di pazienti con placca carotidea vulnerabile (gruppo A) che in quelli con placca non vulnerabile (gruppo B). Sul siero degli stessi campioni verrà valutata mediante metodo ELISA l'espressione quantitativa di alcune citochine/chemochine coinvolte nell'infiammazione e nel processo aterosclerotico (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1). metodo).

Verrà inoltre eseguita l'appropriata valutazione degli anticorpi per verificare eventuali infezioni acute IV A.

Utilizzo di campioni vascolari Su campioni di placca aterosclerotica verranno effettuate indagini istologiche che consentiranno di determinare la vulnerabilità o meno della placca, in modo tale da definire i due gruppi di pazienti (A, placca vulnerabile; B, placca non vulnerabile ) da analizzare. e confrontare.

Sugli stessi campioni verranno inoltre eseguiti saggi Western-Blot e analisi immunoistochimiche per valutare l'espressione quantitativa e qualitativa di alcune molecole (V-CAM, I-CAM, E-Selectine) e recettori che identificano cellule macrofagi scavenger (CD36 e Lectine - Come il recettore Ox-LDL 1.

Infine, gli stessi campioni verranno sottoposti ad analisi ELISA per la ricerca quantitativa delle stesse citochine/chemochine valutate sul campione di sangue tramite RT-PCR. L'eventuale presenza di RNA virale sarà valutata sulle placche aterosclerotiche mediante RT-PCR one step, così come la reattività delle cellule T-specifiche al virus IV A dopo la preparazione di opportune colture cellulari che saranno stimolate con lo stesso kit commerciale. utilizzato per stimolare il PMBC del sangue periferico, secondo il metodo descritto da Keller et al. Collateralmente verrà verificata l'eventuale presenza di DNA virale o batterico nelle placche. In particolare, la presenza di DNA di Poliomavirus Umani e Herpesvirus Umani (virus herpes simplex 7 e 2, virus varicella zoster, virus Epstein-Barr, citomegalovirus umano, herpesvirus umano 6) e Chlamydia sarà analizzata mediante Real Time PCR.

Valutazione della reattività specifica delle cellule T al virus IV A Prendendo come riferimento il metodo descritto da Keller et al, l'indice di stimolazione (SI) sarà valutato, sia sul campione di sangue che sulla placca aterosclerotica, come conteggio medio al minuto ( cpm) di colture con il virus, diviso per la media di cpm di colture parallele senza virus.

Successivamente, la reattività verrà calcolata in base al rapporto tra l'SI delle cellule T della placca e l'SI delle cellule T del sangue periferico per ciascun paziente, definendo pazienti responsivi se il rapporto è > 2 (pazienti con SI delle cellule T T della placca significativamente più alti di quelli del sangue periferico), e non responsivi se il rapporto è < 2 (in quest'ultimo caso, pazienti con SI delle cellule T del sangue periferico maggiore di quelle della placca, o con SI di le cellule T Placca T non significativamente più alte di quelle del sangue periferico).