VIRus de la grippe A et déstabilisation des plaques carotidiennes athéroscléreuses (VIRAL)

Les données suivantes seront collectées de manière anonyme à partir des dossiers médicaux :

• données personnelles (âge, sexe) ;
• comorbidité (présence de facteurs de risque cardiovasculaire : hypertension artérielle, tabagisme, dyslipidémie, cardiopathie ischémique, BPCO, diabète sucré ; insuffisance rénale chronique, antécédents d'événements ischémiques cérébrovasculaires) ;
• antécédents de vaccination contre la grippe ;
• clinique (poids, taille) ; Conformément à la pratique clinique, les patients subiront une chirurgie d'endartériectomie carotidienne. Dès leur entrée en salle d'opération, les patients recevront 4 ml de sang dans 4 tubes avec un anticoagulant spécifique (EDTA), à partir d'un accès veineux périphérique déjà positionné pour l'intervention chirurgicale quelle que soit l'étude. Ces échantillons de sang seront conservés et traités de manière appropriée pour des analyses individuelles.

Des échantillons de plaque athéroscléreuse retirés pendant la chirurgie seront également conservés de manière appropriée pour des investigations ultérieures.

Les données collectées seront saisies dans l'e-CRF dédié et analysées de manière appropriée.

Utilisation d'échantillons de sang Les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) seront séparées et isolées de l'échantillon de sang veineux à l'aide d'un gradient de Percoll. Ces cellules seront stimulées de manière appropriée avec des antigènes du virus grippal A à l'aide de kits commerciaux spécifiques. Ce procédé permettra d'évaluer la réactivité immunitaire au virus, aussi bien dans le groupe de patients présentant une plaque carotidienne vulnérable (groupe A) que chez ceux présentant une plaque non vulnérable (groupe B). Sur le sérum des mêmes échantillons, l'expression quantitative de certaines cytokines/chimiokines impliquées dans l'inflammation et le processus athérosclérotique (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1) sera évaluée par l'ELISA. méthode).

L'évaluation appropriée des anticorps sera également effectuée pour rechercher toute infection aiguë par IV A.

Utilisation d'échantillons vasculaires Des investigations histologiques seront réalisées sur des échantillons de plaque d'athérosclérose qui permettront de déterminer la vulnérabilité ou non de la plaque, de manière à définir les deux groupes de patients (A, plaque vulnérable ; B, plaque non vulnérable. ) à analyser. et comparer.

Des tests Western-Blot et des analyses immunohistochimiques seront également effectués sur les mêmes échantillons pour évaluer l'expression quantitative et qualitative de certaines molécules (V-CAM, I-CAM, E-Sélectines) et de récepteurs identifiant les cellules macrophages charognards (CD36 et Lectines - Comme le récepteur Ox-LDL 1.

Enfin, les mêmes échantillons seront soumis à une analyse ELISA pour la recherche quantitative des mêmes cytokines/chimiokines évaluées sur l'échantillon de sang via RT-PCR. La présence éventuelle d'ARN viral sera évaluée sur les plaques d'athérosclérose par RT-PCR en une étape, ainsi que la réactivité des cellules T spécifiques au virus IV A après la préparation de cultures cellulaires appropriées qui seront stimulées avec le même kit commercial. utilisé pour stimuler les PMBC du sang périphérique, selon la méthode décrite par Keller et al. Collatéralement, la présence éventuelle d'ADN viral ou bactérien dans les plaques sera vérifiée. En particulier, la présence d'ADN de polyomavirus humains et d'herpèsvirus humains (virus de l'herpès simplex 7 et 2, virus varicelle-zona, virus d'Epstein-Barr, cytomégalovirus humain, herpèsvirus humain 6) et de Chlamydia sera analysée par PCR en temps réel.

Évaluation de la réactivité spécifique des lymphocytes T au virus IV A En prenant comme référence la méthode décrite par Keller et al, l'indice de stimulation (SI) sera évalué, tant sur l'échantillon de sang que sur la plaque d'athérosclérose, comme le compte moyen par minute ( cpm) des cultures avec le virus, divisé par le cpm moyen des cultures parallèles sans virus.

Par la suite, la réactivité sera calculée en fonction du rapport entre le SI des cellules T de la plaque et le SI des cellules T du sang périphérique pour chaque patient, définissant les patients réactifs si le rapport est > 2 (patients avec SI des cellules T T de la plaque significativement supérieurs à ceux du sang périphérique), et non réactifs si le rapport est < 2 (dans ce dernier cas, les patients avec un SI des lymphocytes T du sang périphérique supérieur à ceux de la plaque, ou avec un SI de les lymphocytes T (Plaque T non significativement supérieure à celles du sang périphérique).