Wirus grypy A i destabilizacja blaszek miażdżycowych w tętnicach szyjnych (VIRAL)

Z dokumentacji medycznej anonimowo będą zbierane następujące dane:

• dane osobowe (wiek, płeć);
• choroby współistniejące (obecność czynników ryzyka sercowo-naczyniowego: nadciśnienie tętnicze, palenie tytoniu, dyslipidemia, choroba niedokrwienna serca, POChP, cukrzyca; przewlekła niewydolność nerek, incydenty niedokrwienne mózgu w wywiadzie);
• historia szczepień przeciwko grypie;
• kliniczne (waga, wzrost); Zgodnie z praktyką kliniczną pacjenci zostaną poddani operacji endarterektomii tętnicy szyjnej. Po wejściu na salę operacyjną pacjentom zostanie pobrane 4 ml krwi w 4 probówkach ze specyficznym antykoagulantem (EDTA) z dostępu żylnego obwodowego przygotowanego już do zabiegu chirurgicznego, niezależnie od badania. Te próbki krwi będą przechowywane i przetwarzane odpowiednio do indywidualnych analiz.

Próbki blaszki miażdżycowej usuniętej podczas operacji będą również odpowiednio przechowywane do późniejszych badań.

Zebrane dane zostaną wprowadzone do dedykowanego e-CRF i odpowiednio przeanalizowane.

Wykorzystanie próbek krwi Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) zostaną oddzielone i wyizolowane z próbki krwi żylnej przy użyciu gradientu Percoll. Komórki te będą odpowiednio stymulowane antygenami wirusa grypy A przy użyciu specjalnych zestawów dostępnych na rynku. Proces ten umożliwi ocenę reaktywności immunologicznej na wirusa, zarówno w grupie pacjentów z wrażliwą blaszką szyjną (grupa A), jak i tych z niewrażliwą blaszką (grupa B). W surowicy tych samych próbek ilościowa ekspresja niektórych cytokin/chemokin biorących udział w procesie zapalnym i procesie miażdżycowym (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1) zostanie oceniona za pomocą testu ELISA metoda).

Przeprowadzona zostanie również odpowiednia ocena przeciwciał w celu sprawdzenia, czy nie występują ostre zakażenia dożylne.

Wykorzystanie próbek naczyniowych Badania histologiczne zostaną przeprowadzone na próbkach blaszki miażdżycowej, co umożliwi określenie wrażliwości lub braku blaszki w taki sposób, aby zdefiniować dwie grupy pacjentów (A, blaszka wrażliwa; B, blaszka niewrażliwa ) do analizy. i porównaj.

Na tych samych próbkach zostaną również przeprowadzone testy Western-Blot i analizy immunohistochemiczne w celu oceny ilościowej i jakościowej ekspresji niektórych cząsteczek (V-CAM, I-CAM, E-selektyny) i receptorów identyfikujących komórki makrofagów zmiatających (CD36 i lektyny - Podobnie jak receptor Ox-LDL 1.

Na koniec te same próbki zostaną poddane analizie ELISA w celu ilościowego badania tych samych cytokin/chemokin ocenianych w próbce krwi metodą RT-PCR. Ewentualna obecność wirusowego RNA na blaszkach miażdżycowych zostanie oceniona metodą jednoetapowej RT-PCR, a także reaktywność komórek T-specyficznych na wirusa IV A po przygotowaniu odpowiednich hodowli komórkowych, które będą stymulowane tym samym komercyjnym zestawem stosowany do stymulacji PMBC krwi obwodowej, zgodnie z metodą opisaną przez Kellera i in. Dodatkowo zostanie sprawdzona ewentualna obecność wirusowego lub bakteryjnego DNA w łysinkach. W szczególności obecność DNA ludzkich poliomawirusów i ludzkich wirusów opryszczki (wirusy opryszczki pospolitej 7 i 2, wirus ospy wietrznej i półpaśca, wirus Epsteina-Barra, ludzki wirus cytomegalii, ludzki wirus opryszczki 6) i chlamydii będzie analizowana za pomocą metody Real Time PCR.

Ocena specyficznej reaktywności limfocytów T na wirusa IV A Biorąc za punkt odniesienia metodę opisaną przez Kellera i wsp., wskaźnik stymulacji (SI) będzie oceniany zarówno w próbce krwi, jak i blaszce miażdżycowej, jako średnia liczba minut na minutę ( cpm) hodowli z wirusem podzielone przez średnią cpm równoległych hodowli bez wirusów.

Następnie reaktywność zostanie obliczona na podstawie stosunku SI limfocytów T płytki nazębnej do SI limfocytów T krwi obwodowej dla każdego pacjenta, definiując pacjentów reagujących, jeśli stosunek ten wynosi > 2 (pacjenci z SI limfocytów T T blaszki znacznie wyższe niż w krwi obwodowej) i nie reagują, jeśli stosunek wynosi < 2 (w tym drugim przypadku pacjenci z SI limfocytów T krwi obwodowej większymi niż płytki lub z SI limfocytów T Plaque T nie jest znacząco wyższa niż w krwi obwodowej).