Вирус гриппа А и дестабилизация атеросклеротических каротидных бляшек (VIRAL)

Следующие данные будут собраны анонимно из медицинских записей:

• личные данные (возраст, пол);
• коморбидность (наличие сердечно-сосудистых факторов риска: артериальная гипертензия, курение, дислипидемия, ишемическая болезнь сердца, ХОБЛ, сахарный диабет; хроническая почечная недостаточность, ишемические явления мозгового кровообращения в анамнезе);
• история вакцинации против гриппа;
• клинические (вес, рост); Согласно клинической практике пациентам проводят операцию каротидной эндартерэктомии. При входе в операционную у пациентов возьмут по 4 мл крови в 4 пробирки со специфическим антикоагулянтом (ЭДТА) из периферического венозного доступа, уже подготовленного для хирургической процедуры, независимо от исследования. Эти образцы крови будут храниться и обрабатываться соответствующим образом для индивидуальных анализов.

Образцы атеросклеротических бляшек, удаленных во время операции, также будут храниться соответствующим образом для последующих исследований.

Собранные данные будут введены в специальную электронную ИРК и соответствующим образом проанализированы.

Использование образцов крови Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) будут отделены и выделены из образца венозной крови с использованием градиента Перколла. Эти клетки будут соответствующим образом стимулированы антигенами вируса гриппа А с использованием специальных коммерческих наборов. Этот процесс позволит оценить иммунную реактивность к вирусу как в группе пациентов с уязвимой каротидной бляшкой (группа А), так и у пациентов с неуязвимой бляшкой (группа Б). В сыворотке тех же образцов с помощью ИФА оценят количественную экспрессию некоторых цитокинов/хемокинов, участвующих в воспалении и атеросклеротическом процессе (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1). метод).

Соответствующая оценка антител также будет проведена для выявления каких-либо острых инфекций IV А.

Использование сосудистых образцов Гистологические исследования будут проводиться на образцах атеросклеротических бляшек, что позволит определить уязвимость или неуязвимость бляшки таким образом, чтобы определить две группы пациентов (A – уязвимая бляшка; B – неуязвимая бляшка). ), подлежащий анализу. и сравните.

Вестерн-блоттинг и иммуногистохимический анализ также будут проводиться на тех же образцах для оценки количественной и качественной экспрессии некоторых молекул (V-CAM, I-CAM, E-селектины) и рецепторов, которые идентифицируют макрофагальные клетки-мусорщики (CD36 и лектины - Подобно Ox-LDL-рецептору 1.

Наконец, те же образцы будут подвергнуты анализу ELISA для количественного исследования тех же цитокинов/хемокинов, оцененных в образце крови с помощью RT-PCR. Возможное присутствие вирусной РНК будет оцениваться на атеросклеротических бляшках с помощью одноэтапной ОТ-ПЦР, а также реактивность Т-специфических клеток к вирусу IV А после приготовления соответствующих клеточных культур, которые будут стимулированы тем же коммерческим набором. применяют для стимуляции ПМК периферической крови по методу, описанному Keller et al. Дополнительно будет проверено возможное присутствие вирусной или бактериальной ДНК в бляшках. В частности, с помощью ПЦР в реальном времени будет анализироваться наличие ДНК полиомавирусов человека и вирусов герпеса человека (вирус простого герпеса 7 и 2, вирус ветряной оспы, вирус Эпштейна-Барра, цитомегаловирус человека, вирус герпеса человека 6) и хламидий.

Оценка специфической реактивности Т-клеток к вирусу IV A. Принимая за основу метод, описанный Келлером и др., индекс стимуляции (SI) будет оцениваться как на образце крови, так и на атеросклеротических бляшках, как среднее количество в минуту ( cpm) культур с вирусом, разделенное на среднее значение cpm параллельных культур без вирусов.

Впоследствии реактивность будет рассчитываться на основе соотношения между SI Т-клеток бляшек и SI Т-клеток периферической крови для каждого пациента, определяя пациентов, отвечающих на лечение, если соотношение > 2 (пациенты с SI Т-клеток T бляшки значительно выше, чем в периферической крови), и не реагирует, если соотношение < 2 (в последнем случае у пациентов с ИС Т-клеток периферической крови выше, чем у бляшек, или с ИС Т-клетки бляшек Т достоверно не выше, чем в периферической крови).