VÍRUS Influenza A e desestabilização de placas carotídeas ateroscleróticas (VIRAL)

Os seguintes dados serão coletados anonimamente dos prontuários médicos:

• dados pessoais (idade, sexo);
• comorbidade (presença de fatores de risco cardiovasculares: hipertensão arterial, tabagismo, dislipidemia, cardiopatia isquêmica, DPOC, diabetes mellitus; insuficiência renal crônica, história de eventos isquêmicos cerebrovasculares);
• histórico de vacinação contra gripe;
• clínico (peso, altura); De acordo com a prática clínica, os pacientes serão submetidos à cirurgia de endarterectomia carotídea. Ao entrar na sala de cirurgia, os pacientes receberão 4 ml de sangue em 4 tubos com anticoagulante específico (EDTA), de acesso venoso periférico já posicionado para o procedimento cirúrgico independente do estudo. Essas amostras de sangue serão armazenadas e processadas adequadamente para análises individuais.

Amostras de placa aterosclerótica removidas durante a cirurgia também serão armazenadas de forma adequada para investigações subsequentes.

Os dados coletados serão inseridos no e-CRF dedicado e devidamente analisados.

Uso de amostras de sangue As células mononucleares do sangue periférico (PBMC) serão separadas e isoladas da amostra de sangue venoso usando um gradiente de Percoll. Essas células serão estimuladas adequadamente com antígenos do vírus influenza A utilizando kits comerciais específicos. Este processo permitirá avaliar a reatividade imunológica ao vírus, tanto no grupo de pacientes com placa carotídea vulnerável (grupo A) quanto naqueles com placa não vulnerável (grupo B). No soro das mesmas amostras, será avaliada a expressão quantitativa de algumas citocinas/quimiocinas envolvidas na inflamação e no processo aterosclerótico (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1) por meio do ELISA. método).

A avaliação apropriada de anticorpos também será realizada para testar qualquer infecção IV A aguda.

Utilização de amostras vasculares As investigações histológicas serão realizadas em amostras de placas ateroscleróticas que permitirão determinar a vulnerabilidade ou não da placa, de forma a definir os dois grupos de pacientes (A, placa vulnerável; B, placa não vulnerável ) a ser analisado. e compare.

Ensaios Western-Blot e análises imuno-histoquímicas também serão realizados nas mesmas amostras para avaliar a expressão quantitativa e qualitativa de algumas moléculas (V-CAM, I-CAM, E-Selectinas) e receptores que identificam células macrófagos necrófagas (CD36 e Lectinas - Como o receptor 1 de LDL-boi.

Por fim, as mesmas amostras serão submetidas à análise ELISA para pesquisa quantitativa das mesmas citocinas/quimiocinas avaliadas na amostra de sangue via RT-PCR. A possível presença de RNA viral será avaliada nas placas ateroscleróticas por RT-PCR em uma etapa, bem como a reatividade das células T específicas ao vírus IV A após a preparação de culturas celulares apropriadas que serão estimuladas com o mesmo kit comercial. utilizado para estimular o PMBC do sangue periférico, conforme método descrito por Keller et al. Colateralmente, será verificada a possível presença de DNA viral ou bacteriano nas placas. Em particular, a presença de DNA de Poliomavírus Humanos e Herpesvírus Humanos (vírus herpes simplex 7 e 2, vírus varicela zoster, vírus Epstein-Barr, citomegalovírus humano, herpesvírus humano 6) e Clamídia será analisada através de PCR em tempo real.

Avaliação da reatividade específica de células T ao vírus IV A Tomando como referência o método descrito por Keller et al, o índice de estimulação (IS) será avaliado, tanto na amostra de sangue quanto na placa aterosclerótica, como a contagem média por minuto ( cpm) de culturas com vírus, dividido pela média de cpm de culturas paralelas sem vírus.

Posteriormente, a reatividade será calculada com base na razão entre o SI das células T da placa e o SI das células T do sangue periférico para cada paciente, definindo pacientes responsivos se a relação for > 2 (pacientes com SI das células T T da placa significativamente maiores que os do sangue periférico), e não responde se a relação for < 2 (neste último caso, pacientes com SI das células T do sangue periférico maiores que as da placa, ou com SI de as células T Placa T não são significativamente superiores às do sangue periférico).