Influenssa A -virus ja ateroskleroottisten kaulavaltimon plakkien epävakaus (VIRAL)

Seuraavat tiedot kerätään anonyymisti lääketieteellisistä tiedoista:

• henkilötiedot (ikä, sukupuoli);
• liitännäissairaus (sydän- ja verisuonisairauksien riskitekijöiden esiintyminen: verenpainetauti, tupakointi, dyslipidemia, iskeeminen sydänsairaus, keuhkoahtaumatauti, diabetes mellitus; krooninen munuaisten vajaatoiminta, aivojen verisuonten iskeemiset tapahtumat historiassa);
• influenssarokotuksen historia;
• kliininen (paino, pituus); Kliinisen käytännön mukaisesti potilaille tehdään kaulavaltimon endarterektomialeikkaus. Leikkaussaliin saapuessaan potilaalle otetaan 4 ml verta 4 putkeen spesifisellä antikoagulantilla (EDTA) tutkimuksesta riippumatta perifeerisestä laskimopäästä, joka on jo sijoitettu kirurgiseen toimenpiteeseen. Nämä verinäytteet säilytetään ja käsitellään asianmukaisesti yksittäisiä analyyseja varten.

Myös leikkauksen aikana poistetut näytteet ateroskleroottisesta plakista säilytetään asianmukaisesti myöhempiä tutkimuksia varten.

Kerätyt tiedot syötetään erityiseen e-CRF:ään ja analysoidaan asianmukaisesti.

Verinäytteiden käyttö Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC) erotetaan ja eristetään laskimoverinäytteestä käyttämällä Percoll-gradienttia. Näitä soluja stimuloidaan asianmukaisesti influenssa A -viruksen antigeeneillä käyttämällä erityisiä kaupallisia tarvikkeita. Tämä prosessi mahdollistaa immuunireaktiivisuuden arvioinnin virukselle sekä potilaiden ryhmässä, joilla on herkkä kaulavaltimoplakki (ryhmä A) että ei-haavoittuva plakki (ryhmä B). Samojen näytteiden seerumista arvioidaan joidenkin tulehdukseen ja ateroskleroottiseen prosessiin osallistuvien sytokiinien/kemokiinien (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1) kvantitatiivinen ilmentyminen ELISA:lla. menetelmä).

Asianmukainen vasta-ainearviointi suoritetaan myös mahdollisten akuuttien IV A-infektioiden testaamiseksi.

Verisuoninäytteiden käyttö Ateroskleroottisen plakin näytteille tehdään histologiset tutkimukset, jotka mahdollistavat plakin haavoittuvuuden määrittämisen siten, että voidaan määritellä kaksi potilasryhmää (A, haavoittuva plakki; B, ei-haavoittuva plakki) ) analysoitava. ja vertailla.

Samoille näytteille tehdään myös Western-Blot-määrityksiä ja immunohistokemiallisia analyysejä joidenkin molekyylien (V-CAM, I-CAM, E-selektiinit) ja reseptoreiden, jotka tunnistavat scavenger-makrofagisoluja (CD36 ja lektiinit) kvantitatiivisen ja kvalitatiivisen ilmentymisen arvioimiseksi. Kuten Ox-LDL-reseptori 1.

Lopuksi samoille näytteille tehdään ELISA-analyysi samojen sytokiinien/kemokiinien kvantitatiivista tutkimusta varten, jotka on arvioitu verinäytteestä RT-PCR:llä. Viruksen RNA:n mahdollinen esiintyminen ateroskleroottisissa plakeissa arvioidaan yksivaiheisella RT-PCR:llä, samoin kuin T-spesifinen solureaktiivisuus IV A-virukselle sopivien soluviljelmien valmistuksen jälkeen, joita stimuloidaan samalla kaupallisella pakkauksella. käytetään stimuloimaan ääreisveren PMBC:tä Kellerin et ai. kuvaaman menetelmän mukaisesti. Sivusuunnassa tarkistetaan mahdollisen virus- tai bakteeri-DNA:n esiintyminen plakeissa. Erityisesti DNA:n läsnäolo ihmisen polyomaviruksista ja ihmisen herpesviruksista (herpes simplex -virus 7 ja 2, varicella zoster -virus, Epstein-Barr-virus, ihmisen sytomegalovirus, ihmisen herpesvirus 6) ja klamydia analysoidaan reaaliaikaisella PCR:llä.

T-solujen spesifisen reaktiivisuuden arviointi virukseen IV A Kun käytetään Kellerin et al:n kuvaamaa menetelmää, stimulaatioindeksi (SI) arvioidaan sekä verinäytteestä että ateroskleroottisesta plakista keskimääräisenä lukemana minuutissa ( cpm) viruksen sisältävistä viljelmistä jaettuna viruksia sisältämättömien rinnakkaisten viljelmien keskimääräisellä cpm:llä.

Tämän jälkeen reaktiivisuus lasketaan kunkin potilaan plakin T-solujen ja perifeerisen veren T-solujen SI:n välisen suhteen perusteella ja määritellään reagoivat potilaat, jos suhde on > 2 (potilaat, joilla on T-solujen SI plakin määrä on huomattavasti korkeampi kuin ääreisveren), ja ei reagoi, jos suhde on < 2 (jälkimmäisessä tapauksessa potilailla, joiden ääreisveren T-solujen SI on suurempi kuin plakin SI tai SI T-solut Plakki T eivät ole merkittävästi korkeampia kuin perifeerisen veren vastaavat).