Virus de la influenza A y desestabilización de las placas carotídeas ateroscleróticas (VIRAL)

Los siguientes datos se recogerán de forma anónima de los registros médicos:

• datos personales (edad, sexo);
• comorbilidad (presencia de factores de riesgo cardiovascular: hipertensión arterial, tabaquismo, dislipidemia, cardiopatía isquémica, EPOC, diabetes mellitus; insuficiencia renal crónica, antecedentes de eventos isquémicos cerebrovasculares);
• antecedentes de vacunación contra la gripe;
• clínico (peso, altura); Según la práctica clínica, los pacientes se someterán a una cirugía de endarterectomía carotídea. Al ingresar al quirófano, a los pacientes se les extraerán 4 ml de sangre en 4 tubos con un anticoagulante específico (EDTA), desde un acceso venoso periférico ya posicionado para el procedimiento quirúrgico independientemente del estudio. Estas muestras de sangre se almacenarán y procesarán adecuadamente para análisis individuales.

Las muestras de placa aterosclerótica extraídas durante la cirugía también se almacenarán adecuadamente para investigaciones posteriores.

Los datos recopilados se ingresarán en el e-CRF específico y se analizarán adecuadamente.

Uso de muestras de sangre Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se separarán y aislarán de la muestra de sangre venosa utilizando un gradiente de Percoll. Estas células serán estimuladas adecuadamente con antígenos del virus de la influenza A utilizando kits comerciales específicos. Este proceso permitirá evaluar la reactividad inmune al virus, tanto en el grupo de pacientes con placa carotídea vulnerable (grupo A) como en aquellos con placa no vulnerable (grupo B). En el suero de las mismas muestras se evaluará mediante ELISA la expresión cuantitativa de algunas citocinas/quimiocinas implicadas en la inflamación y el proceso aterosclerótico (IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, MCP-1). método).

También se realizará la evaluación de anticuerpos adecuada para detectar cualquier infección IV A aguda.

Uso de muestras vasculares Se realizarán investigaciones histológicas sobre muestras de placa aterosclerótica que permitirán determinar la vulnerabilidad o no de la placa, de forma que se definan los dos grupos de pacientes (A, placa vulnerable; B, placa no vulnerable ) para ser analizado. y comparar.

También se realizarán ensayos de Western-Blot y análisis inmunohistoquímicos en las mismas muestras para evaluar la expresión cuantitativa y cualitativa de algunas moléculas (V-CAM, I-CAM, E-Selectinas) y receptores que identifican células de macrófagos carroñeros (CD36 y Lectinas - Como el receptor 1 Ox-LDL.

Finalmente, las mismas muestras serán sometidas a análisis ELISA para la investigación cuantitativa de las mismas citocinas/quimiocinas evaluadas en la muestra de sangre mediante RT-PCR. Se evaluará la posible presencia de ARN viral en las placas ateroscleróticas mediante RT-PCR de un paso, así como la reactividad de las células T específicas frente al virus IV A tras la preparación de cultivos celulares apropiados que se estimularán con el mismo kit comercial. utilizado para estimular el PMBC de sangre periférica, según el método descrito por Keller et al. Colateralmente se comprobará la posible presencia de ADN viral o bacteriano en las placas. En particular, se analizará mediante PCR en tiempo real la presencia de ADN de Poliomavirus Humanos y Herpesvirus Humanos (virus herpes simple 7 y 2, virus varicela zoster, virus Epstein-Barr, citomegalovirus humano, herpesvirus humano 6) y Clamidia.

Evaluación de la reactividad específica de las células T frente al virus IV A Tomando como referencia el método descrito por Keller et al, se evaluará el índice de estimulación (IS), tanto en la muestra de sangre como en la placa aterosclerótica, como el conteo promedio por minuto ( cpm) de cultivos con el virus, dividido por la media de cpm de cultivos paralelos sin virus.

Posteriormente, la reactividad se calculará en base a la relación entre el SI de las células T de placa y el SI de las células T de sangre periférica de cada paciente, definiéndose pacientes respondedores si la relación es > 2 (pacientes con SI de las células T T de la placa significativamente mayores que los de la sangre periférica), y no responden si la relación es < 2 (en el último caso, pacientes con SI de las células T de la sangre periférica mayores que los de la placa, o con SI de Las células T (placa T no son significativamente más altas que las de sangre periférica).