Účinnost prozánětlivých cytokinů u primární molární pulpotomie

Zubní kaz je běžné chronické infekční onemocnění u dětí. Léčba koronární pulpotomií je obecně preferována u zubů s hlubokými kazovými lézemi, které jsou klinicky a rentgenově asymptomatické. Úspěch této léčebné metody je velmi závislý na zánětlivém stavu dřeně a použitých materiálech. Při predikci klinického úspěchu léčby pulpotomií je třeba zhodnotit i závažnost zánětu dřeně. Molekulární přístup, který napomáhá klinickému rozlišení mezi reverzibilní a ireverzibilní pulpitidou, může zvýšit úspěšnost terapie vitální pulpy přesným posouzením stavu zánětu pulpy. Ačkoli zvýšení různých mediátorů u pokročilého pulpálního zánětu bylo zkoumáno v mnoha předchozích studiích, role mnoha biomolekul zapojených do pulpálního zánětu nebyla dosud stanovena. Vzhledem ke komplexní povaze zánětlivého onemocnění dřeně je nepravděpodobné, že by malý počet mediátorů poskytl dostatečné informace pro diagnostiku pokročilého zánětlivého onemocnění. Studie zaměřené na identifikaci nových mediátorů proto zůstávají v zubním lékařství stále relevantní. Presepsin, objevený v roce 2004, je biomarker s vysokou senzitivitou a specificitou, který je velmi důležitý při včasné diagnostice bakteriálních onemocnění v medicíně. Při přezkoumání dentální literatury bylo pozorováno, že presepsin nebyl hodnocen pro detekci bakteriálního zánětu v dřeni a předpokládá se, že tento biomarker by mohl být použit pro časnou detekci zánětu dřeně. Díky schopnosti měřit hladiny presepsinu pomocí pacientských souprav lze tedy kvantitativně vyhodnotit zánět dřeně, což napomáhá poskytování přesného ošetření dřeně. Cílem našeho výzkumu je zjistit, zda presepsin, nový biomarker, který lze rychle detekovat v bakteriálních infekcí, lze také použít jako mediátor při detekci pulpálních infekcí a pro hodnocení hladin spolehlivých markerů pulpálního zánětu, IL-8 a IL-6, porovnáním účinku těchto mediátorů na úspěšnost léčby nejúspěšnější materiály používané při léčbě pulpotomie, MTA, Neo MTA, Biodentin a oxid zinečnatý eugenol.

Tato studie byla provedena v souladu se schválením Etické komise Lékařské fakulty Atatürkovy univerzity (Datum: 05.2021/ Zasedání č.:04/ Rozhodnutí č.:66) a pokyny Helsinské deklarace. Také rodiče dětských pacientů byli komplexně informováni o postupech před léčbou a byl získán jejich písemný souhlas. Zpočátku bylo do studie zahrnuto celkem 75 dětí ve věku 4-9 let (36 dívek a 39 chlapců) bez systémového onemocnění a s alespoň jedním primárním druhým molárem indikovaným k pulpotomii a 4 pulpotomická činidla (MTA, Biodentine™, NeoMTA™ a ZOE) byly náhodně rozděleny do čtyř studijních skupin po 30 zubech a pulpotomie byla aplikována na celkem 120 zubů.

Aby bylo možné náhodně distribuovat studijní skupiny, počítačový software Research Randomizer (verze 4.0) z http://www.randomizer.org/ byl použit k vytvoření seznamu před zahájením pulpotomie a podle toho byla použita pulpotomická činidla.

Protokoly pro ošetření a skladování vzorků:

Pro lepší viditelnost je přes zub umístěn kofferdam vyžadující pulpotomii po lokální anestezii. Endodontická dutina byla zpřístupněna nejprve odstraněním kariézní tkáně, odkrytím dřeňové komory diamantovým kulatým vrtákem (č. 18), odstraněním koronální tkáně pomocí sterilního kulatého vrtáku z karbidu wolframu (č: 14) namontovaného nízkorychlostním kolénkovým násadcem a čištění zbývající pulpální tkáně pomocí bagru.

Před zvládnutím pulpálního krvácení byla na dřeňovou tkáň umístěna sterilní bavlněná peleta na 30-45 sekund. za účelem získání pulpální krve byly vzorky a vzorky odebírány do heparinem potažených zkumavek (Vacutainer, BD, USA) s 1 mg fyziologického roztoku a byly skladovány při -20 oC (-4,0 °F) po dobu 6 měsíců až do dne testování.

Pak bylo dosaženo pulpální hemostázy umístěním 0,5 % NaOCl nad otvory kanálu na 30 sekund. Primární stoličky, u kterých bylo kontrolováno pulpální krvácení, byly náhodně rozděleny do 4 různých studijních skupin (ProRoot MTA, Biodentine™, NeoMTA™ a ZOE v tomto pořadí) a byly ošetřeny pulpotomií. Skloionomerní cement byl aplikován na všechna pulpotomická léčiva použitá ve studii a pulpotomizované zuby byly obnoveny korunkami z nerezové oceli (SSC).

Proces rozmrazování a hodnocení:

Vzorky byly rozmraženy při teplotě místnosti a centrifugovány při 4000 ot./min. po dobu 15 minut. Poté byly ze zkumavek odstraněny bavlněné pelety a hladiny presepsinu, IL-6 a IL-8 byly měřeny pomocí enzymové imunoanalýzy (ELISA) [Human presepsin ELISA kit (kat. č.: E3754Hu, BT LAB, Čína), Human IL-6 ELISA Kit (kat. č.: E0090Hu,BT LAB, Čína), Human IL-8 ELISA Kit (kat. č.: E0089Hu, BT LAB, Čína)] test v souladu s pokyny výrobce. Rozsahy měření sady pro presepsin, IL-6 a IL-8 byly 5-1000 ng/l, 2-600 ng/l a 5-1000 ng/l, v daném pořadí. Mezitestové CV byly <10 % pro všechny biomarkery.

Metoda klinického a radiografického hodnocení:

Primární druhé moláry byly hodnoceny klinicky a radiograficky v 6. a 12. měsíci po léčbě.

Klinicky byla hodnocena spontánní nebo stimulovaná bolest, otoky vestibulárního sulku, píštěl, patologická pohyblivost, citlivost na poklep a palpaci, regionální lymfadenopatie přilehlé k pulpotomickým zubům a přítomnost kteréhokoli z těchto příznaků byla považována za neúspěšnou pulpotomii.

Radiolucence v periapikálních nebo furkačních oblastech, vnitřní a vnější resorpce kořenů, kalcifikované kořenové kanálky, rozšířené periodontální vazivo byly rentgenologicky hodnoceny a přítomnost některého z těchto příznaků byla rovněž hodnocena jako selhání.

Navíc přítomnost lézí v periapikálních nebo furkačních oblastech na rentgenových snímcích byla také akceptována jako selhání a tyto zuby podstoupily ošetření nebo extrakci kořenového kanálku. Kromě toho byly zuby s vnitřní resorpcí kořene považovány za rentgenologicky selhané a byly pouze sledovány, dokud se neobjevil jakýkoli symptom.

Statistická analýza Pro shrnutí souboru dat v této studii byla použita popisná statistika (počet, poměr, průměr, standardní odchylka, minimální a maximální proměnné). Fisherův exaktní test byl použit k analýze vztahu mezi klinickými nálezy před léčbou a zubními patologiemi vzniklými ve 12. měsíci po léčbě, kdy se patologie staly zjevnějšími. Vztah mezi průměrnými hladinami pulpálních zánětlivých biomarkerů a dentálními patologiemi vyskytujícími se ve 12. měsíci po léčbě byl analyzován pomocí Mann-Whitney U testu. Mann-Whitney U test byl také použit ke srovnání středních hladin zánětlivých biomarkerů a klinických nálezů. Kruskal Wallisův test byl použit k porovnání rozdílů mezi průměrnými skóre zánětlivých biomarkerů podle použitých pulpotomických činidel.

Prahové hodnoty byly vypočteny analýzou provozních charakteristik přijímače (ROC) a tyto získané hodnoty pak byly použity ke stanovení nejvyšších skóre biomarkerů ve skupinách s materiálem pro pulpotomii. Všechny analýzy studie byly provedeny pomocí IBM® SPSS® Statistics 25 na hladině významnosti 0,05.