Skuteczność cytokin prozapalnych w pierwotnej pulpotomii trzonowej

Próchnica zębów jest powszechnie występującą przewlekłą chorobą zakaźną u dzieci. Zabieg pulpotomii wieńcowej jest na ogół preferowany w przypadku zębów z głębokimi zmianami próchnicowymi, które są bezobjawowe klinicznie i radiologicznie. Powodzenie tej metody leczenia w dużym stopniu zależy od stanu zapalnego miazgi i zastosowanych materiałów. Przewidując kliniczny sukces leczenia pulpotomii, należy również ocenić nasilenie zapalenia miazgi. Podejście molekularne, które pomaga w klinicznym rozróżnieniu między odwracalnym i nieodwracalnym zapaleniem miazgi, może zwiększyć skuteczność terapii żywotnej miazgi poprzez dokładną ocenę stanu zapalnego miazgi. Chociaż w wielu wcześniejszych badaniach badano wzrost aktywności różnych mediatorów w zaawansowanym zapaleniu miazgi, rola wielu biomolekuł biorących udział w zapaleniu miazgi nie została jeszcze ustalona. Ze względu na złożony charakter choroby zapalnej miazgi jest mało prawdopodobne, aby niewielka liczba mediatorów dostarczyła wystarczających informacji do zdiagnozowania zaawansowanej choroby zapalnej. Dlatego też badania mające na celu identyfikację nowych mediatorów pozostają istotne w stomatologii. Presepsyna, odkryta w 2004 roku, jest biomarkerem o wysokiej czułości i swoistości, niezwykle istotnym we wczesnej diagnostyce chorób bakteryjnych w medycynie. Przegląd literatury stomatologicznej wskazuje, że presepsyna nie była oceniana pod kątem wykrywania bakteryjnego zapalenia miazgi i uważa się, że ten biomarker mógłby zostać wykorzystany do wczesnego wykrywania zapalenia miazgi. Zatem dzięki możliwości pomiaru poziomu presepsyny przy użyciu zestawów dla pacjenta można ilościowo ocenić stan zapalny miazgi, co pomaga w zapewnieniu dokładnego leczenia miazgi. Celem naszych badań jest zbadanie, czy presepsyna – nowy biomarker, który można szybko wykryć w bakteriach infekcji, może być również stosowany jako mediator w wykrywaniu infekcji miazgi oraz do oceny poziomu wiarygodnych markerów zapalenia miazgi, IL-8 i IL-6, porównując wpływ tych mediatorów na powodzenie leczenia najskuteczniejsze materiały stosowane w leczeniu pulpotomii, MTA, Neo MTA, Biodentine i eugenol tlenku cynku.

Badanie przeprowadzono zgodnie z zatwierdzeniem Komisji Etyki Wydziału Lekarskiego Uniwersytetu Ataturk (data: 05.2021/sesja nr:04/decyzja nr:66) oraz wytycznymi Deklaracji Helsińskiej. Również rodzice dzieci chorych zostali kompleksowo poinformowani o postępowaniu przed leczeniem i uzyskali ich pisemną zgodę. Początkowo do badania włączono łącznie 75 dzieci w wieku 4–9 lat (36 dziewcząt i 39 chłopców) bez chorób ogólnoustrojowych, u których co najmniej jeden mleczny drugi ząb trzonowy wskazany do pulpotomii oraz 4 środki do pulpotomii (MTA, Biodentine™, NeoMTA™ i ZOE) podzielono losowo na cztery grupy badawcze po 30 zębów i łącznie zastosowano pulpotomię w przypadku 120 zębów.

Aby losowo rozdzielić grupy badawcze, należy skorzystać z oprogramowania komputerowego Research Randomizer (wersja 4.0) dostępnego pod adresem http://www.randomizer.org/ wykorzystano do wygenerowania listy przed rozpoczęciem pulpotomii i odpowiednio zastosowano środki do pulpotomii.

Protokoły obróbki i przechowywania próbek:

Dla lepszej widoczności na zębie zakłada się koferdam, wymagający pulpotomii po znieczuleniu miejscowym. Dostęp do jamy endodontycznej uzyskiwano poprzez najpierw usunięcie tkanki próchnicowej, odsłonięcie komory miazgi za pomocą okrągłego wiertła diamentowego (nr:18), usunięcie tkanki koronowej za pomocą sterylnego wiertła okrągłego z węglika wolframu (nr:14) osadzonego na kątnicy wolnoobrotowej i oczyszczenie pozostałej tkanki miazgi za pomocą koparki.

Przed opanowaniem krwotoku do miazgi, na tkankę miazgi na 30–45 sekund umieszczono sterylny wacik bawełniany. w celu pobrania próbek krwi miazgi pobierano do probówek pokrytych heparyną (Vacutainer, BD, USA) z 1 mg roztworu soli fizjologicznej i przechowywano w temperaturze -20 oC (-4,0°F) przez 6 miesięcy do dnia badania.

Następnie uzyskano hemostazę miazgi poprzez umieszczenie 0,5% NaOCl nad ujściami kanałów na 30 sekund. Zęby trzonowe mleczne, w których kontrolowano krwotok do miazgi, zostały losowo przydzielone do 4 różnych grup badawczych (odpowiednio ProRoot MTA, Biodentine™, NeoMTA™ i ZOE) i poddano je zabiegowi pulpotomii. Na wszystkie leki stosowane w celu pulpotomii zastosowane w badaniu nałożono cement glasjonomerowy, a zęby po pulpotomii odbudowano koronami ze stali nierdzewnej (SSC).

Proces rozmrażania i ocena:

Próbki rozmrożono w temperaturze pokojowej i wirowano przy 4000 obr./min przez 15 minut. Następnie z probówek wyjęto peletki bawełny i zmierzono poziomy presepsyny, IL-6 i IL-8 za pomocą testu immunologicznego enzymatycznego (ELISA) [zestaw Human Presepsin ELISA (nr kat.: E3754Hu, BT LAB, Chiny), Human Zestaw IL-6 ELISA (nr kat.: E0090Hu, BT LAB, Chiny), zestaw ELISA do ludzkiej IL-8 (nr kat.: E0089Hu, BT LAB, Chiny)] zgodnie z instrukcją producenta. Zakresy pomiarowe zestawu dla presepsyny, IL-6 i IL-8 wynosiły odpowiednio 5-1000 ng/l, 2-600 ng/l i 5-1000 ng/l. Współczynnik CV między testami wynosił <10% dla wszystkich biomarkerów.

Metoda oceny klinicznej i radiograficznej:

Drugie zęby trzonowe mleczne oceniano klinicznie i radiologicznie w 6. i 12. miesiącu po leczeniu.

Klinicznie oceniano ból samoistny lub stymulowany, obrzęk bruzdy przedsionkowej, przetokę, patologiczną ruchliwość, wrażliwość na opukiwanie i palpację, regionalną limfadenopatię w sąsiedztwie zębów poddanych pulpotomii, a obecność któregokolwiek z tych objawów uznawano za nieudaną pulpotomię.

Radiologicznie oceniano przezierność w okolicy wierzchołkowej lub furkacji, resorpcję wewnętrzną i zewnętrzną korzenia, zwapnienie kanałów korzeniowych, poszerzenie więzadeł przyzębnych, a obecność któregokolwiek z tych objawów również uznawano za niepowodzenie.

Dodatkowo obecność zmian w okolicy wierzchołkowej lub furkacji na zdjęciach rentgenowskich również została uznana za niepowodzenie i zęby te poddano leczeniu kanałowemu lub ekstrakcji. Co więcej, zęby z wewnętrzną resorpcją korzenia uznano za nieudane w badaniu radiologicznym i poddawano je obserwacji aż do pojawienia się jakichkolwiek objawów.

Analiza statystyczna Do podsumowania zestawu danych w niniejszym badaniu wykorzystano statystyki opisowe (liczba, stosunek, średnia, odchylenie standardowe, zmienne minimalne i maksymalne). Dokładny test Fishera wykorzystano do analizy związku pomiędzy objawami klinicznymi przed leczeniem a patologiami zębów powstałymi w 12. miesiącu po leczeniu, kiedy patologie stały się bardziej widoczne. Zależność średniego poziomu biomarkerów zapalnych miazgi od patologii zębów występujących w 12 miesiącu po leczeniu analizowano za pomocą testu U Manna-Whitneya. Do porównania średniego poziomu biomarkerów stanu zapalnego z wynikami klinicznymi wykorzystano także test U Manna-Whitneya. Do porównania różnic pomiędzy średnimi wynikami biomarkerów stanu zapalnego w zależności od zastosowanych środków do pulpotomii wykorzystano test Kruskala Wallisa.

Wartości progowe obliczono za pomocą analizy charakterystyki działania odbiornika (ROC), a następnie uzyskane wartości wykorzystano do określenia najwyższych wyników biomarkerów w grupach materiałów poddanych pulpotomii. Wszystkie analizy badań przeprowadzono za pomocą programu IBM® SPSS® Statistics 25 na poziomie istotności 0,05.