Kompenzace u hepatitidy související s alkoholem (A-HEP)

V prospektivní incidenční kohortové studii budou účastníci sledováni od diagnózy hepatitidy související s alkoholem (AH) až do smrti nebo vyřazení z kohorty.

Účastníci budou zařazeni postupně do jednoho měsíce od diagnózy.

Všechny osoby s diagnózou AH a všichni pacienti s debutem AH během přijetí, bez ohledu na důvod přijetí, jsou způsobilí k zařazení.

Studie neohrožuje diagnostiku ani léčbu AH, cirhózy nebo komorbidit.

Kritéria pro zařazení jsou: klinické podezření na AH podpořené biochemií (bilirubin 50 mmol/l nebo vyšší) a ultrazvukem nebo jinými zobrazovacími technikami; informovaný písemný souhlas.

Kritéria vyloučení jsou: Lidé, u kterých je diagnóza AH zpochybňována s důvodnými pochybnostmi; odvolání informovaného souhlasu; osoby způsobilé k zařazení, pokud je výzkumný program odložen nebo nebyl zahájen do dvou měsíců po diagnóze podezření na AH; Osoby s hepatocelulárním karcinomem.

Zařazení bude nabídnuto účastníkům odkázaným na gastrojednotku buď za účelem přijetí, nebo do ambulance.

Intervence na odvykání alkoholu:

Všem pacientům s AH léčeným na Gastro oddělení, AHH a tedy i všem účastníkům studie bude nabídnuta standardní péče, včetně doplňků výživy, podpůrné péče a medikamentózní léčby komplikací či komorbidit. Během prvních 3 měsíců po přijetí bude nabídnuta podpora při odvykání alkoholu včetně lékařského ošetření abstinenčních příznaků a bažení a jeden až tři strukturované motivační rozhovory, stejně jako doporučení komunálních nabídek protialkoholní léčby.

Údaje z deníků pacientů:

Informace ze záznamů pacientů budou načteny takto:

Termíny a délka hospitalizací; Důvod hospitalizací; Diagnózy; Biochemie; Výsledky endoskopických výkonů.

Údaje a osobní údaje jsou registrovány a sledovány podle aktuální dánské legislativy, zákona o ochraně osobních údajů, a podle nařízení o ochraně osobních údajů.

Ve studii jsou aplikovány dotazníky týkající se kvality života a zdraví, včetně duševního zdraví. Cílem je prozkoumat potenciální přínosy odvykání alkoholu na kvalitu života a sebepociťované zdraví, včetně duševního zdraví. Pokud účastník zaznamená známky těžké deprese, bude zahájeno doporučení do příslušných institucí v souladu s národními směrnicemi pro depresi.

Genetické analýzy Genotypizace bude provedena pomocí GWAS čipu (tj. cílené mapování genomu) pomocí Illumina Exomechip obohaceného o varianty s velkým účinkem měnící protein. Ultravzácné varianty (<1/1000) nebudou zachyceny. Výsledky budou použity k testování potenciální klinické hodnoty profilování genetického rizika v kombinaci s klinickými daty. Genomická analýza zahrnuje běžné varianty a profilování skóre polygenního rizika na společných variantách.

Proteomika, lipidomika a transkriptomika:

Příprava vzorků a analýza kapalinovou chromatografií a hmotnostní spektrometrií (LC/MS) budou následovat technologie popsané dříve. Oblast proteomiky se rychle vyvíjí a metody mohou podléhat úpravám, aby byla zajištěna kvalita, relevance a nejlepší ceny za analýzu.

Budeme analyzovat datové sady plazmové proteomiky pomocí Spectronaut v.15.4. Dříve vygenerovaná knihovna hluboce frakcionované plazmy závislá na datech (DDA) se používá při cílené analýze dat nezávislých aplikací proti databázi lidských referenčních proteomů (vydání 2018). Současnými metodami lze kvantifikovat přibližně 1000 proteinů.

Lipidomická analýza je prováděna podle nejmodernějších existujících postupů a upravena tak, aby byla aplikována nejlepší dostupná technologie.

Chromatografická separace se provádí na koloně Waters Acquity BEH C18 (1,7 μm X 2,1 mm X 100 mm) s použitím gradientu dvou standardních mobilních fází (mobilní fáze A obsahuje vodu, 0,1% kyselinu mravenčí a 10 ml 1M octanu amonného, ​​mobilní fáze B tvoří isopropanol a acetonitril (1:1) se stejným přídavkem kyseliny mravenčí a octanu amonného).

Identifikace sloučenin pomocí hmotnostní spektrometrie je cílená na základě předem připravené knihovny cílových metabolitů v plazmě.

Na základě výsledků z lipidomických analýz vybereme panel diagnostických markerů, které budou nejefektivněji popisovat rychlost progrese onemocnění. Pro vybrané biomarkery vyvineme absolutní kvantitativní metodu založenou na metodologii LC-MS-MS (triple quadrupole MS v MRM módu) s využitím komerčně dostupných standardních sloučenin, včetně stabilních izotopově značených sloučenin jako vnitřních standardů.

Biologická analýza a správa dat proteomiky a lipidomiky bude probíhat na CBMR.

Transkriptomické analýzy Abychom identifikovali geny, které hrají důležitou roli v progresi nebo rekompenzaci AH, porovnáme soubory dat z hromadného sekvenování RNA v AH s již zavedenými soubory dat ze sekvenování jednobuněčných RNS jater.

Na základě genů, které jsou současně navrženy bulk-RNA v našich vzorcích a scRNAseq, můžeme prozkoumat klíčové transkripční regulátory v ALD.

Tento zdroj využijeme k výpočetní dekonvoluci objemných transkriptomových dat jaterních biopsií, abychom odhadli relativní množství každého buněčného typu jater (hepatocyt, jaterní hvězdicové buňky, jaterní sinusoidální epiteliální buňky atd.) u každého pacienta. Budou posouzeny možné regulátory onemocnění jak progrese, tak rekompenzace.

Všem pacientům s debutem AH a bez ohledu na čas a okolnosti diagnózy, komorbidity a závažnost onemocnění bude nabídnuto zařazení do kohorty. Všechny účastníky zapojí lékař nebo sestra poskytující standardní péči. V případě zájmu o studii budou všichni účastníci informováni písemně i ústně řešiteli studie a projektovými sestrami. Všem účastníkům budou nabídnuty ústní informace o studii a alespoň 24 hodin času na rozmyšlenou před přijetím zařazení. Bude zdůrazněno, že účast je dobrovolná a že účastník může kdykoli odstoupit.

U části pacientů bude diagnostikována závažná AH, kde komplikace ohrožující jejich kognitivní funkce, např. je přítomna těžká sepse, jaterní encefalopatie nebo delirium. Jsou-li komplikace považovány za reverzibilní, informace a případné zařazení do studie budou odloženy, dokud se pacient nezotaví, ale ne více než dva měsíce od diagnózy. Pokud jsou komplikace považovány za nevratné nebo mohou existovat důvodné pochybnosti o přežití pacienta, budou pacienti považováni za způsobilé, ale vyloučeni, aby se předešlo zbytečnému nebo neetickému provádění procedur.

Tato studie je kohorta založená na incidenci. Po obdržení písemného souhlasu na základě ústních a písemných informací bude pacient zařazen do studie.

Pro studii bude zřízena výzkumná biobanka. Biobanka bude obsahovat krev a stolici odebrané na začátku, tři měsíce a 12 měsíců. Pokud má účastník ascites a potřebuje paracentézu, bude mu odebrána biopsie podkožního tuku z místa řezu na břiše.

Biobanka je registrována dánskou agenturou pro ochranu dat.

Přímým přínosem spojeným s účastí ve studii je motivace a podpora směrem k odvykání alkoholu. Může se objevit menší nepohodlí související s extra odběrem krve. Po dvanácti měsících se provádí extra procedura pro transjugulární jaterní biopsii. Odebírání biopsií tukové tkáně se provádí v lokální anestezii a pouze v případě, že účastníci potřebují paracentézu, která zahrnuje lokální anestezii a perforaci kůže a tukové tkáně na břiše.

Zkoumání nových biomarkerů a genomických variant je průzkumné a pro zúčastněné účastníky neexistuje žádný přímý přínos. Nejsou s tím spojeny žádné potíže nebo nevýhody. Projekt však poskytne nové informace o rizikových asociacích u cirhózy, které mohou vést k novým objevům terapeutických cílů u AH. Domníváme se proto, že přínosy studie převažují nad nevýhodami.

Všechny výsledky získané ze studie budou zveřejněny, bez ohledu na jejich pozitivní, negativní nebo neprůkaznou povahu. Seznam autorů se bude řídit doporučeními Mezinárodního výboru editorů lékařských časopisů pro autorství (směrnice ICMJE Vancouver).

Studie přispěje k lepší charakterizaci AH a přispěje k lepšímu pochopení mechanismů onemocnění v budoucnu.

Studii iniciovali lékaři a sestry zaměstnané na Gastro oddělení Fakultní nemocnice Hvidovre.

Novo Nordisk Foundation podpořila tuto studii (NNF2024#0088416).