Hodnocení implantoplastiky při léčbě peimplantitidy.

1. Účastníci: budou zahrnuti dospělí pacienti s diagnózou s pei-implantitidou (Caton et al. 2018, Papapanou a kol. 2018); Pacienti budou přijati z populace studované ve výše uvedené studii kontroly případu, kterým byla diagnostikována pei-implantitida; Kritéria pro zařazení a vyloučení budou následovat kritéria dříve definovaná ve studii případové kontroly.
2. Alokace účastníků: Účastníci budou náhodně přiděleni do dvou skupin: skupina 1 (implantoplastika) a skupina 2 (chirurgický přístup). - Přidělení bude provedeno počítačovým randomizačním systémem (SEALED ENVEVEPEOPE.com).
3. Klinické postupy: Skupina 1 (Implantoplastika): Postižené implantáty podstoupí implantoplastiku, zahrnující přestavbu povrchu implantátu pro usnadnění čištění a odstranění kompromitovaných oblastí. Skupina 2 (chirurgický přístup): Postižené implantáty budou ošetřeny chirurgickým přístupem, s mechanickým odstraněním zanícené tkáně a čištěním povrchu implantátu.
4. Klinické hodnocení: Počáteční klinické parametry budou zaznamenány před postupem a ve specifických intervalech (1, 3 a 6 měsíců po postupu); Indexy periodontálních a pei-implantátů, včetně indexu plaků, krvácení o sondování, hloubky sondy a úrovně klinického připojení, budou vyhodnoceny kalibrovaným zkoušejícím.

5. Sběr a analýza biofilmu (mikrobiomu): pro taxonomickou analýzu budou odebrány vzorky biofilmu periodontálního a pei-implantátu. Všechny vzorky budou získány před periodontálním vyšetřením. Před sběrem biofilmu subgingivalu/submukosálního biofilmu bude biofilm supramukosálního/supramukosálního biofilmu pečlivě odstraněn pomocí sterilních kyret. Místo bude izolováno pomocí bavlněných rolí a jemně sušeno vzduchovou stříkačkou, aby se zabránilo kontaminaci slinami. Vzorky biofilmu budou získány standardními body filtru z bukálních povrchů zubů/implantátů. Body filtračního papíru budou vloženy do sulkusu gingiváru/peimimplantátu a ponechány na místě po dobu 30 sekund. Papírové skvrny budou umístěny do mikrocentrifugační trubice obsahující roztok Tris-EDTA. Všechny vzorky budou okamžitě zmrazeny a uloženy při -20 ° C až do laboratorní analýzy. Vzorky biofilmu budou odstraněny z papírových proužků přidáním 200 ul fosfátu pufrovaného fyziologického roztoku (PBS) a vírem po dobu 1 minuty. Papírové místo bude odstraněno a DNA izolováno pomocí sady Qiagen Miniammp (Valencia, CA) podle doporučení výrobce. Orální profylaxe nebo nechirurgická periodontální léčba nebude zahájena před sběrem vzorků a subjekty budou podle potřeby zapsány do periodontálního léčebného programu.

   Sekvenování DNA a analýza dat: Hypervariabilní oblast V3-V4 genu 16S rRNA bude amplifikována pomocí primerů a podmínek PCR dříve popsaných Klindworth et al. (2013). Podle doporučení výrobce bude čištění PCR prováděno pomocí magnetických kuliček (Ampure XP Bead, Beckman Agencourt) v poměru 0,8 kuliček/PCR objemu. Po ligaci adaptérů bude provedeno nové čištění PCR s použitím magnetických kuliček (Ampure XP Bead, Beckman Agencourt) v poměru 1,12 kuliček/PCR objemu. Normalizace knihovny bude provedena pomocí soupravy Normalizační desky SequalPREP ™ (96) (Applied Biosystems ™) a kombinovaná knihovna bude kvantifikována. Koncentrace ekvimolární DNA budou sdruženy a sekvenovány na platformě Illumina Miseq za účelem výroby sekvencí párového konce 300 bp. Bioinformatická analýza bude provedena pomocí Qiime 2 2020.6 (Bolyen et al., 2019). Demultiplexované soubory FASTQ budou získány ze sekvenčního zařízení a Q2 Cutadapt (Martin, 2011) bude použit k odstranění primerů před procesem denoingu, který bude prováděn s Q2-Dada2 (Callahan et al., 2016). Potrubí zarovnání mafft-fasttree (Q2-fylogeneges) bude použit k zarovnání všech amplikonových sekvenčních variant (ASV) s MAFFT (Katoh et al., 2002) a pro konstrukci fylogeneze s Fasttree2 (Price et al., 2010). Taxonomie bude přidělena ASV pomocí klasifikátoru klasifikátoru Taxonomie naivního Bayese (Escapa et al., 2018) třídičího tříd týmu Q2 (Escapa et al., 2018). Metriky alfa-diverzity (Shannon (Spellerberg, 2003)), metriky beta-diverzity (vážené UNIFRAC (Lozupone et al. 2007), nevážená unifrac (Lozupone et al. 2005)) a analýza hlavních souřadnic (PCOA) bude odhadována pomocí Q2-diverzita-phulogenetics afyrened po Samflech po Samflech, po Samby, po Samby, po Samby jsou po Samby, po Samby, po samčích, po samkách jsou po Samflech po Samflech, po Samflech, po Samflech, které jsou před Samfy1951515151515015150150150150151501501501501501519. sekvence na vzorek. Rozdíly v diverzitě alfa (rozdíly ve vzorcích) budou měřeny pomocí párových rozdílů (Bokulich et al. 2018b). U beta rozmanitosti (rozdíly mezi vzorky) budou rozdíly mezi skupinami měřeny pomocí testů Permanova a Persova (Q2-diverzita). Jádro mikrobiomu (s ohledem na jádro mikrobiomu jako druhu přítomných nejméně 50% vzorků ve skupině) se vypočítá pomocí základních rysů z tabulky na úrovni druhu Q2-Feature. Vizualizace bude prováděna pomocí tepelné mapy pro stolu Q2 (k vizualizaci relativního hojnosti druhů) a fylotoastu (Dabdoub et al., 2016). Diferenciální hojnost mezi druhy se vypočítá pomocí ANCOM-BC (Lin & Peddada, 2020).

6. Zánětlivá analýza: Pei-implantátní štěrkovací tekutina a granulační tkáň z debridementu bude shromažďována od všech jedinců zapojených do studie v místech léčených peimplantitidou. Během sběru materiálu bude dotyčné místo řádně izolováno a sušeno sterilizovanými bavlněnými rohlíky. Biofilm supragingival bude odstraněn a vzorky gingivální tekutiny budou získány vložením papírových bodů mezi rozhraní zubů a periodontální tkáňové rozhraní po dobu 30 sekund (Casarin et al. 2010). Na místo budou použity dva papírové body k získání přiměřeného objemu štěrbikulární tekutiny. Objem shromážděné tekutiny bude měřen pomocí periotnu (Periotron 8000, Proflow Inc., Amityville, NY, USA) a papírové skvrny budou poté umístěny do mikrocentrifugačních trubek (Eppendorf), kódovány pro každého jednotlivce a experimentální období se 150 ul fosfátového vyrovnávacího řešení (PBS) (PBS) (PBS). Granulační tkáň odstraněná během škrábání implantátu bude uložena v RNALater a zmrazena při -80 ° C. Vzorky budou uloženy pro pozdější analýzu. Před analýzou budou vzorky zředěny v 60 ul pufru ze soupravy Millipore, vířeny po dobu 30 minut a poté odstředěny po dobu 10 minut při 10 000 ot / min. Vzorky každé gingivální tekutiny budou analyzovány na IL-lp, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, TNFa a IFN-A pomocí technologie Luminex/Magpix, která nejen určí přítomnost, ale podle přítomnosti určují pouze přítomnost výrobce. Stručně, vzorky budou zředěny v pufru PBS + 5% doplněné a před analýzou víry po dobu 30 sekund. Po jemné centrifugaci bude 25 ul supernatantu umístěno na 96-jamkové destičky spolu s imunoznačenými kuličkami specifickými pro každou cytokin/proteázu. Po inkubaci s korálky budou poskytnuty sekundární protilátky a substrát a destičky budou čteny pomocí platformy Magpix. Koncentrace každého analytu bude exprimována v PG/µl. Vzorky s kvantifikací pod detekčním limitem analýzy budou zaznamenány jako „nula“ a vzorky nad kvantifikačním limitem standardní křivky budou zaznamenány s hodnotou rovnající se nejvyšší hodnotě křivky.
7. Statistická analýza: - Pro porovnání klinických parametrů, složení mikrobiomu a exprese cytokinů mezi skupinami během sledovacího období budou provedeny statistické analýzy: Statistické analýzy. - Rozdíl v účinnosti mezi těmito dvěma postupy bude posouzen.

Všechny analýzy tohoto výzkumu budou prováděny ve výzkumných laboratořích v oblasti periodontické oblasti School of Dentistry.