Évaluation de l'implantoplastie dans le traitement de la péri-implantite.

1. Participants: Les patients adultes diagnostiqués avec une péri-implantite (Caton et al. 2018, Papapanou et al. 2018) seront inclus; Les patients seront recrutés dans la population étudiée dans l'étude cas-témoins susmentionnée, qui a été diagnostiquée avec une péri-implantite; Les critères d'inclusion et d'exclusion suivront les critères précédemment définis dans l'étude cas-témoins.
2. Attribution des participants: Les participants seront alloués au hasard en deux groupes: le groupe 1 (implantoplastie) et le groupe 2 (accès chirurgical). - L'allocation sera réalisée par un système de randomisation informatisé (Scellé Envelope.com).
3. Procédures cliniques: Groupe 1 (implantoplastie): Les implants affectés subiront une implantoplastie, impliquant le remodelage de la surface de l'implant pour faciliter le nettoyage et éliminer les zones compromises. Groupe 2 (accès chirurgical): Les implants affectés seront traités par un accès chirurgical, avec élimination mécanique du tissu enflammé et nettoyage de la surface de l'implant.
4. Évaluation clinique: les paramètres cliniques initiaux seront enregistrés avant la procédure et à intervalles spécifiques (1, 3 et 6 mois après la procédure); Les indices parodontaux et péri-implantaires, y compris l'indice de plaque, les saignements sur le sondage, la profondeur de sondage et le niveau d'attachement clinique, seront évalués par un examinateur calibré.

5. Collecte et analyse du biofilm (microbiome): des échantillons de biofilm parodontaux et péri-implantaires seront collectés pour l'analyse taxonomique. Tous les échantillons seront obtenus avant l'examen parodontal. Avant la collection de biofilms sous-gingival / sous-muqueux, le biofilm supraginval / supramucal sera soigneusement retiré à l'aide de curettes stériles. Le site sera isolé à l'aide de rouleaux de coton et séché doucement avec une seringue d'air pour éviter la contamination par la salive. Des échantillons de biofilm seront obtenus par des points de papier filtre standard à partir des surfaces buccales des dents / implants. Les points de papier filtre seront insérés dans le sulcus gingival / péri-implantaire et laissés en place pendant 30 secondes. Des taches de papier seront placées dans un tube de microcentrifugeuse contenant une solution Tris-EDTA. Tous les échantillons seront immédiatement congelés et stockés à -20 ° C jusqu'à l'analyse en laboratoire. Les échantillons de biofilm seront retirés des bandes de papier en ajoutant 200 µl de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et du vortex pendant 1 minute. Le point de papier sera retiré et de l'ADN isolé à l'aide du kit MIAGEN MINIAMP (Valence, CA) après les recommandations du fabricant. La prophylaxie orale ou le traitement parodontal non chirurgical ne seront pas lancées avant la collecte des échantillons, et les sujets seront inscrits à un programme de traitement parodontal au besoin.

   Séquençage d'ADN et analyse des données: la région hypervariable V3-V4 du gène d'ARNr 16S sera amplifiée en utilisant les amorces et les conditions de PCR décrites précédemment par Klindworth et al. (2013). Selon la recommandation du fabricant, la purification de la PCR sera effectuée à l'aide de billes magnétiques (billes Ampure XP, Beckman Agenourt) à un rapport de 0,8 billes / volume de PCR. Après la ligature des adaptateurs, une nouvelle purification de PCR sera réalisée en utilisant des billes magnétiques (billes Ampure XP, Beckman AgenCourt) à un rapport de 1,12 billes / volume de PCR. La normalisation de la bibliothèque sera effectuée à l'aide du kit de plaque de normalisation SequalPrep ™ (96) (Applied Biosystems ™), et la bibliothèque combinée sera quantifiée. Les concentrations d'ADN équimolaires seront regroupées et séquencées sur la plate-forme Illumina Miseq pour produire des séquences à extrémité appariée de 300 pb. L'analyse bioinformatique sera effectuée en utilisant Qiime 2 2020.6 (Bolyen et al., 2019). Des fichiers rapides démultiplexés seront obtenus à partir de l'installation de séquençage, et Q2 Cutadapt (Martin, 2011) sera utilisé pour supprimer les amorces avant le processus de débraillé, qui sera effectuée avec Q2-DADA2 (Callahan et al., 2016). Le pipeline MAFFT-FastTree (Q2-Phylogeny) aligne-Tree sera utilisé pour aligner toutes les variantes de séquence d'amplicon (ASV) avec MAFFT (Katoh et al., 2002) et pour construire une phylogénie avec Fasttree2 (Price et al., 2010). La taxonomie sera attribuée aux ASV à l'aide du classificateur de taxonomie naïf de Bayes Q2-Feure-Classificateur (Bokulich et al. 2018a) formé contre la base de données de microbiome orale humaine élargie (EHOMD, v15.2) (Escapa et al., 2018). Les métriques alpha-diversité (Shannon (Spellerberg, 2003)), les métriques bêta-diversités (UniFrac pondérée (Lozupone et al.2007), UNIFRAC non pondéré (Lozupone et al.2005)), et l'analyse des coordonnées principales) séquences par échantillon. Les différences de diversité alpha (différences au sein des échantillons) seront mesurées en utilisant des différences par paires (Bokulich et al. 2018b). Pour la diversité bêta (différences entre les échantillons), les différences entre les groupes seront mesurées à l'aide de tests permanova et permdisp (Q2-Diversity). Le microbiome central (compte tenu du microbiome central en tant qu'espèces présentes dans au moins 50% des échantillons d'un groupe) sera calculée en utilisant les caractéristiques centrales de la table au niveau des espèces de table-table Q2. La visualisation sera réalisée à l'aide de la carte thermique de table-table Q2 (pour visualiser l'abondance relative des espèces) et du phylotoast (Dabdoub et al., 2016). L'abondance différentielle entre les espèces sera calculée à l'aide d'ANCOM-BC (Lin & Peddada, 2020).

6. Analyse inflammatoire: les tissus de liquide creviculaire péri-implantaire et de granulation à partir de débridement seront collectés auprès de tous les individus impliqués dans l'étude, sur des sites traités par péri-implantite. Lors de la collecte du matériau, le site en question sera correctement isolé et séché avec des rouleaux de coton stérilisés. Le biofilm supraginal sera supprimé et des échantillons de liquide gingival seront obtenus en insérant des points de papier entre la dent et l'interface tissulaire parodontale pendant 30 secondes (Casarin et al. 2010). Deux points de papier seront utilisés par site pour obtenir un volume adéquat de liquide creviculaire. Le volume de liquide collecté sera mesuré avec le périotron (Periotron 8000, Proflow Inc., Amityville, NY, USA) et les taches papier seront ensuite placées dans des tubes de microcentrifugeuse (Eppendorf), codés pour chaque période individuel et expérimental avec 150 µl de solution de buffer de phosphate (PBS) et 0,05% de tween-20. Le tissu de granulation éliminé pendant le grattage de l'implant sera stocké dans Rnalater et congelé à -80 ° C. Les échantillons seront stockés pour une analyse ultérieure. Avant l'analyse, les échantillons seront dilués dans 60 µl de tampon du kit Millipore, vortexés pendant 30 minutes, puis centrifugés pendant 10 minutes à 10 000 tr / min. Des échantillons de chaque liquide gingival seront analysés pour IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, TNFα et IFN-δ par la technologie Luminex / Magpix, qui ne déterminera pas seulement la présence, mais quantifiera en termes absolus des instructions du fabricant. En bref, les échantillons seront dilués dans du tampon PBS + Tween à 5% et vortexés pendant 30 secondes, avant l'analyse. Après centrifugation douce, 25 µl de surnageant seront placés dans des plaques à 96 puits avec les billes immunomarquées spécifiques pour chaque cytokine / protéase. Après incubation avec les perles, des anticorps secondaires et un substrat seront fournis, et les plaques seront lues à l'aide de la plate-forme Magpix. La concentration de chaque analyte sera exprimée en pg / µl. Des échantillons avec quantification inférieure à la limite de détection de l'analyse seront enregistrés comme "zéro", et les échantillons supérieurs à la limite de quantification de la courbe standard seront enregistrés avec une valeur égale à la valeur la plus élevée de la courbe.
7. Analyse statistique: - Des analyses statistiques seront effectuées pour comparer les paramètres cliniques, la composition du microbiome et l'expression des cytokines entre les groupes tout au long de la période de suivi. - La différence d'efficacité entre les deux procédures sera évaluée.

Toutes les analyses de cette recherche seront effectuées dans les laboratoires de recherche du domaine de la parodontie de la Piracicaba School of Dentistry.