Utvärdering av implantatoplastik vid behandling av peri-implantit.

1. Deltagare: Vuxna patienter som diagnostiserats med peri-implantit (Caton et al. 2018, Papapanou et al. 2018) kommer att inkluderas; Patienter kommer att rekryteras från den befolkning som studerats i den ovannämnda fallkontrollstudien, som diagnostiserades med peri-implantit; Inkludering och uteslutningskriterier kommer att följa kriterierna som tidigare definierats i fallkontrollstudien.
2. Deltagarfördelning: Deltagarna kommer att tilldelas slumpmässigt i två grupper: grupp 1 (implantatoplastik) och grupp 2 (kirurgisk tillgång). - Tilldelning kommer att utföras av ett datoriserat randomiseringssystem (Sealed Envelope.com).
3. Kliniska procedurer: Grupp 1 (implantatoplastik): De drabbade implantaten kommer att genomgå implantatoplastik, som involverar ombyggnad av implantatytan för att underlätta rengöring och ta bort komprometterade områden. Grupp 2 (kirurgisk åtkomst): De drabbade implantaten kommer att behandlas genom kirurgisk tillgång, med mekaniskt avlägsnande av den inflammerade vävnaden och rengöring av implantatytan.
4. Klinisk utvärdering: initiala kliniska parametrar kommer att registreras före proceduren och med specifika intervall (1, 3 och 6 månader efter proceduren); Periodontal- och peri-implantatindex, inklusive plackindex, blödning på sond, sondjup och klinisk fästnivå, kommer att utvärderas av en kalibrerad undersökare.

5. Biofilm (mikrobiom) Insamling och analys: Periodontal och peri-implantat biofilmprover kommer att samlas in för taxonomisk analys. Alla prover kommer att erhållas före den periodonta undersökningen. Före subgingival/submucosal biofilmsamling kommer supragingival/supramucosal biofilm att avlägsnas noggrant med sterila curettes. Webbplatsen kommer att isoleras med bomullsrullar och torkas försiktigt med en luftspruta för att undvika förorening med saliv. Biofilmprover kommer att erhållas med standardfilterpapperspunkter från de buccala ytorna på tänderna/implantaten. Filterpapperspunkterna kommer att sättas in i gingival/peri-implantat sulcus och lämnas på plats i 30 sekunder. Pappersfläckar kommer att placeras i ett mikrocentrifugrör som innehåller Tris-EDTA-lösning. Alla prover kommer omedelbart att frysas och lagras vid -20 ° C tills laboratorieanalys. Biofilmprover kommer att avlägsnas från pappersremsorna genom att tillsätta 200 | il fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och virvel i 1 minut. Pappersfläcken kommer att tas bort och DNA isoleras med hjälp av Qiagen Miniamp Kit (Valencia, CA) efter tillverkarens rekommendationer. Oral profylax eller icke -kirurgisk periodontal behandling kommer inte att initieras före provuppsamlingen, och försökspersoner kommer att registreras i ett parodontalt behandlingsprogram efter behov.

   DNA-sekvensering och dataanalys: V3-V4-hypervariabla regionen i 16S rRNA-genen kommer att förstärkas med användning av primrarna och PCR-förhållanden som tidigare beskrivits av Klindworth et al. (2013). Enligt tillverkarens rekommendation kommer PCR -rening att utföras med hjälp av magnetiska pärlor (Ampure XP -pärlor, Beckman Agencourt) i ett förhållande av 0,8 pärlor/PCR -volym. Efter ligering av adaptrar kommer en ny PCR -rening att utföras med magnetpärlor (Ampure XP -pärlor, Beckman Agencourt) i ett förhållande av 1,12 pärlor/PCR -volym. Normalisering av biblioteket kommer att utföras med hjälp av SequalPrep ™ Normalization Plate Kit (96) (Applied Biosystems ™), och det kombinerade biblioteket kommer att kvantifieras. Equimolära DNA-koncentrationer kommer att samlas och sekvenseras på Illumina Miseq-plattformen för att producera 300-bp parade-end-sekvenser. Bioinformatisk analys kommer att utföras med QIIME 2 2020.6 (Bolyen et al., 2019). Demultiplexerade FASTQ-filer kommer att erhållas från sekvenseringsanläggningen, och Q2 Cutadapt (Martin, 2011) kommer att användas för att ta bort primrar före denoisingprocessen, som kommer att utföras med Q2-Dada2 (Callahan et al., 2016). Rörledningen i linje till trädet MAFFT-FASTREE (Q2-Phylogeny) kommer att användas för att anpassa alla amplikonsekvensvarianter (ASV) med MAFFT (Katoh et al., 2002) och för att konstruera en fylogeni med fasttree2 (Price et al., 2010). Taxonomi kommer att tilldelas ASV: er med hjälp av Naive Bayes Taxonomy Classifier Q2-Feature-klassificerare (Bokulich et al. 2018a) utbildad mot den utvidgade mänskliga orala mikrobiomdatabasen (EHOMD, V15.2) (Escapa et al., 2018). Alpha-diversity metrics (Shannon (Spellerberg, 2003)), beta-diversity metrics (weighted UniFrac (Lozupone et al. 2007), unweighted UniFrac (Lozupone et al. 2005)), and Principal Coordinates Analysis (PCoA) will be estimated using the q2-diversity core-metrics-phylogenetic pipeline after samples are rarefied to 10591 sekvenser per prov. Skillnader i alfa -mångfald (skillnader inom prover) kommer att mätas med parvisa skillnader (Bokulich et al. 2018b). För beta-mångfald (skillnader mellan prover) kommer skillnader mellan grupper att mätas med Permanova och Permdisp (Q2-Diversity). Kärnanmikrobiomet (med tanke på kärnmikrobiomet som arter som finns i minst 50% av proverna i en grupp) kommer att beräknas med hjälp av kärnfunktionerna från TABLE-tabellen Q2-Feature-tabellnivå. Visualisering kommer att utföras med hjälp av värmekartan för Q2-Feature-tabellen (för att visualisera det relativa överflödet av arter) och Phylotoast (Dabdoub et al., 2016). Differentialöverflöd mellan arter kommer att beräknas med hjälp av ANCOM-BC (Lin & Peddada, 2020).

6. Inflammatorisk analys: Peri-implantat krevikulärt vätska och granuleringsvävnad från debridement kommer att samlas in från alla individer som är involverade i studien, på platser som behandlas med peri-implantit. Under insamlingen av materialet kommer platsen i fråga att isoleras ordentligt och torkas med steriliserade bomullsrullar. Supragingival -biofilmen kommer att avlägsnas och prover av tandköttsvätska kommer att erhållas genom att infoga papperspunkter mellan tanden och det periodontala vävnadsgränssnittet i 30 sekunder (Casarin et al. 2010). Två papperspunkter kommer att användas per plats för att erhålla en adekvat volym av crevikulär vätska. Volymen av insamlad vätska kommer att mätas med periotronen (Periotron 8000, Proflow Inc., Amityville, NY, USA) och pappersfläckarna kommer sedan att placeras i mikrocentrifugrör (Eppendorf), kodade för varje individ och experimentperioder med 150 ul fosfatbuffertlösning (PBS) och 0,05% TWEEN-20. Granuleringsvävnaden som tas bort under implantatskrapning lagras i Rnalater och fryst vid -80C. Proverna kommer att lagras för senare analys. Före analysen utspädes proverna i 60 | il buffert från Millipore -satsen, virvlad i 30 minuter och centrifugeras sedan i 10 minuter vid 10 000 varv / minut. Samples of each gingival fluid will be analyzed for IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, TNFα and IFN-Δ by Luminex/MAGpix technology, which will not only determine the presence, but will quantify in absolute terms the concentration of different markers in the same sample, using commercially available kits, following the manufacturer's instructions. I korthet kommer prover att utspädas i PBS -buffert + 5% Tween och virvlas i 30 sekunder före analys. Efter mild centrifugering kommer 25 | il supernatanten att placeras i plattor med 96 brunnar tillsammans med de immunmärkta pärlorna som är specifika för varje cytokin/proteas. Efter inkubation med pärlorna kommer sekundära antikroppar och substrat att tillhandahållas, och plattorna kommer att läsas med Magpix -plattformen. Koncentrationen av varje analyt kommer att uttryckas i Pg/ul. Prover med kvantifiering under detektionsgränsen för analysen kommer att registreras som "noll", och prover över kvantifieringsgränsen för standardkurvan kommer att registreras med ett värde lika med kurvens högsta värde.
7. Statistisk analys: - Statistiska analyser kommer att utföras för att jämföra kliniska parametrar, mikrobiomkomposition och cytokinuttryck mellan grupper under uppföljningsperioden. - Skillnaden i effektivitet mellan de två procedurerna kommer att bedömas.

Alla analyser av denna forskning kommer att utföras i forskningslaboratorierna i periodontikområdet i Piracicaba School of Dentistry.