Evaluatie van implantoplastiek bij de behandeling van peri-implantitis.

1. Deelnemers: volwassen patiënten met de diagnose peri-implantitis (Caton et al. 2018, Papapanou et al. 2018) zullen worden opgenomen; Patiënten worden aangeworven uit de populatie die is bestudeerd in de bovengenoemde case-control studie, bij wie de diagnose peri-implantitis werd gesteld; Inclusie- en uitsluitingscriteria volgen de eerder gedefinieerde criteria in de case-control studie.
2. Allocatie van de deelnemers: deelnemers worden willekeurig toegewezen aan twee groepen: groep 1 (implantoplastiek) en groep 2 (chirurgische toegang). - Allocatie wordt uitgevoerd door een geautomatiseerd randomisatiesysteem (verzegelde envelope.com).
3. Klinische procedures: Groep 1 (implantoplastiek): De getroffen implantaten zullen implantoplastiek ondergaan, waarbij het implantaatoppervlak wordt verbouwd om het reinigen te vergemakkelijken en gecompromitteerde gebieden te verwijderen. Groep 2 (chirurgische toegang): De aangetaste implantaten zullen worden behandeld door chirurgische toegang, met mechanische verwijdering van het ontstoken weefsel en het reinigen van het implantaatoppervlak.
4. Klinische evaluatie: initiële klinische parameters worden vastgelegd vóór de procedure en met specifieke intervallen (1, 3 en 6 maanden na de procedure); Parodontale en peri-implantaatindices, waaronder plaque-index, bloedingen op sondering, inzetdiepte en klinisch hechtingsniveau, worden geëvalueerd door een gekalibreerde onderzoeker.

5. Biofilm (microbioom) Verzameling en analyse: parodontale en peri-implantaatbiofilmmonsters worden verzameld voor taxonomische analyse. Alle monsters worden verkregen voorafgaand aan het parodontale onderzoek. Voorafgaand aan Subgingival/submucosale biofilmcollectie, wordt Supragingival/Supramucosal Biofilm zorgvuldig verwijderd met behulp van steriele curettes. De site zal worden geïsoleerd met katoenen rollen en voorzichtig gedroogd met een luchtspuit om besmetting met speeksel te voorkomen. Biofilmmonsters worden verkregen door standaard filterpapierpunten van de buccale oppervlakken van de tanden/implantaten. De filterpapierpunten worden ingevoegd in de gingivale/peri-implantaatsulcus en 30 seconden op zijn plaats achtergelaten. Papieren vlekken worden geplaatst in een microcentrifugebuis met Tris-EDTA-oplossing. Alle monsters worden onmiddellijk bevroren en opgeslagen bij -20 ° C tot laboratoriumanalyse. Biofilmmonsters worden uit de papieren strips verwijderd door 200 µl fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) toe te voegen en 1 minuut te werven. De papieren plek wordt verwijderd en DNA geïsoleerd met behulp van de Qiagen MiniMP -kit (Valencia, CA) volgens de aanbevelingen van de fabrikant. Orale profylaxe of niet -chirurgische parodontale behandeling zal niet worden gestart vóór het verzamelen van monsters, en proefpersonen worden ingeschreven in een parodontaal behandelingsprogramma indien nodig.

   DNA-sequencing en gegevensanalyse: het V3-V4 hypervariabele gebied van het 16S rRNA-gen zal worden geamplificeerd met behulp van de primers en PCR-omstandigheden die eerder zijn beschreven door Klindworth et al. (2013). Volgens de aanbeveling van de fabrikant zal PCR -zuivering worden uitgevoerd met behulp van magnetische kralen (Ampure XP Bead, Beckman Agencourt) in een verhouding van 0,8 kralen/PCR -volume. Na ligatie van de adapters zal een nieuwe PCR -zuivering worden uitgevoerd met behulp van magnetische kralen (Ampure XP Bead, Beckman Agencourt) in een verhouding van 1,12 kralen/PCR -volume. Normalisatie van de bibliotheek wordt uitgevoerd met behulp van de SequalPrep ™ Normalisatie -plaatkit (96) (Applied Biosystems ™) en de gecombineerde bibliotheek wordt gekwantificeerd. Equimolaire DNA-concentraties zullen worden samengevoegd en gesequenced op het Illumina MiSeq-platform om sequenties van 300 bp gepaarde-end te produceren. Bioinformatische analyse wordt uitgevoerd met Qiime 2 2020.6 (Bolyen et al., 2019). Demultiplexed FASTQ-bestanden worden verkregen uit de sequencing-faciliteit en Q2 Cutadapt (Martin, 2011) zal worden gebruikt om primers te verwijderen voorafgaand aan het denoising-proces, dat zal worden uitgevoerd met Q2-Dada2 (Callahan et al., 2016). De MAFFT-FASTTREE (Q2-fylogenie) pijplijn van de Align-Tree zal worden gebruikt om alle ampliconsequentievarianten (ASV's) uit te lijnen met MAFFT (Katoh et al., 2002) en om een ​​fylogenie te construeren met fastTree2 (Price et al., 2010). Taxonomie zal worden toegewezen aan ASV's met behulp van de naïeve Bayes Taxonomy Classifier Q2-Feature-Classifier (Bokulich et al. 2018a) getraind tegen de uitgebreide menselijke orale microbioomdatabase (EHOMD, v15.2) (Escapa et al., 2018). Alpha-diversiteitsmetrieken (Shannon (Sierberg, 2003)), Beta-Diversity Metrics (gewogen Unifrac (Lozupone et al. 2007), ongewogen unifrac (Lozupone et al. 2005)) en hoofdcoördinaten (PCOA) zal worden geschat met behulp van de Q2-Diversity Core-Metric-phetrics-phetrics-phetrics-phetrics-phetrics-phetrics-phetrics-phetrische phetrics-phetrics-phetrische phetrische phetrische phetrische phetrische phetrische phetrics-toere 10591 reeksen per monster. Verschillen in alfa -diversiteit (verschillen in monsters) zullen worden gemeten met behulp van paarsgewijze verschillen (Bokulich et al. 2018b). Voor bèta-diversiteit (verschillen tussen monsters) zullen verschillen tussen groepen worden gemeten met behulp van Permanova en Permdisp (Q2-Diversity) -tests. Het kernmicrobioom (gezien het kernmicrobioom als soort aanwezig in ten minste 50% van de monsters in een groep) zal worden berekend met behulp van de kernkenmerken van de Q2-Feature-table-tabel soortniveau-tabel. Visualisatie zal worden uitgevoerd met behulp van de Q2-Feature-Table Heatmap (om de relatieve overvloed van soorten te visualiseren) en phylotoast (Dabdoub et al., 2016). Differentiële overvloed tussen soorten zal worden berekend met behulp van ANCOM-BC (Lin & Peddada, 2020).

6. Ontstekingsanalyse: Peri-implantaat Creviculaire vloeistof en granulatieweefsel van debridement zal worden verzameld uit alle personen die bij het onderzoek betrokken zijn, op locaties die worden behandeld met peri-implantitis. Tijdens het verzamelen van het materiaal zal de site in kwestie correct worden geïsoleerd en gedroogd met gesteriliseerde katoenrollen. De Supragingival Biofilm zal worden verwijderd en monsters van gingivale vloeistof worden verkregen door papierpunten tussen de tand en het parodontale weefselinterface gedurende 30 seconden in te voegen (Casarin et al. 2010). Twee papierpunten worden per site gebruikt om een ​​voldoende volume van creviculaire vloeistof te verkrijgen. Het volume van verzamelde vloeistof wordt gemeten met het periotron (Periotron 8000, Proflow Inc., Amityville, NY, VS) en de papieren vlekken worden vervolgens geplaatst in microcentrifuge-buizen (Eppendorf), gecodeerd voor elke individuele en experimentele periodes met 150 µl van fosfaatbufferoplossing (PBS) en 0,05% tussen 20. Het granulatieweefsel verwijderd tijdens het schrapen van het implantaat wordt opgeslagen in rnalater en bevroren op -80c. De monsters worden opgeslagen voor latere analyse. Vóór de analyse worden de monsters in 60 µl buffer uit de Millipore -kit verdund, gedurende 30 minuten gewerveld en vervolgens 10 minuten gecentrifugeerd bij 10.000 tpm. Monsters van elke gingivale vloeistof worden geanalyseerd op IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, TNFa en IFN-A door Luminex/Magpix-technologie, die niet alleen de aanwezigheid zal bepalen, maar in absolute termen de concentratie van verschillende markers in dezelfde steekproef zal kwantificeren, volgt de commercieel beschikbare keten, volgend op de fabrikant. In het kort, monsters worden verdund in PBS -buffer + 5% tween en gedurende 30 seconden gewerveld, voorafgaand aan analyse. Na zachte centrifugatie zal 25 µl supernatant worden geplaatst in platen met 96 putjes samen met de immunolabelde kralen die specifiek zijn voor elk cytokine/protease. Na incubatie met de kralen zullen secundaire antilichamen en substraat worden verstrekt en worden de platen gelezen met behulp van het Magpix -platform. De concentratie van elke analyt zal worden uitgedrukt in PG/µL. Monsters met kwantificering onder de detectielimiet van de analyse worden geregistreerd als "nul", en monsters boven de kwantificatielimiet van de standaardcurve worden geregistreerd met een waarde gelijk aan de hoogste waarde van de curve.
7. Statistische analyse: - Statistische analyses zullen worden uitgevoerd om klinische parameters, microbioomsamenstelling en cytokine -expressie tussen groepen gedurende de follow -upperiode te vergelijken. - Het verschil in werkzaamheid tussen de twee procedures zal worden beoordeeld.

Alle analyses van dit onderzoek zullen worden uitgevoerd in de onderzoekslaboratoria van het Periodontics -gebied van de Piracicaba School of Dentistry.