Evaluering av implantoplastikk i behandlingen av peri-implantitt.

1. Deltakere: Voksne pasienter diagnostisert med peri-implantitt (Caton et al. 2018, Papapanou et al. 2018) vil bli inkludert; Pasienter vil bli rekruttert fra befolkningen som ble studert i den nevnte casekontrollstudien, som fikk diagnosen peri-implantitt; Inkludering og eksklusjonskriterier vil følge kriteriene som tidligere er definert i casekontrollstudien.
2. Deltakerfordeling: Deltakerne vil bli tildelt tilfeldig i to grupper: gruppe 1 (implantoplastikk) og gruppe 2 (kirurgisk tilgang). - Tildeling vil bli utført av et datastyrt randomiseringssystem (forseglet konvolutt.com).
3. Kliniske prosedyrer: Gruppe 1 (implantoplastikk): De berørte implantatene vil gjennomgå implantoplastikk, som involverer ombygging av implantatoverflaten for å lette rengjøring og fjerne kompromitterte områder. Gruppe 2 (kirurgisk tilgang): De berørte implantatene vil bli behandlet gjennom kirurgisk tilgang, med mekanisk fjerning av det betente vevet og rengjøring av implantatoverflaten.
4. Klinisk evaluering: Innledende kliniske parametere vil bli registrert før prosedyren og med spesifikke intervaller (1, 3 og 6 måneder etter inngrepet); Periodontale og peri-implantatindekser, inkludert plakkindeks, blødning på sondering, sonderingsdybde og klinisk tilknytningsnivå, vil bli evaluert av en kalibrert sensor.

5. Biofilm (mikrobiom) samling og analyse: Periodontale og peri-implantat biofilmprøver vil bli samlet for taksonomisk analyse. Alle prøver vil bli oppnådd før periodontal undersøkelse. Før subgingival/submucosal biofilm -samling, vil supragingival/supramucosal biofilm bli fjernet nøye ved hjelp av sterile curetter. Stedet vil bli isolert ved hjelp av bomullsruller og tørket forsiktig med en luftsprøyte for å unngå forurensning med spytt. Biofilmprøver vil bli oppnådd med standard filterpapirpunkter fra bukkale overflater av tennene/implantatene. Filterpapirpunktene vil bli satt inn i gingival/peri-implantat sulcus og etterlatt på plass i 30 sekunder. Papirflekker vil bli plassert i et mikrosentrifugerør som inneholder Tris-EDTA-løsning. Alle prøver vil umiddelbart bli frosset og lagres ved -20 ° C til laboratorieanalyse. Biofilmprøver vil bli fjernet fra papirstrimlene ved å tilsette 200 ul fosfatbuffret saltvann (PBS) og virvel i 1 minutt. Papirstedet blir fjernet og DNA isolert ved bruk av Qiagen Miniamp Kit (Valencia, CA) etter produsentens anbefalinger. Oral profylakse eller ikke -kirurgisk periodontal behandling vil ikke bli startet før prøvesamling, og forsøkspersoner vil bli registrert i et periodonalt behandlingsprogram etter behov.

   DNA-sekvensering og dataanalyse: det V3-V4 hypervariable regionen av 16S rRNA-genet vil bli amplifisert ved bruk av primere og PCR-forhold som tidligere er beskrevet av Klindworth et al. (2013). I henhold til produsentens anbefaling, vil PCR -rensing bli utført ved hjelp av magnetiske perler (Ampure XP Bead, Beckman Agencourt) i et forhold på 0,8 perler/PCR -volum. Etter ligering av adapterne vil en ny PCR -rensing bli utført ved hjelp av magnetiske perler (Ampure XP Bead, Beckman Agencourt) i et forhold på 1,12 perler/PCR -volum. Normalisering av bibliotek vil bli utført ved hjelp av SequalPrep ™ normaliseringsplate -settet (96) (Applied Biosystems ™), og det kombinerte biblioteket vil bli kvantifisert. Ekimolare DNA-konsentrasjoner vil bli samlet og sekvensert på Illumina MiSeq-plattformen for å produsere 300-bp sammenkoblede sekvenser. Bioinformatisk analyse vil bli utført ved bruk av Qiime 2 2020.6 (Bolyen et al., 2019). Demultiplexed FASTQ-filer vil bli hentet fra sekvenseringsanlegget, og Q2 CutAdapt (Martin, 2011) vil bli brukt til å fjerne primere før denoising-prosessen, som vil bli utført med Q2-Dada2 (Callahan et al., 2016). Rørledningen i justering-til-tre (Q2-Phylogeny) vil bli brukt til å justere alle Amplicon-sekvensvarianter (ASV) med MAFFT (Katoh et al., 2002) og for å konstruere en fylogeni med FastTree2 (Price et al., 2010). Taksonomi vil bli tildelt ASV-er ved bruk av Naive Bayes taksonomiklassifiserer Q2-Feature-Classifier (Bokulich et al. 2018a) trent mot den utvidede humane orale mikrobiomdatabasen (Ehomd, v15.2) (Escapa et al., 2018). Alfa-mangfoldsmålinger (Shannon (Spellerberg, 2003)), beta-mangfoldighetsmålinger (vektet unifrac (Lozupone et al. 2007), uvektet unifrac (Lozupone et al. 2005), og viktigste koordinatanalyse (PCOA) vil være estbes ved å bruke Q2-Diversity-kjerne-pipel-pipel-m-me-diance-me-mectity-me-me-drys-en-pipel-pipel-pipel-pipel. 10591 sekvenser per prøve. Forskjeller i alfa -mangfold (forskjeller i prøver) vil bli målt ved bruk av parvise forskjeller (Bokulich et al. 2018b). For beta-mangfold (forskjeller mellom prøver) vil forskjeller mellom gruppene måles ved bruk av PermanOVA og PerMDISP (Q2-mangfold) -tester. Kjernen mikrobiomet (med tanke på kjernen mikrobiomet som arter som er til stede i minst 50% av prøvene i en gruppe) vil bli beregnet ved å bruke kjernefunksjonene fra Q2-Feature-Table-artsnivå-tabellen. Visualisering vil bli utført ved bruk av Q2-Feature-Table Heatmap (for å visualisere den relative forekomsten av arter) og Phylotoast (Dabdoub et al., 2016). Differensiell overflod mellom arter vil bli beregnet ved bruk av Ancom-BC (Lin & Peddada, 2020).

6. Inflammatorisk analyse: Peri-implantat sprekkvæske og granulasjonsvev fra debridement vil bli samlet fra alle individer som er involvert i studien, på steder behandlet med peri-implantitt. Under innsamling av materialet vil det aktuelle stedet være riktig isolert og tørket med steriliserte bomullsruller. Supragingival -biofilmen vil bli fjernet og prøver av gingivalvæske vil bli oppnådd ved å sette inn papirpunkter mellom tannen og det periodontale vevsgrensesnittet i 30 sekunder (Casarin et al. 2010). To papirpunkter vil bli brukt per sted for å oppnå et tilstrekkelig volum av sprekkervæske. Volumet av innsamlet væske vil bli målt med Periotron (Periotron 8000, ProBlow Inc., Amityville, NY, USA), og papirflekkene vil deretter bli plassert i mikrocentrifuge-rør (Eppendorf), kodet for hver enkelt og eksperimentelle perioder med 150 ul fosfatbuffer-oppløsning (PBS) og 0.05-20 ul phosfatbuffer-oppløsning (PBS) og eksperimentelle perioder med 150 ul fosfatbuffer-oppløsning (PBS) og eksperimentelle perioder med 150 ul Granulasjonsvevet som ble fjernet under implantatskraping vil bli lagret i rnalater og frosset ved -80C. Prøvene vil bli lagret for senere analyse. Før analyse vil prøvene fortynnes i 60 ul buffer fra Millipore -settet, virvlet i 30 minutter og deretter sentrifugert i 10 minutter ved 10.000 o / min. Prøver av hver tannkjøttvæske vil bli analysert for IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, TNFα og IFN-Δ av Luminex/Magpix-teknologi, som ikke bare vil bestemme tilstedeværelsen, men vil kvantifisere i absolutte vilkår som er konsentrasjon av forskjellige markører. Kort fortalt vil prøver bli fortynnet i PBS -buffer + 5% Tween, og virvlet i 30 sekunder, før analyse. Etter forsiktig sentrifugering vil 25 ul supernatant bli plassert i 96-brønners plater sammen med de immunmerte perlene som er spesifikke for hvert cytokin/protease. Etter inkubering med perlene vil sekundære antistoffer og underlag bli gitt, og platene vil bli lest ved hjelp av Magpix -plattformen. Konsentrasjonen av hver analyt vil bli uttrykt i Pg/ul. Prøver med kvantifisering under deteksjonsgrensen for analysen vil bli registrert som "null", og prøver over kvantifiseringsgrensen for standardkurven vil bli registrert med en verdi som tilsvarer den høyeste verdien av kurven.
7. Statistisk analyse: - Statistiske analyser vil bli utført for å sammenligne kliniske parametere, mikrobiomsammensetning og cytokinuttrykk mellom grupper gjennom oppfølgingsperioden. - Forskjellen i effekt mellom de to prosedyrene vil bli vurdert.

Alle analyser av denne forskningen vil bli utført i forskningslaboratoriene i periodonti -området i Piracicaba School of Dentistry.