Bewertung der Implantoplastik bei der Behandlung von Periimplantitis.

1. Teilnehmer: Erwachsene Patienten, bei denen eine Periimplantitis diagnostiziert wurde (Caton et al. 2018, Papapanou et al. 2018), werden einbezogen. Die Patienten werden aus der in der oben genannten Fallkontrollstudie untersuchten Bevölkerung rekrutiert, bei denen eine Periimplantitis diagnostiziert wurde. Die Einschluss- und Ausschlusskriterien folgen den zuvor in der Fallkontrollstudie definierten Kriterien.
2. Teilnehmerzuweisung: Die Teilnehmer werden zufällig in zwei Gruppen zugeordnet: Gruppe 1 (Implantoplastie) und Gruppe 2 (chirurgischer Zugang). - Die Zuordnung wird von einem computergestützten Randomisierungssystem (versiegelter Envelope.com) durchgeführt.
3. Klinische Eingriffe: Gruppe 1 (Implantoplastie): Die betroffenen Implantate werden Implantimlaste unterzogen, wobei die Umgestaltung der Implantatoberfläche die Reinigung und die Entfernung von kompromittierten Bereichen beinhaltet. Gruppe 2 (chirurgischer Zugang): Die betroffenen Implantate werden durch den chirurgischen Zugang mit mechanischer Entfernung des entzündeten Gewebes und der Reinigung der Implantatoberfläche behandelt.
4. Klinische Bewertung: Erste klinische Parameter werden vor dem Verfahren und in bestimmten Intervallen (1, 3 und 6 Monate nach dem Verfahren) aufgezeichnet. Parodontale und Periimplantatindizes, einschließlich Plaque-Index, Blutungen bei Untersuchung, Untersuchungstiefe und klinischem Bindungsniveau, werden von einem kalibrierten Untersucher bewertet.

5. Sammlung und Analyse von Biofilm (Mikrobiom): Für die taxonomische Analyse werden parodontale und periimplantische Biofilmproben erhoben. Alle Proben werden vor der Parodontaluntersuchung erhalten. Vor der subgingivalen/submukosalen Biofilmsammlung wird Supragingival/Supramucosal -Biofilm mit sterilen Kuretten sorgfältig entfernt. Die Website wird mit Baumwollverläufen isoliert und mit einer Luftspritze sanft getrocknet, um eine Kontamination mit Speichel zu vermeiden. Biofilmproben werden durch Standardfilterpapierpunkte von den bukkalen Oberflächen der Zähne/Implantate erhalten. Die Filterpapierpunkte werden in den Gingival-/Periimplantat-Sulcus eingeführt und 30 Sekunden lang an Ort und Stelle gelassen. Papierflecken werden in ein Mikrozentrifugenrohr mit Tris-Edta-Lösung gelegt. Alle Proben werden sofort eingefroren und bis zur Laboranalyse bei -20 ° C gelagert. Biofilmproben werden aus den Papierstreifen entfernt, indem 200 & mgr; l phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) und 1 Minute Vorgespiegelung hinzugefügt werden. Der Papierplatz wird nach den Empfehlungen des Herstellers entfernt und DNA isoliert mit dem Qiagen Miniamp -Kit (Valencia, CA) isoliert. Die orale Prophylaxe oder eine nicht -chirurgische parodontale Behandlung werden vor der Probenentnahme nicht eingeleitet, und die Probanden werden bei Bedarf in ein parodontales Behandlungsprogramm aufgenommen.

   DNA-Sequenzierung und Datenanalyse: Die hypervariable V3-V4-Region des 16S-rRNA-Gens wird unter Verwendung der zuvor von Klindworth et al. (2013). Nach der Empfehlung des Herstellers wird die PCR -Reinigung unter Verwendung von Magnetkügelchen (Ampure XP -Perle, Beckman Agencourt) mit einem Verhältnis von 0,8 Perlen/PCR -Volumen durchgeführt. Nach der Ligation der Adapter wird eine neue PCR -Reinigung unter Verwendung von Magnetkügelchen (Ampure XP -Perle, Beckman Agencourt) in einem Verhältnis von 1,12 Perlen/PCR -Volumen durchgeführt. Die Normalisierung der Bibliothek wird unter Verwendung des Sequalprep ™ -Normalisierungsplattenkits (96) (Applied Biosystems ™) durchgeführt und die kombinierte Bibliothek wird quantifiziert. Equimolare DNA-Konzentrationen werden auf der Illumina-MiSeq-Plattform gepoolt und sequenziert, um 300-bp-Paired-End-Sequenzen zu erzeugen. Die bioinformatische Analyse wird unter Verwendung von Qiime 2 2020.6 durchgeführt (Bolyen et al., 2019). Demultiplexed Fastq-Dateien werden aus der Sequenzierungseinrichtung erhalten, und Q2 Cutadapt (Martin, 2011) wird verwendet, um Primer vor dem Denoising-Prozess zu entfernen, der mit Q2-DADA2 durchgeführt wird (Callahan et al., 2016). Die Align-to-Tree-MAFFT-Fastree (Q2-Phylogenie) -Pipeline wird verwendet, um alle Amplicon-Sequenzvarianten (ASVs) mit MAFFT (Katoh et al., 2002) auszurichten und eine Phylogenie mit Fastree2 (Price et al., 2010) zu konstruieren. Die Taxonomie wird ASV unter Verwendung des Naive Bayes Taxonomy-Klassifikators Q2-Feature-Klassifizierer (Bokullich et al. 2018a) zugewiesen, der gegen die erweiterte menschliche orale Mikrobiomdatenbank (EHOMD, V15.2) trainiert wurde (ESCAPA et al., 2018). Alpha-Diversity-Metriken (Shannon (Spellerberg, 2003)), Beta-Diversity-Metriken (gewichtete UniFrac (Lozupone et al. 2007), ungewichtete UniFrac (Lozupone et al. 2005)), und die Hauptkoordinatenanalyse (PCOA) werden mit der q2-Diversity-METRICS-METRICS-METRICS-Pipeline geschätzt. pro Probe. Unterschiede in der Alpha -Diversität (Unterschiede innerhalb der Proben) werden unter Verwendung von paarweisen Unterschieden gemessen (Bokullich et al. 2018b). Für die Beta-Diversität (Unterschiede zwischen Proben) werden Unterschiede zwischen den Gruppen unter Verwendung von PerMDISP-Tests (Q2-Diversität) gemessen. Das Kernmikrobiom (unter Berücksichtigung des Kernmikrobioms als Spezies, die in mindestens 50% der Proben in einer Gruppe vorhanden sind) wird unter Verwendung der Kernmerkmale aus der Tabelle auf Speziesebene auf Speziesebene berechnet. Die Visualisierung wird unter Verwendung der q2-Feature-Tisch-Wärmemap (um die relative Häufigkeit von Spezies) und Phylotoast (Dabdoub et al., 2016) durchzuführen. Die unterschiedliche Häufigkeit zwischen den Arten wird mit ANCOM-BC (Lin & Peddada, 2020) berechnet.

6. Entzündungsanalyse: Von allen an der Studie beteiligten Personen, an denen mit Periimplantitis behandelt wurden, werden periimplantische Krevikularflüssigkeit und Granulationsgewebe von Debridements gesammelt. Während der Sammlung des Materials wird die fragliche Stelle ordnungsgemäß isoliert und mit sterilisierten Baumwollverläufen getrocknet. Das supragingivale Biofilm wird entfernt und die Proben von Gingivalflüssigkeiten erhalten, indem Papierpunkte zwischen dem Zahn und der parodontalen Gewebegrenzfläche 30 Sekunden lang eingefügt werden (Casarin et al. 2010). Es werden zwei Papierpunkte pro Stelle verwendet, um ein angemessenes Volumen an Krevikularflüssigkeit zu erhalten. Das Volumen der gesammelten Flüssigkeit wird mit dem Periotron (Periotron 8000, Proflow Inc., Amityville, NY, USA) gemessen, und die Papierflecken werden dann in Mikrozentrifuge-Röhrchen (Eppendorf) platziert, die für jede einzelne und experimentelle Perioden mit 150 µl Phosphat-Pufferlösung (PBS) und 0,05% TWEEN-20 codiert sind. Das während des Implantatabschabtes entferntes Granulationsgewebe wird in Rnalater gelagert und bei -80 ° C eingefroren. Die Proben werden für eine spätere Analyse gespeichert. Vor der Analyse werden die Proben in 60 µl Puffer aus dem Millipore -Kit verdünnt, 30 Minuten lang verwirbelt und dann 10 Minuten bei 10.000 U / min zentrifugiert. Die Proben jeder Gingivalflüssigkeit werden auf IL-1 & bgr;, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, TNFα und IFN-Δ von Luminex/Magpix-Technologie analysiert, die nicht nur die Anwesenheit bestimmen, sondern in absoluten Begriffen der Konzentration verschiedener Marker in derselben Probe im Handelsunterricht quantifiziert werden. Kurz gesagt werden die Proben in PBS -Puffer + 5% Tween verdünnt und vor der Analyse 30 Sekunden lang verwirbelt. Nach einer sanften Zentrifugation werden 25 µl Überstand in 96-Well-Platten zusammen mit den für jede Zytokin/Protease spezifischen immunmarkierten Perlen platziert. Nach der Inkubation mit den Perlen werden sekundäre Antikörper und Substrat bereitgestellt, und die Platten werden mit der Magpix -Plattform gelesen. Die Konzentration jedes Analyten wird in pg/µl exprimiert. Proben mit Quantifizierung unterhalb der Erkennungsgrenze der Analyse werden als "Null" aufgezeichnet, und die Stichproben über der Quantifizierungsgrenze der Standardkurve werden mit einem Wert aufgezeichnet, der dem höchsten Wert der Kurve entspricht.
7. Statistische Analyse: - statistische Analysen werden durchgeführt, um klinische Parameter, Mikrobiomzusammensetzung und Zytokinexpression zwischen den Gruppen während des gesamten Nachbeobachtungszeitraums zu vergleichen. - Der Unterschied in der Wirksamkeit zwischen den beiden Verfahren wird bewertet.

Alle Analysen dieser Forschung werden in den Forschungslabors des Parodontics -Bereichs der Piracicaba School of Dentistry durchgeführt.