Transfusionsrelateret EBV-infektion blandt allogene stamcelletransplanterede pædiatriske modtagere (TREASuRE)

Alle patienter vil blive rekrutteret cirka 1 måned før transplantation (før præ-transplantation konditionerende kemoterapi og præ-kirurgi evaluering) og fulgt op til 1 år efter transplantation. Hvert emne vil således blive fulgt op i en 13-måneders periode. Ved indtastning vil et spørgeskema dokumentere sociodemografiske data og præ-transplantations kliniske indikatorer såsom alder, køn, primær diagnose, tidligere kemoterapi, tidligere transfusion mv. Under opfølgningen vil case-rapportformularer (CRF) muliggøre prospektiv rapportering af alle variabler vedrørende EBV-serologi, transplantation, blodprodukttransfusion og EBV-komplikation.

EBV PCR og serologitestning:

Denne undersøgelse er observationel og vil bruge resultaterne af EBV PCR og EBV-serologi, hvilket gør det muligt at nå vores mål med betydelig omkostningsreduktion. Tid nul er, når patienten modtager sit transplantat. Nogle tests udføres før tid nul (præ-transplantation række af test inklusive EBV-serologi). Efter tid nul er der på alle steder en opfølgende behandlingsprotokol inklusive EBV PCR-test. Præ-transplantationssera fra modtagere og donorer testes ved standardmetoder for mmunoglobulin G (IgG) antistoffer mod EBV capsid antigenet (VCA), IgG antistoffer mod EBV tidlige antigener (EA) og antikomplement antistoffer mod EBV nuklear antigenerne (EBNA). EBV DNA-test udføres ved kvantitativ polymerasekædereaktion (PCR). Hvert center har en etableret tærskelværdi til bestemmelse af viral load. For at kunne fortolke patienternes virale belastningsdata korrekt fra hvert deltagende center, vil alle blive bedt om at udfylde en site report form (SRF) for at beskrive deres testmetode for EBV PCR og EBV serologi.

Præ-transplantationsmåling af EBV-antistoffer:

Serologisk testning, herunder EBV-seroprevalens, udføres altid på alle deltagende steder under evalueringen før transplantation (før konditionerende kemoterapi) hos både donorer og modtagere. Serologisk test er den test, der bruges til at bekræfte tilstedeværelsen af ​​virussen i blodet. For transplantater leveret af eksterne steder er donorblodprøver altid tilgængelige og vil give mulighed for serologisk testning på det laboratoriecenter, hvor transplantationen udføres. Serologisk test vil ikke blive udført på navlestrengsbloddonor, da den stort set altid er negativ for EBV. Donorer og modtagere vil blive klassificeret i henhold til deres præ-transplantationsserologiske status som: 1) med tidligere infektion (VCA- og EBNA IgG-titre > 10), 2) med nylig infektion eller er immunsupprimeret (VCA IgG-titre > 10 og EBNA IgG-titre < 10), 3) der har reaktiveret infektion (VCA, EBNA og EA IgG titere > 10), eller 4) er naive (intet serologiske tegn på tidligere infektion).

Post-transplantation EBV DNA PCR-test:

HSCT-modtagere følges nøje for EBV-infektion i post-transplantationsperioden. Selvom de fleste af blodprodukttransfusionerne sker i peri-transplantationsperioden, er det muligt, at patienter får blodprodukter på et senere tidspunkt efter transplantationen. Opfølgning på EBV PCR-resultater og komplikationer relateret til EBV vil derfor fortsætte op til et år efter transplantationen (eller dødstidspunktet). Dette tidsvindue vil tillade dokumentation af hele den kliniske bane af HSCT. Protokoller for opfølgning efter transplantation og for diagnosticering og behandling af EBV-sygdom hos allogene transplantatmodtagere er blevet gennemgået på alle deltagende steder. Hyppigheden af ​​EBV-infektion hos modtagere måles ved kvantitativ realtids-PCR-test udført MINDST hver 1.-2. uge fra transplantationstidspunktet til hospitalsudskrivning (som normalt er omkring 6 uger efter transplantationen). Efter hospitalsudskrivning udføres EBV PCR-monitorering ved hvert klinisk opfølgningsbesøg: MINDST to gange om måneden i ca. 4-6 måneder efter transplantationen eller så længe patienten forbliver immunsupprimeret. Derefter udføres ca. én EBV PCR om måneden indtil 1 år efter transplantationen.

Sammenfattende vil forekomsten af ​​EBV-infektion være tilstrækkeligt målt i løbet af en 1-årig opfølgningsperiode. På alle steder udføres MINDST 1 EBV PCR-test pr. 1-2 uger under indlæggelsen, 2 EBV PCR-tests pr. måned fra hospitalsudskrivning til 6 måneder efter transplantation og ca. 1 EBV PCR-test pr. måned fra 6 måneder til 12 måneder. Det samlede antal EBV PCR-resultater, der vil blive indsamlet pr. patient for hele opfølgningen, vil være cirka 18. Disse resultater vil blive hentet fra patientdiagrammer.

PTLD og andre komplikationer relateret til EBV:

Kliniske resultater såsom høj og stigende viral load EBV-infektion og PTLD vil rutinemæssigt blive screenet indtil et år efter transplantationen. PTLD-diagnose vil blive stillet i henhold til WHO-kriterier (Swerdlow et al, 2008) baseret på kliniske eller radiologiske tegn, der eksisterer sideløbende med en EBV-positiv PCR på blodprøver. Oplysninger relateret til PTLD vil blive indsamlet i sagsrapportformularen. Alle andre komplikationer, der muligvis er relateret til EBV (for eksempel: hæmofagocytisk syndrom, hepatitis osv.) vil også blive dokumenteret. En bedømmelseskomité (C. Buteau og C Alfieri) vil gennemgå patientspecifikke dataelementer for at bekræfte PTLD og andre komplikationer relateret til EBV.

Transfunderede blodprodukter:

Data om alle transfunderede blodprodukter vil blive indsamlet og vil omfatte deskriptorer af blodproduktenheden (type blodprodukt, antal enheder, opbevaringslængde osv.), transfunderet volumen (milliliter), transfusionens varighed, samt dato og tidspunkt for hver transfusion. Samlet volumen modtaget af hvert blodprodukt vil blive taget i betragtning i vores analyse samt antallet af transfusioner.

Et webstedsrapportformular (SRF) vil også blive udfyldt af hvert deltagende center for at dokumentere dets transfusionsprotokol, såsom typen af ​​blodprodukter, der anvendes til HSCT, leukoreduktion, type røde blodlegemer (RBC'er) (vaskede, bestrålede, CMV-negative osv.) .), type plasma (frisk frosset plasma, frosset plasma, opløsningsmiddel detergent plasma), type blodpladekoncentrater (aferese, poolet osv.), maksimal opbevaringslængde (dage) osv.

Bestemmelse af kilden til EBV ved alvorlige EBV-infektioner:

For endeligt at demonstrere, at virus fra transfunderede blodprodukter kan kædes sammen med alvorlige komplikationer såsom høj og stigende viral load EBV-infektion/PTLD, vil vi genotype EBV-stammen fra disse patienter. Blodenheder administreret til disse patienter vil blive sporet tilbage til donorerne, som igen (med samtykke) vil blive serologisk vurderet for EBV, og alle seropositive donorer vil få deres EBV-stamme genotypet til sammenligning med patientens stamme. Mange bloddonorer pr. tilfælde vil skulle spores, da modtagere modtager blodprodukter fra mange bloddonorer (1 enhed RBC leveres af 1 donor, 1 enhed plasma leveres af 1 donor og 1 enhed blodplader leveres af 4 donorer) . I gennemsnit forventede vi, at omkring 25 donorer skulle spores pr. sag (estimeret med pilotdata; Trottier et al, 2012). Vi bruges til at spore bloddonorer fra graftmodtagere som rapporteret i Alfieri et al. (1996).

Kort procedure for EBV-genotypebestemmelse:

10 ml blod (2 ml til inficerede pædiatriske patienter) adskilles ved densitetscentrifugering på Ficoll-hypaque-gradienter. Den mononukleære cellefraktion høstes, vaskes og dyrkes i nærvær af cyclosporin for at tillade udvækst af donorens EBV-positive celler og etablering af en immortaliseret EBV-positiv B-cellelinje. Det virale DNA inden for denne linje kan derefter amplificeres ved PCR under anvendelse af primere fra BamHI-K-regionen af ​​EBV-genomet, som er kendt for at være meget polymorf blandt de forskellige EBV-stammer. Fragmenterne af forskellig størrelse af den amplificerede region kan skelnes ved migration på en agarosegel (Alfieri et al, 1996). For at verificere vores resultater for identitet mellem patienter og bloddonorer vil vi også anvende EBNA-typebestemmelsesteknikken, som udføres ved western blot-analyse under anvendelse af et defineret EBNA-positivt serum (Alfieri et al, 1996).