Transfusionsbedingte EBV-Infektion bei pädiatrischen Empfängern von allogenen Stammzelltransplantationen (TREASuRE)

Alle Patienten werden etwa 1 Monat vor der Transplantation (vor konditionierender Chemotherapie vor der Transplantation und präoperativer Beurteilung) rekrutiert und bis 1 Jahr nach der Transplantation nachbeobachtet. Somit wird jedes Subjekt über einen Zeitraum von 13 Monaten nachbeobachtet. Bei der Aufnahme dokumentiert ein Fragebogen soziodemografische Daten und klinische Indikatoren vor der Transplantation wie Alter, Geschlecht, Primärdiagnose, vorherige Chemotherapie, vorherige Transfusion usw. Während der Nachsorge ermöglichen Fallberichtsformulare (CRF) die prospektive Berichterstattung aller Variablen in Bezug auf EBV-Serologie, Transplantation, Blutprodukttransfusion und EBV-Komplikationen.

EBV-PCR und serologische Tests:

Diese Studie ist eine Beobachtungsstudie und wird die Ergebnisse der EBV-PCR und EBV-Serologie verwenden, sodass unsere Ziele mit erheblichen Kosteneinsparungen erreicht werden können. Zum Zeitpunkt Null erhält der Patient sein Transplantat. Einige Tests werden vor dem Zeitpunkt Null durchgeführt (Testreihe vor der Transplantation, einschließlich EBV-Serologie). Nach dem Zeitpunkt Null gibt es an allen Standorten ein Nachbehandlungsprotokoll einschließlich EBV-PCR-Tests. Seren vor der Transplantation von Empfängern und Spendern werden mit Standardmethoden auf Immunglobulin G (IgG)-Antikörper gegen das EBV-Kapsidantigen (VCA), IgG-Antikörper gegen frühe EBV-Antigene (EA) und Antikomplement-Antikörper gegen die EBV-Kernantigene (EBNA) getestet. EBV-DNA-Tests werden durch quantitative Polymerase-Kettenreaktion (PCR) durchgeführt. Jedes Zentrum hat einen festgelegten Schwellenwert zur Bestimmung der Viruslast. Um die Viruslastdaten der Patienten von jedem teilnehmenden Zentrum richtig interpretieren zu können, müssen alle ein Standortberichtsformular (SRF) ausfüllen, um ihre Testmethode für EBV-PCR und EBV-Serologie zu beschreiben.

Messung von EBV-Antikörpern vor der Transplantation:

Serologische Tests, einschließlich der EBV-Seroprävalenz, werden sowohl bei Spendern als auch bei Empfängern immer an allen teilnehmenden Standorten während der Vortransplantationsbewertung (vor konditionierender Chemotherapie) durchgeführt. Der serologische Test ist der Test, der verwendet wird, um das Vorhandensein des Virus im Blut zu bestätigen. Für Transplantate, die von externen Stellen bereitgestellt werden, sind Spenderblutproben immer verfügbar und ermöglichen serologische Tests in dem Laborzentrum, in dem die Transplantation durchgeführt wird. Serologische Tests werden bei Nabelschnurblutspendern nicht durchgeführt, da sie praktisch immer negativ auf EBV sind. Spender und Empfänger werden gemäß ihrem serologischen Status vor der Transplantation klassifiziert als: 1) mit früherer Infektion (VCA- und EBNA-IgG-Titer > 10), 2) mit kürzlicher Infektion oder immunsupprimiert (VCA-IgG-Titer > 10 und EBNA-IgG-Titer). < 10), 3) reaktivierte Infektion (VCA-, EBNA- und EA-IgG-Titer > 10) oder 4) naiv (keine serologischen Anzeichen einer früheren Infektion).

EBV-DNA-PCR-Tests nach der Transplantation:

HSCT-Empfänger werden in der Zeit nach der Transplantation engmaschig auf eine EBV-Infektion überwacht. Obwohl die meisten Transfusionen von Blutprodukten während der Periode vor der Transplantation stattfinden, ist es möglich, dass Patienten Blutprodukte zu einem späteren Zeitpunkt nach der Transplantation erhalten. Die Nachverfolgung der EBV-PCR-Ergebnisse und Komplikationen im Zusammenhang mit EBV wird daher bis zu einem Jahr nach der Transplantation (oder dem Todeszeitpunkt) fortgesetzt. Dieses Zeitfenster ermöglicht die Dokumentation des gesamten klinischen Verlaufs der HSCT. Protokolle für die Nachsorge nach der Transplantation und für die Diagnose und Behandlung der EBV-Erkrankung bei allogenen Transplantatempfängern wurden an allen teilnehmenden Standorten überprüft. Die Inzidenz einer EBV-Infektion bei Empfängern wird durch quantitative Echtzeit-PCR-Tests gemessen, die MINDESTENS alle 1-2 Wochen vom Zeitpunkt der Transplantation bis zur Entlassung aus dem Krankenhaus (normalerweise etwa 6 Wochen nach der Transplantation) durchgeführt werden. Nach der Entlassung aus dem Krankenhaus wird die EBV-PCR-Überwachung bei jedem klinischen Nachsorgebesuch durchgeführt: MINDESTENS zweimal pro Monat für etwa 4-6 Monate nach der Transplantation oder solange der Patient immunsupprimiert bleibt. Danach wird etwa eine EBV-PCR pro Monat bis 1 Jahr nach der Transplantation durchgeführt.

Insgesamt wird die Inzidenz einer EBV-Infektion während einer 1-jährigen Nachbeobachtungszeit angemessen gemessen. An allen Standorten wird MINDESTENS 1 EBV-PCR-Test alle 1-2 Wochen während des Krankenhausaufenthalts, 2 EBV-PCR-Tests pro Monat von der Krankenhausentlassung bis 6 Monate nach der Transplantation und etwa 1 EBV-PCR-Test pro Monat von 6 Monaten bis 12 Monaten durchgeführt. Die Gesamtzahl der EBV-PCR-Ergebnisse, die pro Patient für die gesamte Nachsorge gesammelt werden, beträgt ungefähr 18. Diese Ergebnisse werden aus Patientenakten abgerufen.

PTLD und andere Komplikationen im Zusammenhang mit EBV:

Klinische Ergebnisse wie eine EBV-Infektion mit hoher und zunehmender Viruslast und PTLD werden routinemäßig bis ein Jahr nach der Transplantation untersucht. Die PTLD-Diagnose wird gemäß den WHO-Kriterien (Swerdlow et al., 2008) basierend auf klinischen oder radiologischen Anzeichen gestellt, die gleichzeitig mit einer EBV-positiven PCR auf Blutproben vorliegen. Informationen zu PTLD werden im Fallberichtsformular erfasst. Alle anderen Komplikationen, die möglicherweise im Zusammenhang mit EBV stehen (z. B.: hämophagozytisches Syndrom, Hepatitis usw.), werden ebenfalls dokumentiert. Ein Bewertungsausschuss (C. Buteau und C. Alfieri) werden patientenspezifische Datenelemente überprüfen, um PTLD und andere Komplikationen im Zusammenhang mit EBV zu bestätigen.

Transfundierte Blutprodukte:

Daten zu allen transfundierten Blutprodukten werden gesammelt und umfassen Deskriptoren der Blutprodukteinheit (Art des Blutprodukts, Anzahl der Einheiten, Aufbewahrungsdauer usw.), des transfundierten Volumens (Milliliter), der Dauer der Transfusion sowie Datum und Uhrzeit jeder Transfusion. Das erhaltene Gesamtvolumen aller Blutprodukte wird in unserer Analyse ebenso berücksichtigt wie die Anzahl der Transfusionen.

Jedes teilnehmende Zentrum füllt außerdem ein Standortberichtsformular (SRF) aus, um sein Transfusionsprotokoll zu dokumentieren, z .), Art des Plasmas (gefrorenes Frischplasma, gefrorenes Plasma, Lösungsmittel-Detergens-Plasma), Art der Thrombozytenkonzentrate (Apherese, gepoolt usw.), maximale Aufbewahrungsdauer (Tage) usw.

Bestimmung der EBV-Quelle bei schweren EBV-Infektionen:

Um definitiv zu zeigen, dass Viren aus transfundierten Blutprodukten mit schweren Komplikationen wie einer EBV-Infektion/PTLD mit hoher und zunehmender Viruslast in Verbindung gebracht werden können, werden wir den EBV-Stamm dieser Patienten genotypisieren. Bluteinheiten, die diesen Patienten verabreicht wurden, werden zu den Spendern zurückverfolgt, die wiederum (mit Zustimmung) serologisch auf EBV untersucht werden, und bei allen seropositiven Spendern wird ihr EBV-Stamm zum Vergleich mit dem Stamm des Patienten genotypisiert. Viele Blutspender pro Fall müssen zurückverfolgt werden, da die Empfänger Blutprodukte von vielen Blutspendern erhalten (1 Einheit Erythrozyten wird von 1 Spender bereitgestellt, 1 Einheit Plasma wird von 1 Spender bereitgestellt und 1 Einheit Thrombozyten wird von 4 Spendern bereitgestellt). . Im Durchschnitt haben wir erwartet, dass etwa 25 Spender pro Fall ermittelt werden müssen (geschätzt anhand von Pilotdaten; Trottier et al., 2012). Wir werden bei der Rückverfolgung von Blutspendern von Transplantatempfängern eingesetzt, wie in Alfieri et al. (1996).

Kurzes Verfahren zur EBV-Genotypisierung:

10 ml Blut (2 ml für infizierte pädiatrische Patienten) werden durch Dichtezentrifugation auf Ficoll-Hypaque-Gradienten getrennt. Die mononukleäre Zellfraktion wird geerntet, gewaschen und in Gegenwart von Cyclosporin kultiviert, um das Auswachsen der EBV-positiven Zellen des Spenders und die Etablierung einer immortalisierten EBV-positiven B-Zelllinie zu ermöglichen. Die virale DNA innerhalb dieser Linie kann dann durch PCR unter Verwendung von Primern aus der BamHI-K-Region des EBV-Genoms amplifiziert werden, die bekanntermaßen unter den verschiedenen EBV-Stämmen hochgradig polymorph ist. Die unterschiedlich großen Fragmente der amplifizierten Region können durch Migration auf einem Agarosegel unterschieden werden (Alfieri et al., 1996). Um unsere Ergebnisse auf Identität zwischen Patienten und Blutspendern zu überprüfen, werden wir auch die EBNA-Typisierungstechnik anwenden, die durch Western-Blot-Analyse unter Verwendung eines definierten EBNA-positiven Serums durchgeführt wird (Alfieri et al, 1996).