Transzfúzióval összefüggő EBV-fertőzés allogén őssejt-transzplantált gyermekgyógyászati ​​recipiensek körében (TREASuRE)

Az összes beteget körülbelül 1 hónappal a transzplantáció előtt (a transzplantáció előtti kondicionáló kemoterápia és a műtét előtti értékelés előtt), majd a transzplantációt követő 1 évig követik. Így minden tantárgyat 13 hónapig nyomon követnek. A belépéskor egy kérdőív dokumentálja a szocio-demográfiai adatokat és a transzplantáció előtti klinikai mutatókat, például életkort, nemet, elsődleges diagnózist, korábbi kemoterápiát, korábbi transzfúziót stb. A nyomon követés során az esetjelentési űrlapok (CRF) lehetővé teszik az EBV-szerológiával, a transzplantációval, a vérkészítmény transzfúziójával és az EBV-szövődményekkel kapcsolatos összes változó prospektív jelentését.

EBV PCR és szerológiai vizsgálat:

Ez a tanulmány megfigyeléses, és az EBV PCR és az EBV szerológia eredményeit fogja felhasználni, lehetővé téve céljaink elérését jelentős költségcsökkentés mellett. A nulla időpont az, amikor a páciens megkapja a graftot. Egyes teszteket a nulla időpont előtt végeznek (transzplantáció előtti tesztsorozat, beleértve az EBV-szerológiát). A nulladik időpont után minden helyen van egy utókezelési protokoll, beleértve az EBV PCR-tesztet. A recipiensektől és donoroktól származó transzplantáció előtti szérumokat standard módszerekkel tesztelik az EBV kapszid antigén (VCA) immunglobulin G (IgG), az EBV korai antigénekkel szembeni IgG antitestek (EA) és az EBV nukleáris antigének (EBNA) elleni antikomplement antitestek kimutatására. Az EBV DNS vizsgálatát kvantitatív polimeráz láncreakcióval (PCR) végzik. Minden központ rendelkezik egy meghatározott küszöbértékkel a vírusterhelés meghatározásához. Az egyes részt vevő központokból származó betegek vírusterhelési adatainak megfelelő értelmezéséhez mindenkinek ki kell töltenie egy helyszíni jelentési űrlapot (SRF), amely leírja az EBV PCR és az EBV szerológia vizsgálati módszerét.

Az EBV antitestek transzplantáció előtti mérése:

A szerológiai vizsgálatot, beleértve az EBV szeroprevalenciáját is, mindig minden résztvevő helyen elvégzik a transzplantáció előtti értékelés során (a kondicionáló kemoterápia előtt) mind a donoroknál, mind a recipienseknél. A szerológiai vizsgálat az a teszt, amelyet a vírus vérben való jelenlétének megerősítésére használnak. A külső helyről származó graftoknál mindig rendelkezésre állnak donor vérminták, amelyek lehetővé teszik a szerológiai vizsgálatot abban a laboratóriumi központban, ahol a transzplantációt végzik. A köldökzsinórvér donorokon nem végeznek szerológiai vizsgálatot, mivel az EBV-re gyakorlatilag mindig negatív. A donorokat és a recipienseket a transzplantáció előtti szerológiai állapotuk szerint osztályozzák: 1) múltbeli fertőzésben szenvedők (VCA és EBNA IgG titerek > 10), 2) közelmúltban fertőzésben szenvedtek vagy immunszuppresszáltak (VCA IgG titerek > 10 és EBNA IgG titerek). < 10), 3) reaktivált fertőzés (VCA, EBNA és EA IgG titer > 10), vagy 4) naiv (nincs korábbi fertőzés szerológiai jele).

Transzplantáció utáni EBV DNS PCR vizsgálat:

A HSCT-recipienseket szorosan követik az EBV fertőzés szempontjából a transzplantáció utáni időszakban. Bár a legtöbb vérkészítmény transzfúziója a transzplantáció előtti időszakban történik, lehetséges, hogy a betegek a transzplantáció után később kapnak vérkészítményt. Az EBV PCR-eredmények és az EBV-vel kapcsolatos szövődmények nyomon követése ezért a transzplantációt (vagy a halál időpontját) követő egy évig folytatódik. Ez az időablak lehetővé teszi a HSCT teljes klinikai pályájának dokumentálását. A transzplantáció utáni nyomon követésre, valamint az EBV-betegség diagnosztizálására és kezelésére allogén graft-recipienseknél alkalmazott protokollokat minden résztvevő helyszínen felülvizsgálták. Az EBV-fertőzés előfordulási gyakoriságát a recipienseknél kvantitatív, valós idejű PCR-vizsgálattal mérik, amelyet MINIMUM 1-2 hetente végeznek a transzplantációtól a kórházi elbocsátásig (ami általában körülbelül 6 héttel a transzplantáció után). Kórházi elbocsátást követően EBV PCR monitorozást végeznek minden klinikai utóellenőrzés alkalmával: LEGALÁBB havonta kétszer, körülbelül 4-6 hónapig a transzplantációt követően, vagy amíg a beteg immunrendszere szuppresszált marad. Ezt követően havonta körülbelül egy EBV PCR-t végzünk a transzplantációt követő 1 évig.

Összefoglalva, az EBV-fertőzés előfordulási gyakorisága megfelelően mérhető egy 1 éves követési időszak alatt. Minden helyszínen 1-2 hetente LEGALÁBB 1 EBV PCR tesztet végeznek kórházi kezelés alatt, havonta 2 EBV PCR tesztet a kórházi elbocsátástól a transzplantáció utáni 6 hónapig és körülbelül havi 1 EBV PCR tesztet 6 hónaptól 12 hónapig. Az EBV PCR-eredmények teljes száma, amelyet betegenként gyűjtenek a teljes követés során, körülbelül 18 lesz. Ezeket az eredményeket a rendszer a betegtáblázatokból kéri le.

PTLD és egyéb EBV-vel kapcsolatos szövődmények:

Az olyan klinikai eredményeket, mint a magas és növekvő vírusterhelésű EBV-fertőzés és a PTLD, rutinszerűen szűrjük a transzplantációt követő egy évig. A PTLD diagnózisát a WHO kritériumai szerint (Swerdlow és mtsai, 2008) a klinikai vagy radiológiai jelek alapján végzik el, amelyek együtt léteznek a vérmintákon végzett EBV-pozitív PCR-rel. A PTLD-vel kapcsolatos információkat az esetjelentés űrlapon gyűjtjük össze. Minden egyéb, az EBV-vel esetlegesen összefüggő szövődményt (például: hemophagocytás szindróma, hepatitis stb.) szintén dokumentálni kell. Egy bíráló bizottság (C. Buteau és C. Alfieri) áttekinti a betegspecifikus adatelemeket a PTLD és az EBV-vel kapcsolatos egyéb szövődmények megerősítésére.

Transzfúziós vérkészítmények:

Az összes átömlesztett vérkészítményre vonatkozó adatokat összegyűjtjük, és tartalmazni fogják a vérkészítmény egység leírását (a vérkészítmény típusa, az egységek száma, a tárolás időtartama stb.), a transzfundált mennyiséget (milliliter), a transzfúzió időtartamát, valamint az egyes transzfúziók dátumát és időpontját. Elemzésünk során figyelembe vesszük az egyes vérkészítmények teljes mennyiségét, valamint a transzfúziók számát.

Minden részt vevő központ egy helyszíni jelentési űrlapot (SRF) is kitölt, hogy dokumentálja a transzfúziós protokollját, például a HSCT-hez használt vérkészítmények típusát, a leukoredukciót, a vörösvértestek (RBC) típusát (mosott, besugárzott, CMV-negatív stb.). .), a plazma típusa (friss fagyasztott plazma, fagyasztott plazma, oldószeres detergens plazma), a vérlemezke-koncentrátum típusa (aferézis, egyesített stb.), a tárolás maximális időtartama (nap), stb.

Az EBV forrásának meghatározása súlyos EBV fertőzésekben:

Annak érdekében, hogy egyértelműen bebizonyítsuk, hogy a transzfundált vérkészítményekből származó vírus súlyos szövődményekhez köthető, mint például a magas és növekvő vírusterhelésű EBV fertőzés/PTLD, ezekből a betegekből genotipizáljuk az EBV törzset. Az ezeknek a betegeknek beadott véregységeket a donorokhoz vezetik vissza, akik (a beleegyezésükkel) szerológiailag megvizsgálják az EBV-t, és minden szeropozitív donor EBV-törzsének genotípusát meg kell határozni a páciens törzsével való összehasonlítás céljából. Esetenként sok véradót kell nyomon követni, mivel a recipiensek sok véradótól kapnak vérkészítményt (1 egység vörösvértestet 1 donor, 1 egység plazmát 1 donor és 1 egység vérlemezkét 4 donor biztosít) . Átlagosan arra számítottunk, hogy esetenként körülbelül 25 donort kell nyomon követni (pilóta adatokkal becsülve; Trottier et al, 2012). Alfieri et al. (1996).

Az EBV genotipizálásának rövid eljárása:

10 ml vért (2 ml fertőzött gyermekgyógyászati ​​betegeknél) sűrűségcentrifugálással választunk el Ficoll-hypaque gradienseken. A mononukleáris sejtfrakciót összegyűjtjük, mossuk és ciklosporin jelenlétében tenyésztjük, hogy lehetővé tegyük a donor EBV-pozitív sejtjeinek kiszaporodását és egy immortalizált EBV-pozitív B-sejtvonal létrehozását. Az ezen a vonalon belüli virális DNS ezután PCR-rel amplifikálható az EBV-genom BamHI-K régiójából származó primerek felhasználásával, amelyről ismert, hogy a különböző EBV törzsek között erősen polimorf. Az amplifikált régió különböző méretű fragmensei agaróz gélen történő migrációval különböztethetők meg (Alfieri és mtsai, 1996). Eredményeink betegek és véradók közötti azonosságának ellenőrzésére az EBNA-tipizálási technikát is alkalmazzuk, amelyet Western blot analízissel hajtunk végre meghatározott EBNA-pozitív szérum felhasználásával (Alfieri és mtsai, 1996).