同種幹細胞移植小児レシピエントにおける輸血関連EBV感染 (TREASuRE)

すべての患者は、移植の約 1 か月前 (移植前のコンディショニング化学療法および手術前の評価の前) に募集され、移植後 1 年間追跡されます。したがって、各被験者は13か月間追跡されます。 エントリー時に、アンケートは、社会人口統計学的データと、年齢、性別、一次診断、以前の化学療法、以前の輸血などの移植前の臨床指標を文書化します。 フォローアップ中、症例報告フォーム (CRF) により、EBV 血清学、移植、血液製剤輸血、および EBV 合併症に関するすべての変数の前向き報告が可能になります。

EBV PCR および血清学的検査:

この研究は観察的であり、EBV PCR および EBV 血清学の結果を使用して、大幅なコスト削減で目標を達成できるようにします。 時間ゼロは、患者が移植片を受け取るときです。 一部の検査は、時間ゼロの前に行われます (EBV 血清検査を含む一連の移植前検査)。 時間ゼロの後、すべてのサイトで、EBV PCR テストを含むフォローアップ治療プロトコルがあります。 レシピエントおよびドナーからの移植前血清は、EBVキャプシド抗原（VCA）に対する免疫グロブリンG（IgG）抗体、EBV初期抗原（EA）に対するIgG抗体、およびEBV核抗原（EBNA）に対する抗補体抗体について標準的な方法で検査されます。 EBV DNA 検査は、定量的ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) によって行われます。 各センターには、ウイルス量を決定するための確立されたしきい値があります。 参加している各センターからの患者のウイルス量データを適切に解釈するために、サイトレポートフォーム (SRF) に記入して、EBV PCR および EBV 血清学の検査方法を説明する必要があります。

EBV抗体の移植前測定:

EBV 血清陽性率を含む血清学的検査は、ドナーとレシピエントの両方で、移植前の評価中 (前処置化学療法の前) にすべての参加部位で常に行われます。 血清学的検査は、血液中のウイルスの存在を確認するために使用される検査です。 外部サイトから提供された移植片の場合、ドナーの血液サンプルは常に利用可能であり、移植が行われる研究所センターでの血清学的検査が可能になります。 臍帯血ドナーについては、ほぼ常に EBV が陰性であるため、血清学的検査は行われません。 ドナーとレシピエントは、移植前の血清学的状態に従って次のように分類されます。 < 10)、3) 感染が再燃している (VCA、EBNA および EA IgG 力価 > 10)、または 4) ナイーブである (以前の感染の血清学的徴候がない)。

移植後の EBV DNA PCR 検査:

HSCT の受信者は、移植後の期間に EBV 感染について綿密に追跡されます。 血液製剤の輸血のほとんどは移植前後の期間に行われますが、患者は移植後の後期に血液製剤を投与される可能性があります。したがって、EBV PCR の結果と EBV に関連する合併症のフォローアップは、移植後 1 年 (または死亡時) まで継続されます。 この時間枠により、HSCT の臨床経過全体を文書化できます。 移植後のフォローアップ、および同種移植レシピエントにおける EBV 疾患の診断と治療のためのプロトコルは、すべての参加施設で見直されています。 レシピエントにおける EBV 感染の発生率は、移植時から退院まで (通常は移植後約 6 週間)、最小で 1 ～ 2 週間ごとに実施される定量的リアルタイム PCR 検査によって測定されます。 退院後は、臨床経過観察のたびに EBV PCR モニタリングを実施します。移植後約 4 ～ 6 か月間、または患者の免疫抑制状態が続く限り、月に少なくとも 2 回。 その後、移植後 1 年まで、1 か月に 1 回程度の EBV PCR を行います。

要するに、EBV感染の発生率は、1年間の追跡期間中に適切に測定されます。 すべてのサイトで、入院中は 1 ～ 2 週間ごとに少なくとも 1 回の EBV PCR 検査が行われ、退院から移植後 6 か月までは 1 か月に 2 回の EBV PCR 検査が行われ、6 か月から 12 か月までは 1 か月に約 1 回の EBV PCR 検査が行われます。 フォローアップ全体で患者ごとに収集される EBV PCR 結果の総数は、約 18 になります。 これらの結果は、患者カルテから取得されます。

EBVに関連するPTLDおよびその他の合併症：

高いおよび増加するウイルス量 EBV 感染および PTLD などの臨床転帰は、移植後 1 年まで定期的にスクリーニングされます。 PTLD 診断は、血液検体の EBV 陽性 PCR と共存する臨床的または放射線学的徴候に基づいて、WHO 基準 (Swerdlow et al, 2008) に従って行われます。 PTLD に関する情報は、症例報告フォームに収集されます。 EBV に関連する可能性のある他のすべての合併症 (例: 血球貪食症候群、肝炎など) も記録されます。 審査委員会（C. Buteau と C Alfieri) は、患者固有のデータ要素を見直して、PTLD および EBV に関連するその他の合併症を確認します。

輸血血液製剤:

輸血されたすべての血液製剤に関するデータが収集され、血液製剤の単位（血液製剤の種類、単位数、保存期間など）、輸血量（ミリリットル）、輸血期間、および各輸血の日時。 すべての血液製剤から受け取った総量は、輸血の回数と同様に分析で考慮されます。

サイト レポート フォーム (SRF) は、HSCT に使用される血液製剤の種類、白血球減少、赤血球 (RBC) の種類 (洗浄、照射、CMV 陰性など) などの輸血プロトコルを文書化するために、各参加センターによって記入されます。 ）、血漿の種類（新鮮凍結血漿、凍結血漿、溶媒洗浄血漿）、濃縮血小板の種類（アフェレーシス、プールなど）、最大保存期間（日数）など

重度の EBV 感染症における EBV の感染源の特定:

輸血された血液製剤からのウイルスが、ウイルス負荷が高く増加している EBV 感染/PTLD などの重篤な合併症に関連している可能性があることを明確に示すために、これらの患者から EBV 株の遺伝子型を特定します。 これらの患者に投与された血液ユニットは、ドナーにまでさかのぼり、ドナーは（同意を得て）EBVについて血清学的に評価され、すべての血清反応陽性のドナーは、患者の株と比較するためにEBV株の遺伝子型が特定されます。 レシピエントは多くの献血者から血液製剤を受け取るため、ケースごとに多くの献血者を追跡する必要があります (1 単位の RBC は 1 人のドナーから提供され、1 単位の血漿は 1 人のドナーから提供され、1 単位の血小板は 4 人のドナーから提供されます)。 . 平均して、ケースごとに約 25 人のドナーを追跡する必要があると予想しました (パイロット データによる推定; Trottier et al, 2012)。 Alfieri et al. で報告されているように、移植レシピエントの献血者の追跡に使用されます。 (1996)。

EBVジェノタイピングの簡単な手順:

10 ml の血液 (感染した小児患者の場合は 2 ml) を Ficoll-hypaque 勾配での密度遠心分離によって分離します。 単核細胞画分を採取し、洗浄し、シクロスポリンの存在下で培養して、ドナーの EBV 陽性細胞を成長させ、不死化 EBV 陽性 B 細胞株を確立します。 この系統内のウイルス DNA は、EBV ゲノムの BamHI-K 領域からのプライマーを使用した PCR によって増幅できます。 増幅された領域の異なるサイズのフラグメントは、アガロースゲルでの移動によって区別できます（Alfieri et al、1996）。 患者と献血者の同一性に関する結果を検証するために、定義済みの EBNA 陽性血清を使用したウエスタンブロット分析によって実行される EBNA タイピング技術も使用します (Alfieri et al, 1996)。