Transfusiegerelateerde EBV-infectie bij pediatrische ontvangers van allogene stamceltransplantaties (TREASuRE)

Alle patiënten zullen ongeveer 1 maand vóór de transplantatie worden geworven (vóór pre-transplantatie conditionerende chemotherapie en pre-operatieve evaluatie) en tot 1 jaar na de transplantatie worden gevolgd. Zo wordt elk onderwerp gedurende een periode van 13 maanden opgevolgd. Bij binnenkomst zal een vragenlijst socio-demografische gegevens en pre-transplantatie klinische indicatoren documenteren, zoals leeftijd, geslacht, primaire diagnose, eerdere chemotherapie, eerdere transfusie, enz. Tijdens de follow-up zullen case report-formulieren (CRF) prospectieve rapportage mogelijk maken van alle variabelen met betrekking tot EBV-serologie, transplantatie, bloedproducttransfusie en EBV-complicatie.

EBV PCR en serologische testen:

Deze studie is observationeel en zal de resultaten van EBV-PCR en EBV-serologie gebruiken, waardoor onze doelstellingen kunnen worden bereikt met aanzienlijke kostenbesparingen. Tijd nul is wanneer de patiënt zijn transplantaat ontvangt. Sommige tests worden uitgevoerd vóór tijd nul (pre-transplantatie reeks tests inclusief EBV-serologie). Na tijd nul is er op alle locaties een vervolgbehandelingsprotocol inclusief EBV PCR-testen. Pre-transplantatiesera van ontvangers en donoren worden volgens standaardmethoden getest op mmunoglobuline G (IgG)-antilichamen tegen het EBV-capside-antigeen (VCA), IgG-antilichamen tegen EBV vroege antigenen (EA) en anticomplement-antilichamen tegen de EBV-nucleaire antigenen (EBNA). EBV DNA-testen worden uitgevoerd door kwantitatieve polymerasekettingreactie (PCR). Elk centrum heeft een vastgestelde drempelwaarde voor het bepalen van de viral load. Om de gegevens over de virale belasting van de patiënten van elk deelnemend centrum goed te kunnen interpreteren, moeten ze allemaal een site-rapportformulier (SRF) invullen om hun testmethode voor EBV-PCR en EBV-serologie te beschrijven.

Pre-transplantatiemeting van EBV-antilichamen:

Serologische tests, inclusief EBV-seroprevalentie, worden altijd uitgevoerd op alle deelnemende locaties tijdens de pre-transplantatie-evaluatie (vóór conditionerende chemotherapie) bij zowel donoren als ontvangers. Serologische tests zijn de tests die worden gebruikt om de aanwezigheid van het virus in het bloed te bevestigen. Voor transplantaten die door externe sites zijn geleverd, zijn er altijd donorbloedmonsters beschikbaar, zodat serologische tests kunnen worden uitgevoerd in het laboratoriumcentrum waar de transplantatie wordt uitgevoerd. Serologische tests worden niet uitgevoerd op navelstrengbloeddonoren, aangezien deze vrijwel altijd negatief zijn voor EBV. Donoren en ontvangers worden geclassificeerd op basis van hun pre-transplantatie serologische status als: 1) met een eerdere infectie (VCA- en EBNA IgG-titers > 10), 2) met een recente infectie of immuunonderdrukking (VCA IgG-titers > 10 en EBNA IgG-titers < 10), 3) een gereactiveerde infectie hebben (VCA-, EBNA- en EA IgG-titers > 10), of 4) naïef zijn (geen serologisch teken van eerdere infectie).

EBV DNA PCR-test na transplantatie:

HSCT-ontvangers worden nauwlettend gevolgd voor EBV-infectie in de post-transplantatieperiode. Hoewel de meeste transfusies van bloedproducten plaatsvinden tijdens de peri-transplantatieperiode, is het mogelijk dat patiënten bloedproducten op een later tijdstip na de transplantatie krijgen. Follow-up van EBV PCR-resultaten en complicaties gerelateerd aan EBV zal daarom doorgaan tot een jaar na transplantatie (of tijdstip van overlijden). Dit tijdvenster maakt documentatie van het volledige klinische traject van HSCT mogelijk. Protocollen voor follow-up na transplantatie en voor de diagnose en behandeling van EBV-ziekte bij ontvangers van een allogeen transplantaat zijn op alle deelnemende locaties beoordeeld. De incidentie van EBV-infectie bij ontvangers wordt gemeten door middel van kwantitatieve real-time PCR-tests die MINIMAAL om de 1-2 weken worden uitgevoerd vanaf het moment van transplantatie tot ontslag uit het ziekenhuis (meestal ongeveer 6 weken na transplantatie). Na ontslag uit het ziekenhuis wordt EBV-PCR-monitoring uitgevoerd bij elk klinisch vervolgbezoek: TEN MINSTE tweemaal per maand gedurende ongeveer 4-6 maanden na de transplantatie of zolang de patiënt immuunonderdrukt blijft. Daarna wordt ongeveer één EBV-PCR per maand uitgevoerd tot 1 jaar na de transplantatie.

Kortom, de incidentie van EBV-infectie zal adequaat worden gemeten gedurende een follow-upperiode van 1 jaar. Op alle locaties wordt TEN MINSTE 1 EBV PCR-test per 1-2 weken uitgevoerd tijdens ziekenhuisopname, 2 EBV PCR-testen per maand vanaf ontslag uit het ziekenhuis tot 6 maanden na transplantatie en ongeveer 1 EBV PCR-test per maand van 6 maanden tot 12 maanden. Het totale aantal EBV-PCR-resultaten dat per patiënt voor de gehele follow-up zal worden verzameld, is ongeveer 18. Deze resultaten worden opgehaald uit patiëntendossiers.

PTLD en andere complicaties gerelateerd aan EBV:

Klinische uitkomsten zoals een hoge en toenemende virale belasting, EBV-infectie en PTLD zullen routinematig worden gescreend tot een jaar na de transplantatie. De PTLD-diagnose zal worden gesteld volgens de WHO-criteria (Swerdlow et al, 2008) op basis van klinische of radiologische symptomen die samengaan met een EBV-positieve PCR op bloedmonsters. Informatie met betrekking tot PTLD zal worden verzameld in het casusrapportformulier. Alle andere complicaties die mogelijk verband houden met EBV (bijvoorbeeld: hemofagocytair syndroom, hepatitis, enz.) zullen ook worden gedocumenteerd. Een jurycommissie (C. Buteau en C Alfieri) zullen patiëntspecifieke gegevenselementen beoordelen om PTLD en andere complicaties gerelateerd aan EBV te bevestigen.

Getransfundeerde bloedproducten:

Gegevens over alle getransfundeerde bloedproducten zullen worden verzameld en omvatten descriptoren van de bloedproducteenheid (type bloedproduct, aantal eenheden, opslagduur, enz.), getransfundeerd volume (milliliter), duur van de transfusie, evenals de datum en tijd van elke transfusie. Het totale ontvangen volume van alle bloedproducten wordt in onze analyse in aanmerking genomen, evenals het aantal transfusies.

Elk deelnemend centrum zal ook een site-rapportageformulier (SRF) invullen om zijn transfusieprotocol te documenteren, zoals het type bloedproducten dat wordt gebruikt voor HSCT, leukoreductie, type rode bloedcellen (RBC's) (gewassen, bestraald, CMV-negatief, enz. .), type plasma (vers ingevroren plasma, bevroren plasma, plasma met oplosmiddeldetergens), type bloedplaatjesconcentraten (aferese, gepoold, enz.), maximale opslagduur (dagen), enz.

Bepaling van de bron van EBV bij ernstige EBV-infecties:

Om definitief aan te tonen dat virus uit getransfundeerde bloedproducten kan worden gekoppeld aan ernstige complicaties zoals een hoge en toenemende viral load EBV-infectie/PTLD, zullen we de EBV-stam van deze patiënten genotyperen. Bloedeenheden die aan deze patiënten worden toegediend, zullen worden getraceerd naar de donoren die op hun beurt (met toestemming) serologisch zullen worden beoordeeld op EBV, en van alle seropositieve donoren zal hun EBV-stam worden gegenotypeerd ter vergelijking met de stam van de patiënt. Per geval zullen veel bloeddonoren moeten worden opgespoord, aangezien ontvangers bloedproducten van veel bloeddonoren ontvangen (1 eenheid RBC wordt geleverd door 1 donor, 1 eenheid plasma wordt geleverd door 1 donor en 1 eenheid bloedplaatjes wordt geleverd door 4 donoren) . Gemiddeld verwachtten we dat per casus zo'n 25 donoren opgespoord moeten worden (geschat met pilotdata; Trottier et al, 2012). We worden gebruikt bij het opsporen van bloeddonoren van transplantaatontvangers, zoals gerapporteerd in Alfieri et al. (1996).

Korte procedure voor EBV-genotypering:

10 ml bloed (2 ml voor geïnfecteerde pediatrische patiënten) wordt gescheiden door dichtheidscentrifugatie op Ficoll-hypaque-gradiënten. De mononucleaire celfractie wordt geoogst, gewassen en gekweekt in aanwezigheid van cyclosporine om uitgroei van de EBV-positieve cellen van de donor mogelijk te maken en een onsterfelijk gemaakte EBV-positieve B-cellijn tot stand te brengen. Het virale DNA binnen deze lijn kan vervolgens worden geamplificeerd door PCR met behulp van primers uit het BamHI-K-gebied van het EBV-genoom, waarvan bekend is dat het zeer polymorf is tussen de verschillende EBV-stammen. De fragmenten van verschillende grootte van het geamplificeerde gebied kunnen worden onderscheiden door migratie op een agarosegel (Alfieri et al, 1996). Om onze resultaten voor identiteit tussen patiënten en bloeddonoren te verifiëren, zullen we ook de EBNA-typeringstechniek gebruiken die wordt uitgevoerd door western blot-analyse met behulp van een gedefinieerd EBNA-positief serum (Alfieri et al, 1996).