Transfusjonsrelatert EBV-infeksjon blant allogene stamcelletransplanterte pediatriske mottakere (TREASuRE)

Alle pasienter vil bli rekruttert ca. 1 måned før transplantasjon (før pre-transplantasjon kondisjonerende kjemoterapi og pre-kirurgi evaluering) og fulgt opp til 1 år etter transplantasjon. Dermed vil hvert fag bli fulgt opp i en 13 måneders periode. Ved innreise vil et spørreskjema dokumentere sosiodemografiske data og kliniske indikatorer før transplantasjon som alder, kjønn, primærdiagnose, tidligere kjemoterapi, tidligere transfusjon osv. Under oppfølging vil saksrapportskjemaer (CRF) tillate prospektiv rapportering av alle variabler knyttet til EBV-serologi, transplantasjon, blodprodukttransfusjon og EBV-komplikasjoner.

EBV PCR og serologitesting:

Denne studien er observasjonsbasert og vil bruke resultatene fra EBV PCR og EBV-serologi slik at våre mål kan nås med betydelig kostnadsreduksjon. Tid null er når pasienten mottar transplantatet sitt. Noen tester utføres før tid null (pre-transplantasjon av tester inkludert EBV-serologi). Etter tid null, på alle steder, er det en oppfølgingsbehandlingsprotokoll inkludert EBV PCR-testing. Pre-transplantasjonssera fra mottakere og givere testes med standardmetoder for mmunoglobulin G (IgG) antistoffer mot EBV-kapsidantigenet (VCA), IgG-antistoffer mot EBV tidlige antigener (EA) og antikomplementantistoffer mot EBV-kjerneantigenene (EBNA). EBV DNA-testing utføres ved kvantitativ polymerasekjedereaksjon (PCR). Hvert senter har en etablert terskelverdi for å bestemme virusmengden. For å kunne tolke pasientenes virusbelastningsdata fra hvert deltakende senter på riktig måte, vil alle bli bedt om å fylle ut et stedsrapportskjema (SRF) for å beskrive deres testmetode for EBV PCR og EBV-serologi.

Måling av EBV-antistoffer før transplantasjon:

Serologisk testing, inkludert EBV-seroprevalens, utføres alltid på alle deltakende steder under evalueringen før transplantasjon (før kondisjonerende kjemoterapi) hos både givere og mottakere. Serologisk testing er testen som brukes til å bekrefte tilstedeværelsen av viruset i blodet. For transplantater levert av eksterne steder, er donorblodprøver alltid tilgjengelige og vil tillate serologisk testing ved laboratoriesenteret der transplantasjonen utføres. Serologisk testing vil ikke bli utført på navlestrengsblodgiver, da den praktisk talt alltid er negativ for EBV. Donorer og mottakere vil bli klassifisert i henhold til deres serologiske status før transplantasjon som: 1) har tidligere infeksjon (VCA- og EBNA IgG-titre > 10), 2) har nylig infeksjon eller er immunsupprimert (VCA IgG-titre > 10 og EBNA IgG-titere < 10), 3) har reaktivert infeksjon (VCA, EBNA og EA IgG-titre > 10), eller 4) er naiv (ingen serologisk tegn på tidligere infeksjon).

Post-transplantasjon EBV DNA PCR-testing:

HSCT-mottakere følges nøye for EBV-infeksjon i perioden etter transplantasjon. Selv om de fleste blodprodukttransfusjoner skjer i løpet av peritransplantasjonsperioden, er det mulig at pasienter får blodprodukter på et senere tidspunkt etter transplantasjonen. Oppfølging av EBV PCR-resultater og komplikasjoner knyttet til EBV vil derfor fortsette inntil ett år etter transplantasjon (eller dødstidspunkt). Dette tidsvinduet vil tillate dokumentasjon av hele den kliniske banen til HSCT. Protokoller for oppfølging etter transplantasjon, og for diagnostisering og behandling av EBV-sykdom hos allogene transplantatmottakere er gjennomgått på alle deltakende steder. Forekomsten av EBV-infeksjon hos mottakere måles ved kvantitativ sanntids-PCR-testing utført MINIMUM hver 1-2 uke fra transplantasjonstidspunktet til sykehusutskrivning (som vanligvis er rundt 6 uker etter transplantasjon). Etter utskrivning fra sykehus utføres EBV PCR-overvåking ved hvert klinisk oppfølgingsbesøk: MINST to ganger per måned i ca. 4-6 måneder etter transplantasjon eller så lenge pasienten forblir immunsupprimert. Deretter utføres omtrent én EBV PCR per måned frem til 1 år etter transplantasjon.

I sum vil forekomsten av EBV-infeksjon være tilstrekkelig målt i løpet av en 1-års oppfølgingsperiode. På alle steder utføres MINST 1 EBV PCR-test per 1-2 uker under sykehusinnleggelse, 2 EBV PCR-tester per måned fra utskrivning fra sykehus til 6 måneder etter transplantasjon og ca. 1 EBV PCR-test per måned fra 6 måneder til 12 måneder. Det totale antallet EBV PCR-resultater som vil bli samlet inn per pasient for hele oppfølgingen vil være omtrent 18. Disse resultatene vil bli hentet fra pasientdiagrammer.

PTLD og andre komplikasjoner relatert til EBV:

Kliniske utfall som høy og økende viral belastning EBV-infeksjon og PTLD vil bli rutinemessig screenet inntil ett år etter transplantasjon. PTLD-diagnose vil bli stilt i henhold til WHO-kriterier (Swerdlow et al, 2008) basert på kliniske eller radiologiske tegn som eksisterer samtidig med en EBV-positiv PCR på blodprøver. Informasjon knyttet til PTLD vil bli samlet inn i saksrapportskjemaet. Alle andre komplikasjoner som kan være relatert til EBV (for eksempel: hemofagocytisk syndrom, hepatitt etc.) vil også bli dokumentert. En dømmende komité (C. Buteau og C Alfieri) vil gjennomgå pasientspesifikke dataelementer for å bekrefte PTLD og andre komplikasjoner relatert til EBV.

Transfunderte blodprodukter:

Data om alle transfuserte blodprodukter vil bli samlet inn og vil inkludere beskrivelser av blodproduktenheten (type blodprodukt, antall enheter, lagringslengde osv.), transfundert volum (milliliter), transfusjonens varighet, samt dato og klokkeslett for hver transfusjon. Totalt volum mottatt av hvert blodprodukt vil bli vurdert i vår analyse, så vel som antall transfusjoner.

Et områderapportskjema (SRF) vil også fylles ut av hvert deltakende senter for å dokumentere transfusjonsprotokollen, for eksempel typen blodprodukter som brukes til HSCT, leukoreduksjon, type røde blodlegemer (RBC) (vasket, bestrålt, CMV-negativ, etc.) .), type plasma (fersk frossen plasma, frossen plasma, vaskemiddelplasma med løsemiddel), type blodplatekonsentrater (aferese, sammenslått osv.), maksimal lagringslengde (dager), etc.

Bestemme kilden til EBV ved alvorlige EBV-infeksjoner:

For definitivt å demonstrere at virus fra transfuserte blodprodukter kan knyttes til alvorlige komplikasjoner som høy og økende viral belastning EBV-infeksjon/PTLD, vil vi genotype EBV-stammen fra disse pasientene. Blodenheter administrert til disse pasientene vil spores tilbake til giverne som igjen (med samtykke) vil bli serologisk vurdert for EBV, og alle seropositive givere vil få genotypet sin EBV-stamme for sammenligning med pasientens stamme. Mange blodgivere per tilfelle vil måtte spores ettersom mottakerne mottar blodprodukter fra mange blodgivere (1 enhet RBC leveres av 1 donor, 1 enhet plasma leveres av 1 donor og 1 enhet blodplate leveres av 4 donorer) . I gjennomsnitt forventet vi at om lag 25 givere må spores per sak (estimert med pilotdata; Trottier et al, 2012). Vi brukes til å spore blodgivere av graftmottakere som rapportert i Alfieri et al. (1996).

Kort prosedyre for EBV-genotyping:

10 ml blod (2 ml for infiserte pediatriske pasienter) separeres ved tetthetssentrifugering på Ficoll-hypaque-gradienter. Den mononukleære cellefraksjonen høstes, vaskes og dyrkes i nærvær av cyklosporin for å tillate utvekst av donorens EBV-positive celler og etablering av en udødeliggjort EBV-positiv B-cellelinje. Det virale DNA innenfor denne linjen kan deretter amplifiseres ved PCR ved bruk av primere fra BamHI-K-regionen til EBV-genomet, som er kjent for å være svært polymorf blant de forskjellige EBV-stammene. Fragmentene av forskjellige størrelser av det amplifiserte området kan skilles fra hverandre ved migrering på en agarosegel (Alfieri et al, 1996). For å verifisere resultatene våre for identitet mellom pasienter og blodgivere vil vi også bruke EBNA-typeteknikken som utføres ved western blot-analyse ved bruk av et definert EBNA-positivt serum (Alfieri et al, 1996).