Infection à EBV liée à la transfusion chez les receveurs pédiatriques de greffe de cellules souches allogéniques (TREASuRE)

Tous les patients seront recrutés environ 1 mois avant la transplantation (avant la chimiothérapie de conditionnement pré-transplantation et l'évaluation pré-opératoire) et suivis jusqu'à 1 an après la transplantation. Ainsi, chaque sujet sera suivi pendant une période de 13 mois. À l'entrée, un questionnaire documentera les données sociodémographiques et les indicateurs cliniques pré-transplantation tels que l'âge, le sexe, le diagnostic principal, la chimiothérapie antérieure, la transfusion antérieure, etc. Au cours du suivi, des formulaires de rapport de cas (CRF) permettront de rapporter prospectivement toutes les variables relatives à la sérologie EBV, à la transplantation, à la transfusion de produits sanguins et à la complication EBV.

Test EBV PCR et sérologie :

Cette étude est observationnelle et utilisera les résultats de la PCR EBV et de la sérologie EBV permettant d'atteindre nos objectifs avec une réduction considérable des coûts. Le temps zéro correspond au moment où le patient reçoit son greffon. Certains tests sont effectués avant le temps zéro (tableau de tests pré-transplantation incluant la sérologie EBV). Après le temps zéro, dans tous les sites, il existe un protocole de traitement de suivi comprenant un test PCR EBV. Les sérums pré-transplantation des receveurs et des donneurs sont testés par des méthodes standard pour les anticorps de la immunoglobuline G (IgG) contre l'antigène de capside de l'EBV (VCA), les anticorps IgG contre les antigènes précoces de l'EBV (EA) et les anticorps anti-complément contre les antigènes nucléaires de l'EBV (EBNA). Le test ADN EBV est effectué par réaction en chaîne par polymérase (PCR) quantitative. Chaque centre a une valeur seuil établie pour déterminer la charge virale. Afin d'interpréter correctement les données de charge virale des patients de chaque centre participant, tous devront remplir un formulaire de rapport de site (SRF) pour décrire leur méthode de test pour la PCR EBV et la sérologie EBV.

Mesure pré-transplantation des anticorps EBV :

Les tests sérologiques, y compris la séroprévalence EBV, sont toujours effectués dans tous les sites participants lors de l'évaluation pré-transplantation (avant la chimiothérapie de conditionnement) chez les donneurs et les receveurs. Le test sérologique est le test utilisé pour confirmer la présence du virus dans le sang. Pour les greffes fournies par des sites externes, des échantillons de sang de donneur sont toujours disponibles et permettront une sérologie au centre de laboratoire où la greffe est effectuée. Les tests sérologiques ne seront pas effectués sur les donneurs de sang de cordon car ils sont pratiquement toujours négatifs pour l'EBV. Les donneurs et les receveurs seront classés selon leur statut sérologique avant la greffe comme : 1) ayant une infection antérieure (titres VCA et EBNA IgG > 10), 2) ayant une infection récente ou étant immunodéprimés (titres VCA IgG > 10 et titres EBNA IgG < 10), 3) ayant réactivé l'infection (titres VCA, EBNA et EA IgG > 10), ou 4) étant naïf (pas de signe sérologique d'infection antérieure).

Test PCR ADN EBV post-transplantation :

Les receveurs de HSCT sont suivis de près pour l'infection à EBV dans la période post-transplantation. Bien que la plupart des transfusions de produits sanguins se produisent pendant la période péri-transplantation, il est possible que les patients reçoivent des produits sanguins plus tard après la transplantation. Le suivi des résultats de la PCR EBV et des complications liées à l'EBV se poursuivra donc jusqu'à un an après la greffe (ou au moment du décès). Cette fenêtre temporelle permettra de documenter l'ensemble de la trajectoire clinique de la GCSH. Les protocoles de suivi après la greffe, ainsi que pour le diagnostic et le traitement de la maladie à EBV chez les receveurs de greffe allogénique ont été revus dans tous les sites participants. L'incidence de l'infection à EBV chez les receveurs est mesurée par des tests PCR quantitatifs en temps réel effectués AU MINIMUM toutes les 1 à 2 semaines à partir du moment de la greffe jusqu'à la sortie de l'hôpital (qui est généralement d'environ 6 semaines après la greffe). Après la sortie de l'hôpital, une surveillance par PCR EBV est effectuée à chaque visite de suivi clinique : AU MOINS deux fois par mois pendant environ 4 à 6 mois après la greffe ou tant que le patient reste immunodéprimé. Par la suite, environ une PCR EBV par mois est réalisée jusqu'à 1 an après la greffe.

En somme, l'incidence de l'infection à EBV sera mesurée de manière adéquate au cours d'une période de suivi d'un an. Dans tous les sites, AU MOINS 1 test PCR EBV est effectué toutes les 1 à 2 semaines pendant l'hospitalisation, 2 tests PCR EBV par mois depuis la sortie de l'hôpital jusqu'à 6 mois après la transplantation et environ 1 test PCR EBV par mois de 6 mois à 12 mois. Le nombre total de résultats de PCR EBV qui seront collectés par patient pour l'ensemble du suivi sera d'environ 18. Ces résultats seront extraits des dossiers des patients.

PTLD et autres complications liées à l'EBV :

Les résultats cliniques tels qu'une charge virale élevée et croissante, une infection à EBV et un PTLD seront systématiquement dépistés jusqu'à un an après la greffe. Le diagnostic de PTLD sera fait selon les critères de l'OMS (Swerdlow et al, 2008) basés sur des signes cliniques ou radiologiques coexistant avec une PCR EBV-positive sur des échantillons de sang. Les informations relatives au PTLD seront collectées dans le formulaire de rapport de cas. Toutes les autres complications éventuellement liées à l'EBV (par exemple : syndrome hémophagocytaire, hépatite, etc.) seront également documentées. Un comité de sélection (C. Buteau et C Alfieri) examineront les éléments de données spécifiques au patient pour confirmer le PTLD et d'autres complications liées à l'EBV.

Produits sanguins transfusés :

Des données sur tous les produits sanguins transfusés seront recueillies et comprendront des descripteurs de l'unité de produit sanguin (type de produit sanguin, nombre d'unités, durée de stockage, etc.), le volume transfusé (millilitres), la durée de la transfusion, ainsi que la date et l'heure de chaque transfusion. Le volume total reçu de chaque produit sanguin sera pris en compte dans notre analyse ainsi que le nombre de transfusions.

Un formulaire de rapport de site (SRF) sera également rempli par chaque centre participant pour documenter son protocole de transfusion tel que le type de produits sanguins utilisés pour la GCSH, la réduction leucocytaire, le type de globules rouges (GR) (lavés, irradiés, CMV négatifs, etc. .), type de plasma (plasma frais congelé, plasma congelé, plasma solvant-détergent), type de concentrés plaquettaires (aphérèse, pool, etc.), durée maximale de conservation (jours), etc.

Détermination de la source d'EBV dans les infections graves à EBV :

Afin de démontrer définitivement que le virus provenant de produits sanguins transfusés peut être lié à des complications graves telles qu'une infection à EBV/PTLD à charge virale élevée et croissante, nous allons génotyper la souche EBV de ces patients. Les unités de sang administrées à ces patients seront retracées jusqu'aux donneurs qui à leur tour (avec leur consentement) seront évalués sérologiquement pour l'EBV, et tous les donneurs séropositifs verront leur souche d'EBV génotypée pour la comparer à la souche du patient. De nombreux donneurs de sang par cas devront être retrouvés car les receveurs reçoivent des produits sanguins de nombreux donneurs de sang (1 unité de globules rouges est fournie par 1 donneur, 1 unité de plasma est fournie par 1 donneur et 1 unité de plaquettes est fournie par 4 donneurs) . En moyenne, nous prévoyons qu'environ 25 donneurs devront être retrouvés par cas (estimation avec des données pilotes ; Trottier et al, 2012). Nous sommes utilisés pour retracer les donneurs de sang des receveurs de greffe, comme indiqué dans Alfieri et al. (1996).

Brève procédure pour le génotypage EBV :

10 ml de sang (2 ml pour les patients pédiatriques infectés) sont séparés par centrifugation de densité sur des gradients de Ficoll-hypaque. La fraction de cellules mononucléaires est récoltée, lavée et cultivée en présence de cyclosporine afin de permettre la croissance des cellules EBV-positives du donneur et l'établissement d'une lignée cellulaire B EBV-positive immortalisée. L'ADN viral au sein de cette lignée peut ensuite être amplifié par PCR en utilisant des amorces de la région BamHI-K du génome d'EBV, qui est connue pour être hautement polymorphe parmi les différentes souches d'EBV. Les fragments de tailles différentes de la région amplifiée peuvent être distingués par migration sur un gel d'agarose (Alfieri et al, 1996). Afin de vérifier nos résultats d'identité entre les patients et les donneurs de sang, nous utiliserons également la technique de typage EBNA qui est réalisée par analyse Western blot en utilisant un sérum EBNA-positif défini (Alfieri et al, 1996).