Effekten af ​​mundskylning til at reducere spyttransport af COVID-19

Projektets mål:

Mål 1: At undersøge spyttransporten af ​​COVID-19 hos individer før og efter brug af mundskyllevand, der er kendt for at reducere oral mikrobiota, ved at bruge real-time omvendt transkriptase kvantitativ PCR (Polymerase Chain Reaction) til at kvantificere viral belastning.

FORSKNINGSSTRATEGI:

A. Rekruttering og basisdata:

Dette er en tværsnitsinterventionel 4-armsundersøgelse. 60 forsøgspersoner mellem 18-80 år vil blive rekrutteret fra dem, der behandles for COVID-19 på Ohio State University Medical Center. Der er ingen data at basere stikprøvestørrelse estimater på, og efterforskere er landet på dette tal i et forsøg på at få et repræsentativt udsnit af Ohios befolkning. Hvis den potentielle forsøgsperson er interesseret i at deltage, vil studiekoordinatoren indsamle kontaktoplysninger fra kandidaten, og samtykkeformularen vil blive præsenteret for disse personer. Forsøgspersonerne vil få tilstrækkelig tid til at læse og stille spørgsmål, og når de har underskrevet disse formularer, vil en detaljeret historie, herunder oplysninger om etnicitet, uddannelse, indkomst, alder, køn, race, medicinsk status (inklusive graviditet) og tandhistorie blive fremkaldt. Forsøgspersoner vil selv opsamle spyt i et 5 ml opsamlingsrør, hvorefter de vil blive bedt om at bruge en af ​​3 mundskyllemidler (klorhexidin, povidonjod, hydrogenperoxid eller kontrol(saltvand) i tredive sekunder og spytte dem i opsamlingsrør. Efterforskere vil bruge Peridex, Hydrogenperoxid og Betadine, som er kommercielt tilgængelige formuleringer af henholdsvis chlorhexidin, hydrogenperoxid og betadin, for at reducere formuleringsbias. Efterforskere har vedhæftet produktetiketterne som bilag til dette forslag. Den nøjagtige mundskyl vil blive afgjort tilfældigt ved hjælp af en tilfældig talgenerator. Efterforskere har genereret følgende randomiseringsplan ved hjælp af Microsoft Excel: Hvert emne vil blive tildelt et nummer, efterhånden som de rekrutteres (f.eks. den første patient, der underskriver samtykket, vil være patient 1, og den anden vil være patient 2 og så videre). Patient 1 og 2 vil modtage saltvand og 3 vil modtage klorhexidin etc. baseret på ovenstående randomiseringsskema. Forsøgspersoner vil derefter opsamle spyt i separate opsamlingsglas 15 og 30 minutter efter skylning.

B. Prøveindsamling Spyt vil blive opsamlet ved hjælp af en metode beskrevet af tidligere efterforskere. Kort fortalt vil forsøgspersonerne blive bedt om at samle spyt i munden i 3 minutter og derefter kontinuerligt savle ned i et rør i 3 minutter. Denne metode vil give efterforskere mulighed for at indsamle ustimuleret spyt. Spyt vil blive opsamlet ved hjælp af kits indeholdende RNA (ribonukleinsyre) stabilisator (Oragen RNA kit).

C. Måling / Instrumentering

Total RNA vil blive isoleret fra spyt ved hjælp af mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) isoleringskit (Applied Biosystems). Mikrobielle celler vil blive lyseret, og RNA vil blive ekstraheret ved Acid-Phenol:Chloroform og ethanolpræcipitation og elueret i nukleasefrit vand. Efterforskere vil bruge velvaliderede primere til at kvantificere kopiantallet af COVID-19 spike protein mRNA (Messenger Ribonucleic Acid) fra spyttet. For en absolut kvantificering af COVID-19 vil efterforskere bruge et-trins RT-PCR (Reverse Transcriptase) assay ved at bruge et passende kommercielt tilgængeligt kit. I dette trin vil efterforskere konvertere mRNA til cDNA (komplementær deoxyribonukleinsyre) og derefter kvantificere cDNA'et ved at bruge målrettede primere, og derefter vil kopiantal af COVID-19 blive beregnet ved at sammenligne ct (cyklustærskel)-værdiprøver med standardkurve. For at generere standardkurver til absolut kvantificering vil målgener blive amplificeret med PCR. PCR-produkterne vil blive klonet ind i en passende vektor. Derefter vil plasmider blive ekstraheret, serielt fortyndet og brugt som skabeloner i qPCR (kvantitativ polymerasekædereaktion) til generering af standardkurver.

D. Intern gyldighed Emner vil blive rekrutteret tilfældigt gennem frivillig deltagelse. Dette vil eliminere præsentationsbias.

E. Dataanalyse

Beskrivende statistikker vil blive leveret som estimater af spyttransport af COVID-19. Hyppigheden af ​​spyttransport af virussen vil blive udtrykt som en procentdel af den samlede prøvepopulation. Reduktion i COVID-19 efter brug af mundskyl vil blive udtrykt som foldændring og sammenlignet mellem de tre mundskyllegrupper ved hjælp af parametriske tests.