Účinnost ústní vody při snižování přenosu slin COVID-19

Cíle projektu:

Cíl 1: Zkoumat přenos COVID-19 ve slinách u jedinců před a po použití ústních vod, o kterých je známo, že snižují ústní mikroflóru, pomocí kvantitativní PCR s reverzní transkriptázou v reálném čase (polymerázová řetězová reakce) ke kvantifikaci virové zátěže.

STRATEGIE VÝZKUMU:

A. Nábor a základní údaje:

Toto je průřezová intervenční čtyřramenná studie. Z těch, kteří se léčí na COVID-19 v Ohio State University Medical Center, bude vybráno 60 subjektů ve věku 18-80 let. Neexistují žádná data, na kterých by bylo možné založit odhady velikosti vzorku, a vyšetřovatelé přistáli na tomto čísle ve snaze získat reprezentativní vzorek populace Ohia. Pokud má potenciální subjekt zájem o účast, koordinátor studie shromáždí od kandidáta kontaktní údaje a těmto osobám bude předložen formulář souhlasu. Subjektům bude poskytnut dostatek času na přečtení a kladení otázek a po podepsání těchto formulářů bude získána podrobná anamnéza včetně informací o etnickém původu, vzdělání, příjmu, věku, pohlaví, rase, zdravotním stavu (včetně těhotenství) a zubní anamnéze. Subjekty si samy odeberou sliny do 5ml odběrové zkumavky, poté budou požádány, aby použily jednu ze 3 ústních vod (chlorhexidin, povidon jod, peroxid vodíku nebo kontrolní (fyziologický roztok) po dobu třiceti sekund a vyplivly je do odběrových zkumavek. Vyšetřovatelé použijí Peridex, peroxid vodíku a Betadine, což jsou komerčně dostupné formulace chlorhexidinu, peroxidu vodíku a betadinu, aby se snížilo zkreslení formulace. Vyšetřovatelé připojili štítky produktů jako přílohy k tomuto návrhu. O přesné ústní vodě rozhodne náhodná náhoda pomocí generátoru náhodných čísel. Vyšetřovatelé vygenerovali následující plán randomizace pomocí aplikace Microsoft Excel: Každému subjektu bude při náboru přiděleno číslo (např. prvním pacientem, který podepíše souhlas, bude pacient 1 a druhým pacientem 2 atd.). Pacienti 1 a 2 dostanou fyziologický roztok a 3 dostanou chlorhexidin atd. podle výše uvedeného randomizačního schématu. Subjekty poté odeberou sliny do samostatných odběrových zkumavek 15 a 30 minut po opláchnutí.

B. Odběr vzorku Sliny budou odebrány pomocí metodologie popsané předchozími výzkumníky. Stručně řečeno, subjekty budou požádány, aby sbíraly sliny v ústech po dobu 3 minut a poté nepřetržitě slintaly do zkumavky po dobu 3 minut. Tato metoda umožní vyšetřovatelům sbírat nestimulované sliny. Sliny budou odebírány pomocí souprav obsahujících stabilizátor RNA (Ribonucleic Acid) (souprava Oragen RNA).

C. Měření / Instrumentace

Celková RNA bude izolována ze slin pomocí izolační sady mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) (Applied Biosystems). Mikrobiální buňky budou lyžovány a RNA bude extrahována precipitací Acid-Phenol:Chloroform a ethanol a eluována ve vodě bez nukleázy. Vyšetřovatelé použijí dobře ověřené primery ke kvantifikaci počtu kopií mRNA spike proteinu COVID-19 (Messenger Ribonucleic Acid) ze slin. Pro absolutní kvantifikaci COVID-19 použijí výzkumníci jednokrokový test RT-PCR (reverzní transkriptáza) s použitím vhodné komerčně dostupné soupravy. V tomto kroku výzkumníci převedou mRNA na cDNA (komplementární deoxyribonukleovou kyselinu) a poté cDNA kvantifikují pomocí cílených primerů a poté se vypočte počet kopií COVID-19 porovnáním vzorků hodnot ct (prahová hodnota cyklu) se standardní křivkou. Za účelem vytvoření standardních křivek pro absolutní kvantifikaci budou cílové geny amplifikovány pomocí PCR. Produkty PCR budou klonovány do vhodného vektoru. Poté budou plazmidy extrahovány, sériově zředěny a použity jako templáty v qPCR (kvantitativní polymerázová řetězová reakce) pro generování standardních křivek.

D. Interní platnost Subjekty budou získávány náhodně prostřednictvím dobrovolné účasti. Tím se odstraní zkreslení prezentace.

E. Analýza dat

Jako odhady přenosu COVID-19 slinami budou poskytnuty popisné statistiky. Frekvence přenosu viru slinami bude vyjádřena jako procento z celkové populace vzorku. Snížení COVID-19 po použití ústní vody bude vyjádřeno jako násobná změna a porovnáno mezi třemi skupinami ústních vod pomocí parametrických testů.