Werkzaamheid van mondwater bij het verminderen van speekseldragers van COVID-19

Projectdoelstellingen:

Doel 1: Het speekseltransport van COVID-19 onderzoeken bij personen voor en na het gebruik van mondspoelingen waarvan bekend is dat ze de orale microbiota verminderen, met behulp van real-time reverse transcriptase kwantitatieve PCR (Polymerase Chain Reaction) om de virale belasting te kwantificeren.

ONDERZOEKSSTRATEGIE:

A. Werving en basisgegevens:

Dit is een cross-sectionele interventionele 4-armige studie. Er zullen 60 proefpersonen tussen de 18 en 80 jaar worden gerekruteerd uit degenen die worden behandeld voor COVID-19 in het Ohio State University Medical Center. Er zijn geen gegevens waarop schattingen van de steekproefomvang kunnen worden gebaseerd, en onderzoekers zijn op dit aantal uitgekomen in een poging een representatieve steekproef van de bevolking van Ohio te verkrijgen. Als de potentiële proefpersoon geïnteresseerd is in deelname, verzamelt de studiecoördinator contactgegevens van de kandidaat en wordt het toestemmingsformulier aan deze personen gepresenteerd. De proefpersonen krijgen voldoende tijd om te lezen en vragen te stellen, en zodra deze formulieren zijn ondertekend, wordt een gedetailleerde geschiedenis weergegeven, inclusief informatie over etniciteit, opleiding, inkomen, leeftijd, geslacht, ras, medische status (inclusief zwangerschap) en tandheelkundige geschiedenis. Proefpersonen verzamelen zelf speeksel in een verzamelbuisje van 5 ml, waarna hen wordt gevraagd om gedurende dertig seconden een van de drie mondwaters (chloorhexidine, povidonjodium, waterstofperoxide of controle (zoutoplossing)) te gebruiken en dit in verzamelbuisjes te spugen. Onderzoekers zullen Peridex, Waterstofperoxide en Betadine gebruiken, dit zijn in de handel verkrijgbare formuleringen van respectievelijk chloorhexidine, waterstofperoxide en betadine, om formuleringsbias te verminderen. Onderzoekers hebben de productetiketten als bijlagen bij dit voorstel gevoegd. De exacte mondspoeling wordt willekeurig bepaald met behulp van een generator voor willekeurige getallen. Onderzoekers hebben het volgende randomiseringsschema gegenereerd met behulp van Microsoft Excel: Elke proefpersoon krijgt een nummer toegewezen wanneer ze worden gerekruteerd (bijv. de eerste patiënt die de toestemming ondertekent, is patiënt 1, en de tweede patiënt 2 enzovoort). Patiënten 1 en 2 krijgen zoutoplossing en 3 krijgen chloorhexidine etc. op basis van het bovenstaande randomisatieschema. De proefpersonen verzamelen vervolgens 15 en 30 minuten na het spoelen speeksel in aparte opvangbuizen.

B. Monsterafname Speeksel wordt verzameld met behulp van een methode die is beschreven door eerdere onderzoekers. In het kort wordt proefpersonen gevraagd om gedurende 3 minuten speeksel in hun mond te verzamelen en vervolgens gedurende 3 minuten continu in een buis te kwijlen. Met deze methode kunnen onderzoekers ongestimuleerd speeksel verzamelen. Speeksel wordt verzameld met behulp van kits die RNA (ribonucleïnezuur)-stabilisator bevatten (Oragen RNA-kit).

C. Meting / instrumentatie

Totaal RNA zal worden geïsoleerd uit speeksel met behulp van de mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) isolatiekit (Applied Biosystems). Microbiële cellen zullen worden gelyseerd en RNA zal worden geëxtraheerd door zuur-fenol:chloroform en ethanolprecipitatie en geëlueerd in nucleasevrij water. Onderzoekers zullen goed gevalideerde primers gebruiken om het aantal kopieën van COVID-19-spike-eiwit-mRNA (Messenger Ribonucleic Acid) uit het speeksel te kwantificeren. Voor een absolute kwantificering van COVID-19 zullen onderzoekers eenstaps RT-PCR-assay (Reverse Transcriptase) gebruiken met behulp van een geschikte in de handel verkrijgbare kit. In deze stap zullen onderzoekers mRNA omzetten in cDNA (complementair desoxyribonucleïnezuur) en vervolgens het cDNA kwantificeren met behulp van gerichte primers en vervolgens zullen kopieaantallen van de COVID-19 worden berekend door ct (cyclusdrempel) waardenmonsters te vergelijken met standaardcurve. Om standaardcurven voor absolute kwantificering te genereren, zullen doelwitgenen worden geamplificeerd met PCR. De PCR-producten zullen in een geschikte vector worden gekloneerd. Vervolgens worden plasmiden geëxtraheerd, serieel verdund en gebruikt als sjablonen in qPCR (kwantitatieve polymerasekettingreactie) voor het genereren van standaardcurven.

D. Interne validiteit Proefpersonen worden willekeurig geworven door middel van vrijwillige deelname. Dit voorkomt presentatiebias.

E. Gegevensanalyse

Beschrijvende statistieken zullen worden verstrekt als schattingen van speekseldragerschap van COVID-19. Frequentie van speekseldragerschap van het virus wordt uitgedrukt als een percentage van de totale steekproefpopulatie. Vermindering van COVID-19 na gebruik van mondwater zal worden uitgedrukt als vouwverandering en vergeleken tussen de drie mondwatergroepen met behulp van parametrische tests.