Suuveden teho vähentää COVID-19:n syljen kantamista

Hankkeen tavoitteet:

Tavoite 1: Tutkia COVID-19:n syljen kantamista yksilöillä ennen ja jälkeen suuvesien käytön, joiden tiedetään vähentävän suun mikrobiotaa, käyttämällä reaaliaikaista käänteiskopioijaentsyymin kvantitatiivista PCR:ää (polymerase Chain Reaction) viruskuorman määrittämiseen.

TUTKIMUSSTRATEGIA:

A. Rekrytointi- ja perustiedot:

Tämä on poikkileikkausinterventiotutkimus, jossa on neljä kättä. Ohion osavaltion yliopiston lääketieteellisessä keskuksessa COVID-19-tautia hoidettavien joukosta rekrytoidaan 60 18–80-vuotiasta henkilöä. Ei ole olemassa tietoja, joihin otoskokoarvioita voitaisiin perustaa, ja tutkijat ovat päätyneet tähän numeroon saadakseen edustavan otoksen Ohion väestöstä. Jos mahdollinen tutkittava on kiinnostunut osallistumaan, opintokoordinaattori kerää hakijan yhteystiedot ja suostumuslomake esitetään näille henkilöille. Koehenkilöille annetaan riittävästi aikaa lukea ja esittää kysymyksiä, ja kun nämä lomakkeet ovat allekirjoittaneet, he saavat yksityiskohtaisen historian, joka sisältää tiedot etnisestä alkuperästä, koulutuksesta, tuloista, iästä, sukupuolesta, rodusta, lääketieteellisestä tilasta (mukaan lukien raskaus) ja hammashistoriasta. Koehenkilöt keräävät itse sylkeä 5 ml:n keräysputkeen, minkä jälkeen heitä pyydetään käyttämään yhtä kolmesta suuvedestä (klooriheksidiini, povidonijodi, vetyperoksidi tai kontrolli (suolaliuos) 30 sekunnin ajan ja sylkemään ne keräysputkiin. Tutkijat käyttävät Peridexiä, vetyperoksidia ja betadiinia, jotka ovat kaupallisesti saatavilla olevia klooriheksidiinin, vetyperoksidin ja betadiinin formulaatioita, vähentämään formulaatiovirheitä. Tutkijat ovat liittäneet tuotteen etiketit tämän ehdotuksen liitteiksi. Tarkka suuvesi määräytyy sattumanvaraisesti satunnaislukugeneraattorin avulla. Tutkijat ovat luoneet seuraavan satunnaistamisaikataulun Microsoft Excelillä: Jokaiselle koehenkilölle annetaan numero, kun heidät rekrytoidaan (esim. Ensimmäinen suostumuksen allekirjoittava potilas on potilas 1 ja toinen potilas 2 ja niin edelleen). Potilaat 1 ja 2 saavat suolaliuosta ja 3 klooriheksidiiniä jne. edellä olevan satunnaistusohjelman perusteella. Koehenkilöt keräävät sitten sylkeä erillisiin keräysputkiin 15 ja 30 minuuttia huuhtelun jälkeen.

B. Näytteenotto Sylki kerätään käyttämällä aikaisempien tutkijoiden kuvaamaa menetelmää. Lyhyesti sanottuna koehenkilöitä pyydetään keräämään sylkeä suuhunsa 3 minuutin ajan ja kuolaamaan sitten jatkuvasti putkeen 3 minuutin ajan. Tämän menetelmän avulla tutkijat voivat kerätä stimuloimatonta sylkeä. Sylki kerätään käyttämällä RNA:n (ribonukleiinihappo) stabilointiainetta (Oragen RNA kit) sisältäviä sarjoja.

C. Mittaus/instrumentointi

Kokonais-RNA eristetään syljestä käyttämällä mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) -eristyspakkausta (Applied Biosystems). Mikrobisolut hajotetaan ja RNA uutetaan happo-fenoli:kloroformi- ja etanolisaostuksella ja eluoidaan nukleaasivapaassa vedessä. Tutkijat käyttävät hyvin validoituja alukkeita COVID-19-piikkiproteiinin mRNA:n (Messenger Ribonukleiinihapon) kopiomäärän kvantifioimiseksi syljestä. COVID-19:n absoluuttiseen kvantifiointiin tutkijat käyttävät yksivaiheista RT-PCR (käänteiskopioijaentsyymi) -määritystä käyttämällä sopivaa kaupallisesti saatavilla olevaa pakkausta. Tässä vaiheessa tutkijat muuntavat mRNA:n cDNA:ksi (komplementaarinen deoksiribonukleiinihappo) ja määrittävät sitten cDNA:n kvantitatiivisesti käyttämällä kohdistettuja alukkeita, minkä jälkeen COVID-19:n kopiomäärät lasketaan vertaamalla ct-arvoja (syklin kynnysarvo) näytteitä standardikäyrään. Standardikäyrien muodostamiseksi absoluuttista kvantifiointia varten kohdegeenit monistetaan PCR:llä. PCR-tuotteet kloonataan sopivaan vektoriin. Sitten plasmidit uutetaan, sarjalaimennetaan ja niitä käytetään templaatteina qPCR:ssä (kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio) standardikäyrien muodostamiseksi.

D. Sisäinen kelpoisuus Tutkittavat rekrytoidaan satunnaisesti vapaaehtoisen osallistumisen kautta. Tämä eliminoi esitysharhan.

E. Tietojen analyysi

Kuvaavat tilastot toimitetaan arvioina COVID-19:n syljen kantamisesta. Viruksen syljenkantautumistiheys ilmaistaan ​​prosentteina koko näytepopulaatiosta. COVID-19:n väheneminen suuveden käytön jälkeen ilmaistaan ​​käänteismuutoksina, ja sitä verrataan kolmen suuvesiryhmän välillä parametristen testien avulla.