Efficacité du rince-bouche pour réduire le portage salivaire du COVID-19

Objectifs du projet :

Objectif 1 : Examiner le portage salivaire du COVID-19 chez les individus avant et après l'utilisation de bains de bouche connus pour réduire le microbiote oral, en utilisant la PCR quantitative en temps réel de la transcriptase inverse (Polymerase Chain Reaction) pour quantifier la charge virale.

STRATÉGIE DE RECHERCHE :

A. Recrutement et données de base :

Il s'agit d'une étude interventionnelle transversale à 4 bras. 60 sujets âgés de 18 à 80 ans seront recrutés parmi ceux qui sont traités pour COVID-19 au Ohio State University Medical Center. Il n'y a pas de données sur lesquelles baser les estimations de la taille de l'échantillon, et les enquêteurs ont atterri sur ce nombre dans le but d'obtenir un échantillon représentatif de la population de l'Ohio. Si le sujet potentiel est intéressé à participer, le coordinateur de l'étude recueillera les coordonnées du candidat et le formulaire de consentement sera présenté à ces personnes. Les sujets auront suffisamment de temps pour lire et poser des questions, et une fois ces formulaires signés, un historique détaillé comprenant des informations sur l'origine ethnique, l'éducation, le revenu, l'âge, le sexe, la race, l'état médical (y compris la grossesse) et les antécédents dentaires sera obtenu. Les sujets recueilleront eux-mêmes la salive dans un tube de prélèvement de 5 ml, après quoi il leur sera demandé d'utiliser l'un des 3 bains de bouche (chlorhexidine, povidone iodée, peroxyde d'hydrogène ou témoin (solution saline) pendant trente secondes et de les cracher dans des tubes de prélèvement. Les enquêteurs utiliseront Peridex, le peroxyde d'hydrogène et la bétadine, qui sont respectivement des formulations disponibles dans le commerce de chlorhexidine, de peroxyde d'hydrogène et de bétadine, pour réduire le biais de formulation. Les enquêteurs ont joint les étiquettes des produits en annexe à cette proposition. Le rince-bouche exact sera décidé au hasard à l'aide d'un générateur de nombres aléatoires. Les enquêteurs ont généré le calendrier de randomisation suivant à l'aide de Microsoft Excel : Chaque sujet se verra attribuer un numéro au fur et à mesure de son recrutement (par ex. le premier patient à signer le consentement sera le patient 1, et le deuxième sera le patient 2 et ainsi de suite). Les patients 1 et 2 recevront une solution saline et 3 recevront de la chlorhexidine, etc. sur la base du calendrier de randomisation ci-dessus. Les sujets recueilleront ensuite la salive dans des tubes de collecte séparés 15 et 30 minutes après le rinçage.

B. Collecte d'échantillons La salive sera collectée en utilisant une méthodologie décrite par des chercheurs précédents. En bref, les sujets seront invités à recueillir la salive dans leur bouche pendant 3 minutes, puis à baver continuellement dans un tube pendant 3 minutes. Cette méthode permettra aux enquêteurs de recueillir de la salive non stimulée. La salive sera collectée à l'aide de kits contenant un stabilisateur d'ARN (acide ribonucléique) (kit Oragen RNA).

C. Mesure / Instrumentation

L'ARN total sera isolé de la salive à l'aide du kit d'isolement mirVana miARN (acide ribonucléique messager) (Applied Biosystems). Les cellules microbiennes seront lysées et l'ARN sera extrait par précipitation acide-phénol: chloroforme et éthanol et élué dans de l'eau sans nucléase. Les enquêteurs utiliseront des amorces bien validées pour quantifier le nombre de copies de l'ARNm de la protéine de pointe COVID-19 (acide ribonucléique messager) de la salive. Pour une quantification absolue du COVID-19, les chercheurs utiliseront un test RT-PCR (transcriptase inverse) en une étape en utilisant un kit approprié disponible dans le commerce. Dans cette étape, les enquêteurs convertiront l'ARNm en ADNc (acide désoxyribonucléique complémentaire), puis quantifieront l'ADNc en utilisant des amorces ciblées, puis le nombre de copies du COVID-19 sera calculé en comparant les échantillons de valeurs ct (seuil de cycle) à la courbe standard. Afin de générer des courbes standard pour la quantification absolue, les gènes cibles seront amplifiés par PCR. Les produits de PCR seront clonés dans un vecteur approprié. Ensuite, les plasmides seront extraits, dilués en série et utilisés comme modèles dans qPCR (réaction en chaîne par polymérase quantitative) pour générer des courbes standard.

D. Validité interne Les sujets seront recrutés au hasard sur la base d'une participation volontaire. Cela éliminera les biais de présentation.

E. Analyse des données

Des statistiques descriptives seront fournies sous forme d'estimations du portage salivaire de la COVID-19. La fréquence du portage salivaire du virus sera exprimée en pourcentage de la population totale de l'échantillon. La réduction du COVID-19 après l'utilisation d'un rince-bouche sera exprimée sous forme de changement de pli et comparée entre les trois groupes de rince-bouche à l'aide de tests paramétriques.