Wirksamkeit von Mundwasser bei der Reduzierung des Speicheltransports von COVID-19

Projektziele:

Ziel 1: Untersuchung des Speicheltransports von COVID-19 bei Personen vor und nach der Verwendung von Mundspülungen, von denen bekannt ist, dass sie die orale Mikrobiota reduzieren, unter Verwendung von quantitativer Reverse-Transkriptase-PCR (Polymerase-Kettenreaktion) in Echtzeit zur Quantifizierung der Viruslast.

FORSCHUNGSSTRATEGIE:

A. Rekrutierungs- und Ausgangsdaten:

Dies ist eine interventionelle 4-Arm-Querschnittsstudie. 60 Probanden im Alter zwischen 18 und 80 Jahren werden aus denen rekrutiert, die am Ohio State University Medical Center wegen COVID-19 behandelt werden. Es gibt keine Daten, auf die sich Schätzungen der Stichprobengröße stützen könnten, und die Ermittler sind auf diese Zahl gelandet, um eine repräsentative Stichprobe der Bevölkerung von Ohio zu erhalten. Wenn der potenzielle Proband an einer Teilnahme interessiert ist, sammelt der Studienkoordinator Kontaktinformationen vom Kandidaten und die Einverständniserklärung wird diesen Personen vorgelegt. Den Probanden wird ausreichend Zeit zum Lesen und Stellen von Fragen eingeräumt, und sobald sie diese Formulare unterschrieben haben, wird eine detaillierte Anamnese einschließlich Informationen über ethnische Zugehörigkeit, Bildung, Einkommen, Alter, Geschlecht, Rasse, Gesundheitszustand (einschließlich Schwangerschaft) und Zahnanamnese erhoben. Die Probanden sammeln Speichel selbst in einem 5-ml-Sammelröhrchen, woraufhin sie gebeten werden, eine von 3 Mundspülungen (Chlorhexidin, Povidon-Jod, Wasserstoffperoxid oder Kontrolle (Kochsalzlösung)) 30 Sekunden lang zu verwenden und sie in Sammelröhrchen zu spucken. Die Ermittler werden Peridex, Wasserstoffperoxid und Betadin verwenden, die im Handel erhältliche Formulierungen von Chlorhexidin, Wasserstoffperoxid bzw. Betadin sind, um Formulierungsfehler zu reduzieren. Die Ermittler haben die Produktetiketten als Anhänge zu diesem Vorschlag beigefügt. Die genaue Mundspülung wird zufällig mit einem Zufallszahlengenerator bestimmt. Die Ermittler haben den folgenden Randomisierungsplan mit Microsoft Excel erstellt: Jedem Probanden wird bei der Rekrutierung eine Nummer zugewiesen (z. Der erste Patient, der die Einwilligung unterschreibt, ist Patient 1, der zweite Patient 2 und so weiter). Die Patienten 1 und 2 erhalten Kochsalzlösung und 3 erhalten Chlorhexidin usw., basierend auf dem oben genannten Randomisierungsplan. Die Probanden sammeln dann 15 und 30 Minuten nach dem Spülen Speichel in getrennten Sammelröhrchen.

B. Probenentnahme Speichel wird unter Verwendung einer von früheren Forschern beschriebenen Methode gesammelt. Kurz gesagt, die Probanden werden gebeten, 3 Minuten lang Speichel in ihrem Mund zu sammeln und dann 3 Minuten lang kontinuierlich in ein Röhrchen zu sabbern. Diese Methode ermöglicht es den Ermittlern, nicht stimulierten Speichel zu sammeln. Speichel wird mit Kits gesammelt, die RNA (Ribonukleinsäure)-Stabilisator enthalten (Oragen RNA-Kit).

C. Messung / Instrumentierung

Gesamt-RNA wird aus Speichel mit dem mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) Isolationskit (Applied Biosystems) isoliert. Mikrobielle Zellen werden lysiert und RNA wird durch Säure-Phenol:Chloroform- und Ethanolfällung extrahiert und in Nuklease-freiem Wasser eluiert. Die Ermittler werden gut validierte Primer verwenden, um die Kopienzahl der COVID-19-Spike-Protein-mRNA (Messenger-Ribonukleinsäure) aus dem Speichel zu quantifizieren. Für eine absolute Quantifizierung von COVID-19 verwenden die Ermittler einen einstufigen RT-PCR-Test (Reverse Transcriptase) unter Verwendung eines geeigneten im Handel erhältlichen Kits. In diesem Schritt wandeln die Ermittler mRNA in cDNA (komplementäre Desoxyribonukleinsäure) um und quantifizieren dann die cDNA mithilfe von gezielten Primern. Anschließend werden die Kopienzahlen von COVID-19 berechnet, indem die ct-Werte (Zyklusschwellenwert) der Proben mit der Standardkurve verglichen werden. Um Standardkurven für die absolute Quantifizierung zu erstellen, werden Zielgene mittels PCR amplifiziert. Die PCR-Produkte werden in einen geeigneten Vektor kloniert. Anschließend werden Plasmide extrahiert, seriell verdünnt und als Templates in der qPCR (quantitative Polymerase-Kettenreaktion) zur Erstellung von Standardkurven verwendet.

D. Interne Gültigkeit Die Probanden werden nach dem Zufallsprinzip durch freiwillige Teilnahme rekrutiert. Dadurch wird die Darstellungsverzerrung beseitigt.

E. Datenanalyse

Deskriptive Statistiken werden als Schätzungen des Speicheltransports von COVID-19 bereitgestellt. Die Häufigkeit der Übertragung des Virus im Speichel wird als Prozentsatz der gesamten Probenpopulation ausgedrückt. Die Reduktion von COVID-19 nach der Verwendung von Mundwasser wird als fache Änderung ausgedrückt und zwischen den drei Mundwassergruppen unter Verwendung parametrischer Tests verglichen.