Efficacia del collutorio nella riduzione del trasporto salivare di COVID-19

Obiettivi del progetto:

Obiettivo 1: esaminare il trasporto salivare di COVID-19 negli individui prima e dopo l'uso di collutori noti per ridurre il microbiota orale, utilizzando la PCR quantitativa della trascrittasi inversa in tempo reale (reazione a catena della polimerasi) per quantificare la carica virale.

STRATEGIA DI RICERCA:

A. Reclutamento e dati di riferimento:

Questo è uno studio interventistico trasversale a 4 bracci. Verranno reclutati 60 soggetti di età compresa tra i 18 e gli 80 anni tra coloro che sono in cura per COVID-19 presso l'Ohio State University Medical Center. Non ci sono dati su cui basare le stime della dimensione del campione e gli investigatori sono approdati a questo numero nel tentativo di ottenere un campione rappresentativo della popolazione dell'Ohio. Se il potenziale soggetto è interessato a partecipare, il coordinatore dello studio raccoglierà le informazioni di contatto dal candidato e il modulo di consenso sarà presentato a queste persone. Ai soggetti verrà concesso tempo sufficiente per leggere e porre domande e, una volta firmati questi moduli, verrà raccolta una storia dettagliata che includa informazioni su etnia, istruzione, reddito, età, sesso, razza, stato medico (compresa la gravidanza) e anamnesi dentale. I soggetti raccoglieranno autonomamente la saliva in un tubo di raccolta da 5 ml, dopodiché verrà chiesto loro di utilizzare uno dei 3 collutori (clorexidina, iodio povidone, perossido di idrogeno o controllo (soluzione salina) per trenta secondi e sputarli in tubi di raccolta. Gli investigatori useranno Peridex, perossido di idrogeno e Betadine, che sono rispettivamente formulazioni disponibili in commercio di clorexidina, perossido di idrogeno e betadina, per ridurre la distorsione della formulazione. Gli investigatori hanno allegato le etichette del prodotto come appendici a questa proposta. Il collutorio esatto verrà deciso casualmente utilizzando un generatore di numeri casuali. Gli investigatori hanno generato il seguente programma di randomizzazione utilizzando Microsoft Excel: a ogni soggetto verrà assegnato un numero man mano che vengono reclutati (ad es. il primo paziente a firmare il consenso sarà il paziente 1, il secondo sarà il paziente 2 e così via). I pazienti 1 e 2 riceveranno soluzione salina e 3 riceveranno clorexidina ecc. in base al programma di randomizzazione di cui sopra. I soggetti raccoglieranno quindi la saliva in tubi di raccolta separati 15 e 30 minuti dopo il risciacquo.

B. Raccolta del campione La saliva verrà raccolta utilizzando una metodologia descritta dai precedenti investigatori. In breve, ai soggetti verrà chiesto di raccogliere la saliva in bocca per 3 minuti e poi di sbavare continuamente in un tubo per 3 minuti. Questo metodo consentirà agli investigatori di raccogliere la saliva non stimolata. La saliva sarà raccolta utilizzando kit contenenti stabilizzatore di RNA (acido ribonucleico) (Oragen RNA kit).

C. Misurazione / Strumentazione

L'RNA totale sarà isolato dalla saliva utilizzando il kit di isolamento mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) (Applied Biosystems). Le cellule microbiche saranno lisate e l'RNA estratto mediante precipitazione acido-fenolo-cloroformio ed etanolo ed eluito in acqua priva di nucleasi. Gli investigatori utilizzeranno primer ben convalidati per quantificare il numero di copie dell'mRNA della proteina spike COVID-19 (acido ribonucleico messaggero) dalla saliva. Per una quantificazione assoluta di COVID-19, gli investigatori utilizzeranno un test RT-PCR (Reverse Transcriptase) in un passaggio utilizzando un kit appropriato disponibile in commercio. In questa fase gli investigatori convertiranno l'mRNA in cDNA (acido desossiribonucleico complementare) e quindi quantificheranno il cDNA utilizzando primer mirati e quindi i numeri di copia del COVID-19 saranno calcolati confrontando i campioni di valori ct (soglia del ciclo) con la curva standard. Al fine di generare curve standard per la quantificazione assoluta, i geni target saranno amplificati mediante PCR. I prodotti di PCR saranno clonati in un vettore adatto. Quindi i plasmidi verranno estratti, diluiti in serie e utilizzati come templati in qPCR (reazione quantitativa a catena della polimerasi) per la generazione di curve standard.

D. Validità interna I soggetti saranno reclutati in modo casuale attraverso la partecipazione volontaria. Ciò eliminerà il bias di presentazione.

E. Analisi dei dati

Saranno fornite statistiche descrittive come stime del trasporto salivare di COVID-19. La frequenza di trasporto salivare del virus sarà espressa come percentuale della popolazione totale del campione. La riduzione del COVID-19 dopo l'uso del collutorio sarà espressa come cambiamento di piega e confrontata tra i tre gruppi di collutorio utilizzando test parametrici.