Effekten av munvatten för att minska salivtransport av covid-19

Projektets mål:

Syfte 1: Att undersöka salivtransporten av COVID-19 hos individer före och efter användning av munvatten som är kända för att minska oral mikrobiota, genom att använda kvantitativ PCR för omvänt transkriptas i realtid (Polymerase Chain Reaction) för att kvantifiera viral belastning.

FORSKNINGSSTRATEGI:

A. Rekrytering och baslinjedata:

Detta är en tvärsnittsinterventionell 4-armsstudie. 60 försökspersoner mellan 18-80 år kommer att rekryteras från dem som behandlas för covid-19 vid Ohio State University Medical Center. Det finns inga data att basera uppskattningar av urvalsstorleken på, och utredare har landat på detta antal i ett försök att få ett representativt urval av Ohios befolkning. Om den potentiella försökspersonen är intresserad av att delta, kommer studiekoordinatorn att samla in kontaktinformation från kandidaten och samtyckesformuläret kommer att presenteras för dessa personer. Ämnen kommer att få tillräckligt med tid att läsa och ställa frågor, och när de har skrivit under dessa formulär kommer en detaljerad historia inklusive information om etnicitet, utbildning, inkomst, ålder, kön, ras, medicinsk status (inklusive graviditet) och tandhistoria att framkallas. Försökspersonerna kommer själv att samla saliv i ett 5 ml uppsamlingsrör, varefter de kommer att uppmanas att använda ett av tre munvatten (klorhexidin, povidonjod, väteperoxid eller kontroll(saltlösning)) i trettio sekunder och spotta dem i uppsamlingsrören. Utredarna kommer att använda Peridex, Hydrogen Peroxide och Betadine, som är kommersiellt tillgängliga formuleringar av klorhexidin, väteperoxid respektive betadine, för att minska formuleringsbias. Utredarna har bifogat produktetiketterna som bilagor till detta förslag. Den exakta munvatten kommer att avgöras av en slump med hjälp av en slumptalsgenerator. Utredarna har skapat följande randomiseringsschema med hjälp av Microsoft Excel: Varje ämne kommer att tilldelas ett nummer när de rekryteras (t.ex. den första patienten som undertecknar samtycket kommer att vara patient 1, och den andra kommer att vara patient 2 och så vidare). Patient 1 och 2 kommer att få koksaltlösning och 3 kommer att få klorhexidin etc. baserat på ovanstående randomiseringsschema. Försökspersonerna kommer sedan att samla saliv i separata uppsamlingsrör 15 och 30 minuter efter sköljning.

B. Provtagning Saliv kommer att samlas in med hjälp av en metod som beskrivits av tidigare utredare. Kortfattat kommer försökspersonerna att uppmanas att samla saliv i munnen i 3 minuter och sedan kontinuerligt dregla in i ett rör i 3 minuter. Denna metod kommer att tillåta utredare att samla ostimulerad saliv. Saliv kommer att samlas in med hjälp av kit som innehåller RNA (ribonukleinsyra) stabilisator (Oragen RNA kit).

C. Mätning / Instrumentering

Totalt RNA kommer att isoleras från saliv med hjälp av mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) isoleringskit (Applied Biosystems). Mikrobiella celler kommer att lyseras och RNA kommer att extraheras genom syra-fenol:kloroform och etanolfällning och elueras i nukleasfritt vatten. Utredarna kommer att använda väl validerade primers för att kvantifiera antal kopior av COVID-19 spike protein mRNA (Messenger Ribonucleic Acid) från saliven. För en absolut kvantifiering av COVID-19 kommer utredarna att använda enstegs RT-PCR-analys (omvänt transkriptas) genom att använda ett lämpligt kommersiellt tillgängligt kit. I det här steget kommer utredarna att omvandla mRNA till cDNA (komplementär deoxiribonukleinsyra) och sedan kvantifiera cDNA:t genom att använda riktade primers och sedan kommer kopiantalet av COVID-19 att beräknas genom att jämföra ct (cykeltröskel)-värdenprover mot standardkurvan. För att generera standardkurvor för absolut kvantifiering kommer målgener att amplifieras med PCR. PCR-produkterna kommer att klonas in i lämplig vektor. Därefter kommer plasmider att extraheras, serieutspädas och användas som mallar i qPCR (kvantitativ polymeraskedjereaktion) för att generera standardkurvor.

D. Intern giltighet Ämnen kommer att rekryteras slumpmässigt genom frivilligt deltagande. Detta kommer att eliminera presentationsbias.

E. Dataanalys

Beskrivande statistik kommer att tillhandahållas som uppskattningar av salivtransport av covid-19. Frekvensen av salivtransport av viruset kommer att uttryckas som en procent av den totala provpopulationen. Minskningen av covid-19 efter användning av munvatten kommer att uttryckas som veckförändring och jämföras mellan de tre munvattengrupperna med hjälp av parametriska tester.